猪cGAS基因的克隆与原核表达

【目的】环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase, cGAS)是近期在哺乳动物细胞中发现的一种新型核酸转移酶,能够识别胞质DNA,催化ATP和GTP生成第二信使cGAMP,继而通过STING依赖的方式活化转录因子IRF3,启动机体固有免疫。通过构建含猪cGAS基因的重组质粒pBbB3a-His6-NusA-cGAS,进行原核表达,得到cGAS蛋白,为进行体外催化合成cGAMP及探讨其在天然免疫过程中的作用奠定基础。【方法】以猪脾脏cDNA为模板克隆猪cGAS的蛋白编码区 (open reading frame, ORF),用非酶连接技术将此基因克隆至丙酸诱导型原核表达载体pBbB3a-His6-NusA-LIC中。菌液PCR进行阳性克隆鉴定并测序。将测序鉴定正确的克隆菌液提取质粒,转化至E.coli BL21 (DE3)中。当细菌生长到对数期时,丙酸钠诱导表达His6-NusA-cGAS融合蛋白,用20 mmol·L^-1丙酸钠在20℃,180 r/min分别诱导0, 2, 4, 6, 8, 10 h,以确定最佳诱导时间;然后,分别用0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 mmol·L^-1的丙酸钠在20℃,180 r/min诱导6 h,以确定最佳诱导丙酸钠诱导浓度;另外,分别在20℃,30℃,37℃条件下用20 mmol·L^-1丙酸钠,180 r/min培养6 h,以确定最佳诱导温度。筛选最佳诱导条件,并用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。【结果】（1）本试验成功克隆了猪cGAS基因,其ORF长度为1 494 bp;（2）构建了cGAS丙酸诱导型原核表达载体pBbB3a-His6-NusA-cGAS;（3）His6-NusA-cGAS融合蛋白在37℃,添加20 mmol·L^-1丙酸钠,诱导6 h时表达量最高。（4）His6-NusA-cGAS融合蛋白在裂解菌液的上清和沉淀中均有表达,相对分子质量为111.87 kD。【结论】运用大肠杆菌表达系统成功表达了cGAS融合蛋白,本试验为体外表达cGAS融合蛋白提供技术方法。     

返青期醉马草水浸液对红豆草种子萌发的影响

[目的]研究返青期醉马草(Achnatherum inebrians)株体和根际土壤不同部位、不同浓度水浸液对红豆草(Onobrychis viciaefolia)种子萌发的影响.[方法]采用培养皿滤纸法,研究返青期醉马草株体水浸液在0.2、0.1、0.05和0、025 g/eL和根际土壤水浸液在2.0、1.0、0.2和0.1g／mL浓度下,对红豆草种子萌发的化感作用.[结果]醉马草水浸液对红豆草种子萌发指标由强到弱依次为萌发指数＞发芽势＞发芽率;叶水浸液的抑制作用大于根水浸液;根际土壤不同土层水浸液呈现出0～5、5～10和15～20 cm为促进作用,而10～15cm表现为抑制作用;不同浓度的株体水浸液化感效应均表现出抑制作用,根际土壤水浸液则表现为低促高抑作用.[结论]醉马草水浸液对红豆草种子萌发表现为抑制性,叶的水浸液抑制作用远强于根,且浓度越大抑制效应越明显.     

果麦间作系统小气候特征研究

为揭示果麦间作系统内小气候因子的变化规律,利用KS4000手持气象站和SUNSCAN冠层分析系统,对环塔里木盆地枣麦、杏麦和核麦间作系统中小气候因子进行观测。结果表明:不同果麦间作系统对小麦冠层光合有效辐射量和散射辐射量均有一定的减弱作用。果麦间作系统小麦冠层风速、空气温度和土壤温度均明显降低,相对湿度明显增大,在枣麦、杏麦和核麦间作系统中具有相同的趋势。可见果麦间作栽培模式是一项改善田间小气候,有效防治环塔里木盆地一带常出现的干热风、浮尘和强对流等灾害性天气对农作物造成危害的重要措施,为当地农业生产提供了重要生态保障。     

济南地区饮用水水质分析

摘要:文中介绍了济南地区饮用水,近年的水质情况的分析,包括水的硬度、酸碱度、COD的比较及与国家标准的比较,得到的结论是地下水质稳定,地表水水质变差,提请人们关注饮水安全。     

2013年主要农产品发展困境及市场预测(二)

