中国蛤蜊的家系建立及早期生长发育研究

摘要：于2008年7月,采用不平衡巢式设计建立了中国蛤蜊家系（7个父系半同胞家系和21个全同胞家系：A1、A2、A3……G1、G2、G3）,并对各家系的卵径、受精率、孵化率及生长、存活和变态等相关指标进行了分析。结果表明：各家系蛤蜊的卵径、受精率、孵化率及D形幼虫大小均无显著差异（P＞0.05）。 就其生长而言,不同发育阶段各家系的个体大小不同,生长速度不同,受父本效应、母本效应及雄内雌间作用的影响。幼虫浮游期,G1壳长最大,生长速度为10.04±1.67 μm•d-1;A2壳长最小,生长速度为6.07±1.32 μm•d-1。幼虫匍匐期,B3生长最快,其生长速度为29.93±3.67 μm•d-1;D1生长最慢,其生长速度为16.72±2.73 μm•d-1。稚贝期,G3壳长最大,生长速度为83.14±5.85μm•d-1;A2、A3的壳长较小,其生长速度分别为57.78±5.44μm•d-1,55.86±4.48μm•d-1。就其存活而言,幼虫浮游期,A2、C1、E3、F2、G1、G2的存活率较高（＞85%）,B2、D1存活率最小（＜35%）;稚贝培育期,G1存活率（70.40%）最高;A1（23.40%）、C2（20.90%）、F1（19.30%）的存活率较低。变态期间,各家系的生长速度不同,G1、G3生长速度分别为7.94±1.53 μm•d-1、7.96±1.52 μm•d-1;D1生长速度最小,仅为5.23±0.75μm•d-1。各家系的变态率不同,B1、E1、G2变态率均在80%以上,E2（41.24%）、F1（43.25%）变态率较低。各家系的变态规格存在差异,随着变态时间的延长变态规格小型化;G1、G2、G3变态规格最大（240μm）,变态时间最短（13d）;D1变态规格最小,仅为226.65±5.65μm,变态时间最长（17d）。综合各家系生长、存活等早期表型性状,G3生长最快,F2存活率最高,G1产量最高,可进一步作为中国蛤蜊的育种材料。     

熊本牡蛎多嵴和无嵴品系F3生长性状的连续选择效应

为进一步检测熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)多嵴和无嵴品系F3的连续选择反应,以2个品系F2上选组为材料,开展2个品系F3混合上选研究,评估2个品系F3生长性状的选择反应、现实遗传力及遗传改进量,解析选育过程中选择效应、品系效应及二者交互作用对生产性状的影响。结果表明:多嵴品系F3生长性状具有较高的现实遗传力,表现出较好的遗传改良效果;无嵴品系F3表现出中等现实遗传力水平,但仍具有一定程度的遗传改良潜能。养成期360日龄时,多嵴品系子代壳高、鲜重的选择反应分别为0.70、0.76;现实遗传力分别为0.40、0.43;遗传改进量分别为7.02%、12.29%;无嵴品系的选择反应分别为0.36、0.33;现实遗传力分别为0.20、0.19;遗传改进量分别为3.74%、5.72%。经过双因子分析模型检测发现:品系来源是影响F3生长性状的主要因子,选择效应是次要因子,二者间不存在明显的交互作用。由此可见,随着连续选择的进行,选择反应逐渐降低,品系来源作用增强,本研究为熊本牡蛎遗传改良和新品系培育奠定了基础。     

