利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究

研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。     

安庆六白猪和梅山猪成纤维细胞体外培养与生物学特性

为探索借助细胞培养技术开展地方良种猪遗传资源保护,以30日龄安庆六白猪耳缘皮肤组织和妊娠40 d左右梅山猪胎儿皮肤组织为材料,采取组织块接种培养法及胰蛋白酶消化法分离培养成纤维细胞,并对所获得的细胞系的体外培养生物学特性进行检测,包括细胞形态学观察和生长曲线绘制.结果表明:获得的安庆六白猪和梅山猪细胞系符合成纤维细胞的...     

重口裂腹鱼的胚胎发育观察

2017年、2018年对采自毛尔盖水电站鱼类增殖站内的重口裂腹鱼(Schizothorax davidi)进行人工繁殖,并对其胚胎发育特征进行观察。结果显示,重口裂腹鱼鱼卵为黄色、微黏性,卵径为(2.91±0.29) mm,鱼卵吸水后直径为(3.99±0.31) mm;在水温为(14.5±1.2)℃的条件下经217 h 20 min孵化出膜,有效积温为665.27℃·h,胚胎发育生物学零度为(11.30±0.06)℃,初孵仔鱼全长为(11.00±0.18) mm。     

可溶性Sox2-11R重组蛋白的制备与鉴定

旨在通过原核表达制备可溶性Sox2-11R重组蛋白,并验证其穿膜能力。首先,采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)与蛋白转导域11聚精氨酸（11 arginine, 11R）的融合表达和与成纤维细胞的共孵育验证11R的穿膜能力。其次,将目的基因Sox2-11R在原核表达载体pET30a中表达,通过优化表达条件获取可溶性Sox2-11R重组蛋白。最后,利用Ni柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE及Western blotting对其进行鉴定;并用免疫荧光染色验证重组蛋白是否具有进入细胞核的能力。结果表明,成功构建了pET30a-Sox2-11R原核表达载体,纯化的Sox2-11R重组蛋白具有穿膜能力,且在细胞培养基中具有较高溶解度,这为制备其他重编程因子的重组蛋白提供了参考,也为外源蛋白诱导iPSCs奠定了基础。     

裸体异鳔鳅(鱼它)人工繁殖与胚胎发育研究

为了解裸体异鳔鳅(鱼它)(Xenophysogobio nudicorpa)人工繁殖和胚胎发育规律,以从金沙江采集到的10尾雌鱼(平均体长17.5 cm,体质量22.3 g)、8尾雄鱼(平均体长15.6 cm,体质量17.5 g)作为亲本,分3批次开展了人工繁殖试验,并观察在水温(20.0±0.5)℃下该鱼的胚胎发育情况。试验结果显示：在水温(15.0±0.5)、(18.0±0.5)、(20.0±0.5)℃的条件下催产,催产剂(雌鱼第1针注射LHRH-A₃ 2μg/kg,第2针注射LHRH-A₃ 10μg/kg+HCG 1 200 IU/kg+PG 8 mg/kg,间距12 h;雄鱼不注射)的效应时间分别为21、15、14 h,受精率分别为8.5%、76.8%、74.5%。将受精卵在水温(15.0±0.5)℃条件下孵化288 h,大部分仔鱼未能正常出膜;当水温升至(18.0±0.5)℃,大部分仔鱼在孵化168 h后破膜而出,但仍有小部分无法正常出膜;当水温升至(20.0±0.5)℃时,仔鱼正常出膜,且出膜时间缩短至120 h。裸体异鳔鳅(鱼它...     

绵羊两年三产高频繁殖技术的试验推广

针对制约养羊生产的品种、营养、繁殖等因素,将高频繁殖技术与母羊营养调控技术、羔羊早期断奶和繁殖季节控制进行集成与试验推广,使每只生产母羊在两年24个月内产三胎,繁殖成活2.83只羔羊;与本县平均生产水平相比,每只生产母羊两年多繁殖成活1只羔羊,缩短了繁殖周期、改变了繁殖的季节性,增加了羊肉产量和生产效益,解决了现阶段规模化养羊发展中的繁殖问题。     

转基因山羊研究进展

近年来,动物转基因技术发展日淅完善,在牛、羊、猪等家畜上的应用日益增多.为全面了解山羊转基因技术的研究进展,论文简要回顾了国内外转基因山羊生产的里程碑事件,总结了生产转基因山羊的方法和原理,并对转基因山羊研究状况、应用前景及存在问题进行了较为系统的概括和分析,从而为借助现代生物技术丰富我国山羊育种手段,加快山羊新良种培...     

羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术研究进展

自从幼畜体外胚胎移植(JIVET)技术问世以来,因其在优秀种畜快繁、育种世代间隔缩短、遗传资源保护等方面具有广阔的应用前景,引起了很多科研机构的关注.为提高JIVET的生产效率,研究人员对该技术的多个环节进行了探索,但总体效率还不是很高.论文就羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术实施中的关键环节,即羔羊超排供体的年龄、超排季...     

猪ADSCs的成脂分化及HH通路关键基因 和脂肪转录因子的时序表达

为了探讨HH信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制,以猪脂肪间充质干细胞(ADSCs)为材料,经成脂诱导后,利用油红O染色观察脂肪细胞的形态变化,并检测诱导分化不同时期HH信号通路关键基因Smo、Ptc1、Gli1、Gli2以及成脂关键转录因子C/EBPα、PPARγ的表达情况。结果显示,在ADSCs细胞成脂分化过程中,脂肪细胞的数量逐渐增加,脂滴变大;Smo、Gli1、Gli2基因从第4天开始随诱导天数的增加表达量逐渐降低,而Ptc1的变化趋势与之相反;且C/EBPα、PPARγ的表达从第4天开始逐渐增加。结果表明,ADSCs细胞成脂诱导第4天HH信号通路的活性被全面启动,且随诱导天数的增加其活性逐渐降低。     

MiR-143在山羊卵巢组织中的表达及功能分析

旨在分析miR-143在妊娠与非妊娠山羊卵巢组织中的表达情况,并探讨其在山羊卵巢功能发挥以及其他生物学过程中所起的作用。采用Solexa测序及荧光定量PCR技术在妊娠和非妊娠山羊卵巢组织中检测miR-143的表达水平,并对其进行靶基因预测和GO富集分析。Solexa测序在山羊卵巢中检测到miR-143的表达,共发现miR-143及其异构体1 074个,总拷贝数为109 523,平均拷贝数为102;定量结果显示miR-143在妊娠山羊卵巢中的表达量是非妊娠山羊的12倍且差异显著(P<0.05);GO分析表明miR-143广泛参与机体生殖发育、细胞增值分化等多个生物学过程。miR-143在妊娠山羊卵巢中的表达水平显著高于非妊娠山羊,而且其可能在卵巢激素分泌与作用应答、妊娠维持等生殖生物学过程中发挥潜在作用。