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不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应 总被引:4,自引:2,他引:2
将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在 相似文献
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利用不同拓扑学结构的质粒 ,分别转化 E.coli感受态细胞、转染 SK6 - 6细胞和免疫小鼠 ,比较了不同拓扑学结构质粒对转化效率、转染率和对免疫应答水平的影响。结果显示 ,超螺旋占 5 0 %比例的猪瘟病毒 E2基因表达质粒p CDSW转化 E.coli感受态细胞的效率比开环的 p CDSW高 8倍 ,超螺旋比例占 80 %的 p VAXE2 IL- 2质粒比酶切线性化质粒转化率高 2 2倍 ;以荧光蛋白基因为报告基因 ,超螺旋比例占 80 %的荧光蛋白真核表达质粒转染真核细胞的效率是线性化质粒的 12倍 ;以猪瘟病毒主要保护性抗原 E2基因表达质粒 ,分别制备成超螺旋和开环形式占优势的质粒 ,免疫昆明鼠 ,抗体检测结果显示 ,超螺旋比例高的基因疫苗免疫效果明显好于开环质粒的基因疫苗 相似文献
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通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出了狂犬病无毒疫苗株(SRV9)糖蛋白(G)基因膜外主要功能区的两个片段,共约740个bp(450~1144),含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到pUC18的SmaI位点。采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒SADB19株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为98.6%,推导氨基酸序列的同源性为95.9%,主要抗原区内的几个重要氨基酸(如333位精氨酸等)发生了变异,糖基化位点也改变。 相似文献
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笔者在临床和走访养殖户了解到,对家禽生产中所遇到的呼吸道病为主的疾病感觉到最头痛,也是危害最大的主要障碍。对此作如下探讨:一.发病症状 初期病鸡咳嗽,打喷嚏、触鼻、呼吸困难。甩头,偶尔出现眼脸水肿,食欲逐渐减少,整群减少至60-70%,饮水增加。呆立,不愿走动,羽毛光泽减弱、蓬松,后期腹泻呈乳白色,畏寒。终因衰竭或群体残踏而死亡,死亡率一般在5%-30%,如不加防治则更高。发病时间以进雏三天直至成禽上市前二至三天均可发病,则不分大小,不分日龄。剖检:鼻腔、鼻窦充血,呈卡他性炎症,喉、气管充血,并有分泌物… 相似文献
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