菲律宾蛤仔奶牛蛤品系两个世代的杂交与近交效应

为改良菲律宾蛤仔奶牛蛤品系的表型性状,于2010年7月以奶牛品系的全同胞子一代和子二代上选10%的个体作为亲本,采用双列杂交法,建立近交组合(F₂₂、F₃₃)、杂交组合(F₂₃、F₃₂)并设置对照组(C₂₂、C₃₃),研究了两个近交世代的杂交效应及近交效应。结果表明,杂交使得幼虫的生长性状和存活性状得到了部分改良,但稚贝的生长性状尚未得到提高。幼虫表现出微弱的生长优势,中亲生长优势为(0.95±1.23);F₂₃杂种优势为(0.36±0.59),F₃₂杂种优势为(1.56±1.96)。稚贝表现为杂种劣势,中亲生长劣势为(-2.90±3.20);F₂₃稚贝杂种劣势为(-4.60±3.21),F₃₂稚贝杂种劣势为(-0.75±10.13)。幼虫和稚贝均表现为存活优势,中亲存活优势分别为(9.43±4.41)、(8.66±12.25);F₂₃存活优势分别为(0.77±3.60)、(6.70±8.81);F₃₂存活优势分别为(20.93±7.92)、(10.94±16.28)。杂交效应主要受到交配方式的影响,母本效应主要作用于幼虫期。近交使得世代F₂₂、F₃₃的生长性状得到了改良,但两个世代的存活性状均出现了不同程度的近交衰退。世代 F₂₂、F₃₃幼虫期生长性状表现为近交衰退,衰退率分别为(5.17±4.38)、(4.99±2.72);稚贝期生长性状未表现出近交衰退现象,其衰退率分别为(-0.79±13.66)、(-0.93±12.85)。对于存活性状而言,两个世代均出现近交衰退现象,世代F₂₂及F33幼虫和稚贝的近交衰退率分别为(0.16±5.82)、(9.98±10.04),(19.33±11.28)、(13.08±16.17)。表型性状的近交效应主要受到世代效应的影响。通过上选、杂交与近交的有机结合,有效地改良了奶牛蛤品系的表型性状。     

中国蛤蜊人工育苗技术的初步研究

于2008年4—10月在庄河海洋贝类养殖场对中国蛤蜊Mactra chinenzis的人工育苗技术进行了研究,至10月份成功培育出壳长为（9．124-1．13）mm的稚贝共计64030粒。结果表明：在海区采集的中国蛤蜊亲贝的雌雄比例为1．02：1,产卵量为74．1万粒／个;在温度为23～24℃、盐度为24—26、pH为8．02的条件下,受精卵经过23．5h发育为D形幼虫;中国蛤蜊的卵径、D形幼虫、足面盘幼虫的大小分别为（54．4±1．64）、（70．91±3．75）、（216．5±12．48）μm,变态规格、出现单水管、双水管的稚贝大小分别为（240．42±6．56）、（248．22±14．14）、（1175±72．31） μm。浮游期间（0～10日龄）,水温为22．7～23．4℃,幼虫生长速度为（11．16±0．45）μm／d,存活率为（92．80±2．34）％;变态期间（10～1513龄）,水温为22．4—24．2℃,幼虫生长速度为（10．91±0．54）μm／d,变态率为（73．16±8．32）％,变态过程持续5～6d。稚贝期间（15—40日龄）,水温为24．2～27．0℃,双水管稚贝的生长速度明显快于单水管稚贝,但存活率明显下降。单水管稚贝的生长速度为（73．98±9．05）μm／d,存活率为（73．6±6．58）％;双水管稚贝的生长速度为（87．95．±8．34）μm／d,由于水温过高（〉30．0℃）,存活率仅为（13．78±3．65）％。幼贝期间（40—100日龄）,其生长速度为（111．24±13．08）μm／d,存活率为（62．75±5．35）％。     