今年以来,由于国际环境、气候、人为等多方因素的影响,部分农产品市场行情不稳。为此,我们请布瑞克环球(北京)农业咨询有限公司的几位研究员就棉花、玉米、大豆、糖业等几个方面做了客观地分析和预测。     

温室栽培中秸秆还田方式对作物生长及土壤碳氮的影响

为了探讨温室作物栽培中秸秆应用对作物生长和土壤肥力的影响,设传统耕作（CK）、秸秆覆盖地表（S）和秸秆掩埋到地下20 cm（I）3 个处理。结果表明：S 处理能显著提高南瓜叶片对光合有效辐射的响应。在小麦生长初期,各处理地上部和地下部生物量的大小均为S ＞ I ＞ CK,随着时间推移,I处理呈现减产的趋势。I 处理的小麦根总长、根表面积、根体积、根直径和叶面积均显著低于S 处理。S处理持续提高了土壤总碳含量,播种2 个月后比初始值升高了41.87%;I 处理和对照在小麦生长初期土壤总碳含量增加,但播种2 个月后土壤总碳含量开始减少,I 处理的土壤总碳含量比初始值降低8.87%。在小麦播种1 个月后I 处理和对照土壤总氮含量均有所提高,播种2 个月后3 个处理的土壤总氮含量均低于初始值。S 处理的碳氮比显著高于其他两个处理,有利于土壤碳的贮存。     

不同转座子介导的基因捕获效率比较

为了比较SB(Sleeping Beauty)、PB(PiggyBac)和Tol2 3种转座子介导的基因捕获效率,本研究构建了含有3种转座子的启动子捕获载体pT3-PST-Pro-Trap。将此载体分别和SB、PB和Tol2 3种转座酶mRNA按照质量比1.0∶1.5的比例注射斑马鱼(Danio rerio)一细胞胚胎,通过检测绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的表达水平比较不同转座子的捕获效率。结果显示,3种转座子介导的启动子捕获载体能够高效率捕获内源基因启动子,进而驱动GFP的表达;注射后培养36 h时的SB、PB和Tol2捕获效率分别为24.32%、30.70%和18.87%,PB捕获效率显著高于SB和Tol2(P0.05);3种转座子在60 h时的捕获效率均高于36 h的,其中SB和Tol2组差异达显著水平(P0.05),而PB组差异不显著(P0.05)。本研究结果表明,SB、PB和Tol2转座子介导的基因捕获技术可以用于脊椎动物高通量功能基因筛选,为功能基因研究提供有效新方法。     

牛瘤胃酸中毒病的诊断与治疗

瘤胃酸中毒是由于采食了富含碳水化合物的精料,它们在瘤胃内异常发酵产生大量乳酸蓄积于瘤胃内,并被吸收而引起的一种疾病。临床上以精神异常,急性消化不良,脱水,瘤胃液pH和血液二氧化碳结合力降低,渗透压升高和瘤胃内微生物体系的改变为特征的一种瘤胃消化机能紊乱性疾病。     

核麦间作模式下种植密度对冬小麦叶片生理特性的影响

为探究核麦间作模式下种植密度对冬小麦旗叶生理特性的影响,于2016-2017年设置450万株·hm~(-2)(M1)、525万株·hm~(-2)(M2)、600万株·hm~(-2)(M3)、675万株·hm~(-2)(M4)和750万株·hm~(-2)(M5)5个种植密度,研究了核桃树冠下区和远冠区下冬小麦旗叶SPAD值、叶绿素荧光参数、光合特性及产量对种植密度的响应。结果表明,随着种植密度的增大,核桃树冠下区冬小麦旗叶的SPAD值、净光合速率(P_n)、蒸腾速率(T_r)、气孔导度(G_s)、最大光化学效率(F_v/F_m)、实际光化学效率(Φ_(PSII))和产量均不同程度降低,在远冠区各指标均呈先升后降趋势,且基本在M2处理达到最大,且冠下区各种植密度处理的冬小麦旗叶P_n、T_r、G_s、F_v/F_m、Φ_(PSII)均低于相应远冠区。冠下区和远冠区的籽粒产量分别以M1和M2处理最高,分别为3 212.19和3 911.12kg·hm~(-2)。综合来看,在核麦间作模式下,冬小麦种植密度应控制在450万～525万株·hm~(-2)。     

蛋鸡免疫接种技术

疫苗接种是预防传染病的有效方法之一,但是免疫接种是否获得成功,不但取决于机体免疫应答能力这一内部因素,还取决于接种时疫苗的质量、接种途径和免疫程序等外部条件.所以,合理的免疫操作至关重要.