大连群体两种壳型菲律宾蛤仔的双列杂交

为探讨不同壳型菲律宾蛤仔的杂种优势,于2007年6月开展了壳宽型（W）和壳扁型（P）两种壳型菲律宾蛤仔的双列杂交。实验由2个杂交组PW（P♀×W♂）、WP(W♀×P♂)和2个自交组WW(W♀×W♂)、PP(P♀×P♂)组成。结果表明,杂交子代壳宽与壳长的比值、放射肋数介于两个自交子代之间,表现为中间型。浮游期间,幼虫未表现出生长优势,但表现出一定的存活优势,幼虫大小存在显著的母本效应。PW和WP子代的存活优势分别为（3.43±0.54）和（4.21±0.55）。室内培育阶段,杂交子代稚贝表现出明显的生长、存活优势,但母本效应逐渐减弱,PW和WP子代的生长优势分别为（10.76±2.25）和（8.28±1.88）,存活优势分别为（5.52±0.62）和（11.10±2.41）。养成期间,杂交子代的生长、存活优势更加明显,母本效应消失,PW和WP子代的生长优势分别为（16.22±0.23）和（14.80±1.50）,体重的杂种优势分别为（50.29±1.13）和（35.27±2.43）,存活优势分别为（12.30±1.37）和（17.45±0.75）。以上结果说明两种不同壳型蛤仔杂交可以产生杂交优势,随着个体发育杂交优势越来越明显。     

薄片镜蛤人工育苗技术的初步研究

于2007年5月-9月,对薄片镜蛤Dosinia laminata的室内人工育苗技术进行了初步研究,并成功培育出壳长1．2～1．5mm的稚贝300万粒。平均壳长为（60．90±2．24）mm的雌性个体每次产卵量为200万粒;在水温24．5～25．5℃、盐度27、pH7．5的条件下,受精卵约经过22h40min发育为D形幼虫;薄片镜蛤的卵径、D形幼虫、变态规格、单水管稚贝和双水管稚贝大小（壳长×壳高,下同）分别为（70．33±1．06）μm、（100．33±1．30）μm×（81.07±1．72）μm、（213．33±8．02）μm×（202．00±5．96）μm、（309．17±9．17）μm×（301．67±10．81）μm、（1158．33±9．31）μm×（1067．50±10．84）μm。浮游期间（0～10日龄）,幼虫壳长、壳高的生长速度分别为（8．28±0．70）μm／d、（9．19±0．76）μm／d,存活率为（36．8±3．78）％;变态期间（10～14d）,幼虫壳长、壳高的生长速度分别为（8．46±0．42）μm、（8．04±0．45）μm,变态率为（5．0±1．25）％,变态持续时间为4～5d;稚贝期间（14～40日龄）,单水管、双水管稚贝的生长快于幼虫期,单水管稚贝壳长、壳高生长速度分别为（32．19±2．06）μm／d、（28．75±1．97）μm／d,双水管稚贝壳长、壳高生长速度分别为（53．07±40．43）μm／d、（47．86±38．22）μm／d,存活率为（81．2±3．36）％。以海泥为附着基采苗效果较好。     

CB诱导熊本牡蛎三倍体及其存活率与倍化率的变化关系

为诱导熊本牡蛎三倍体,研究了细胞松弛素B (CB)浓度、诱导起始时间、诱导持续时间等因素对卵裂率、D幼率、三倍体率的影响,并分析了幼虫、稚贝及成贝的存活率和三倍体率的变化特征。结果显示,CB浓度为0.5~0.6 mg/L,诱导起始时间为40%受精卵释放第一极体,诱导持续时间为20 min时可获得87%的三倍体率。卵裂率、D幼率、三倍体率的最大影响因素分别为CB浓度、诱导持续时间、诱导起始时间与诱导持续时间。三倍体率与卵裂率无显著负相关性,而与D幼率呈显著正相关。因此,减小CB浓度或诱导持续时间,可同时获得较高的三倍体率与幼虫产量。3~15日龄三倍体组与对照组的存活率分别由71.27%与96.09%降低至34.14%与58.80%,成贝期450日龄(9月)三倍体组与对照组的存活率分别为53.62%与44.67%。3~9日龄三倍体率从87%降低至77%,而90~450日龄三倍体率平均值为59.21%±4.99%,表明幼贝与成贝期三倍体率变化较小,三倍体率的维持与存活率无显著相关性。     

熊本牡蛎三倍体与二倍体性腺发育特征比较

为了评估三倍体熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)的繁殖潜力, 采用细胞松弛素 B 诱导了熊本牡蛎三倍体, 比较了 60 日龄(2016 年 8 月)~450 日龄(2017 年 9 月)三倍体与二倍体性腺发育特点, 分析了性腺发育与繁殖周期的相关性。研究结果表明, 熊本牡蛎三倍体与二倍体性腺发育均可分为形成期、增殖期、成熟期、排放期和耗尽期 5 个时期; 在一个繁殖周期内 22%的三倍体性腺可发育至成熟期, 但与二倍体相比, 三倍体成熟性腺的滤泡小、结缔组织丰富; 三倍体与二倍体性腺发育周期同步, 繁殖季节均位于 3—9 月, 繁殖期较长; 150 日龄(2016 年 10 月)三倍体与二倍体中发育的性腺(包括增殖期、成熟期、排放期、耗尽期)分别占 70%与 90%, 210 日龄(2017 年 1 月)减小至 3%与 18%, 之后性腺再次发育, 分别在 360 日龄(2017 年 6 月)和 450 日龄(2017 年 9 月)成熟期性腺比例达到最大值(40%和 90%)。三倍体与二倍体雌雄比分别为 1.35 : 1 和 0.95 : 1, 三倍体性比显著偏离 1 : 1 (P<0.01)。性腺成熟期三倍体与二倍体平均卵径分别为(44.30±6.88) μm 与(37.76±5.76) μm, 三倍体卵径比二倍体大 17.33% (P< 0.05)。本研究可为熊本牡蛎三倍体和二倍体繁育提供参考依据。     

熊本牡蛎多嵴和无嵴品系F1生长性状的群体选育

为了改良熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)生长性能,以多嵴品系和无嵴品系熊本牡蛎为材料,以壳高为指标,按照10%留种率,采用截头法进行了两个品系的群体选育研究,结果表明:选择反应及现实遗传力随着个体增大而增加,且多嵴品系选择反应略高于无嵴品系。对于多嵴品系而言,幼虫期、稚贝期、养成的选择反应及现实遗传分别为0.33±0.04、0.19±0.02,0.46±0.03、0.26±0.02,0.63±0.11、0.36±0.07;无嵴品系的分别为0.30±0.04、0.17±0.02,0.43±0.03、0.25±0.02,0.58±0.10、0.33±0.06。经过1周年的养成,多嵴品系和无嵴品系的壳高遗传改进量分别为8.41%、7.71%。由此可见,两个品系的现实遗传力相对较高,说明存在着一定程度的遗传变异。研究为熊本牡蛎遗传改良及新品系培育提供了理论与实践基础。     

香港巨牡蛎与长牡蛎种间配子兼容性

为了评估香港巨牡蛎与长牡蛎的配子兼容性,于2010年7月,以性腺成熟的香港巨牡蛎和长牡蛎为材料,研究了环境因子温度(16、20、24、28、32℃)、盐度(10、15、20、25、30)及内在因子精子浓度(100、101、102、103、104个/μL)、个体差异(240次杂交实验)对其受精率的影响,并计算了以上条件下的F50临界值.结果表明:香港巨牡蛎卵子可以与长牡蛎精子受精,但相反方向不能受精,存在着单向受精现象.温度是影响长牡蛎配子兼容性主要因子,盐度是影响香港巨牡蛎的主要因子,而温度、盐度交互作用是影响种间配子兼容性的最主要因子.种间配子温度、盐度的F50临界值分别为20.90℃、14.7.精子浓度及单对杂交中的个体差异均显著影响配子兼容性,精子浓度的F50临界值为2.40个/μL;在240次杂交实验中,有91次受精率不足50％,说明个体差异比例的F50临界值37.92％.从其内在因子来看,长牡蛎平均受精率最高(96.83％),配子兼容性较好;对于香港巨牡蛎(70.98％)与种间配子(58.70％)而言,受精水平相对较低,且存在着较大的个体差异.