马白细胞介素-18单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

摘要：利用纯化的用原核系统表达的重组马白细胞介素-18成熟蛋白(pET-mEIL-18)抗原免疫BALB/c 小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，同时以昆虫杆状病毒表达系统获得的马白细胞介素-18成熟蛋白(mEIL-18)作为抗原进行间接ELISA检测，筛选并最终得到了9株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株。利用IFA试验对9株单克隆抗体进行鉴定，结果证实所获得的9株细胞分泌的抗体都是针对mEIL-18的特异性抗体。将此9株单克隆抗体分别与用原核系统分段表达的重组马白细胞介素-18成熟蛋白pET-mEIL-18-(1)(mEIL-18 1～78位氨基酸残基)和pET-mEIL-18-(2)(mEIL-18 79～157位氨基酸残基)蛋白进行特异性ELISA检测，结果表明，9株单克隆抗体有5株识别表达的pET-mEIL-18-(1)(mEIL-18 1～78位氨基酸残基)，而另外4株单克隆抗体与pET-mEIL-18-(2)(mEIL-18 79～157位氨基酸残基)发生反应，说明所获得的9株单克隆抗体至少针对pET-mEIL-18 2个或2个以上不同的抗原表位。单克隆抗体亚型鉴定试剂盒的鉴定结果显示，除M1F11、M3A11和N7D9为IgM，其余的单克隆抗体均为IgG1，而且所有单克隆抗体的轻链均为?资链。     

猪水肿病的诊断与治疗

猪水肿病又称猪溶血性大肠杆菌病、胃水肿、肠毒血症,是由致病性大肠杆菌引起仔猪断乳后幼猪的一种急性、散发性肠毒血症。本病常出现内毒素中毒的休克症状而突然死亡。     

奶牛子宫内膜炎致病菌的分离与鉴定及耐药性分析

本试验通过对山东省4个大型奶牛场的60头子宫内膜炎患牛进行调查、采样,并用常规方法对细菌进行分离、培养、鉴定。共分离到细菌59株,其中分离率最高的是埃希氏大肠杆菌10株(16.95%)、葡萄球菌属8株(13.6%)、芽孢杆菌属6株(10.2%)、链球菌属5株(8.5%)(其中溶血性链球菌2株)、棒状杆菌属5株(8.5%)、不动杆菌属5株(8.5%)、双球菌5株(8.5%)、肠杆菌属4株(6.8%)、沙门氏菌3株(5.1%)、克雷伯氏杆菌属2株(3.4%)、耶尔森菌属2株(3.4%)、摩拉杆菌属1株(1.7%),而且分离到了梭菌属3株(严格厌氧菌)。药敏试验分析结果显示,大多数致病菌对喹诺酮类药物、阿莫西林、土霉素及氨苄青霉素等耐药率较高,而对头孢菌素类和氨基糖苷类药物耐药率则较低。     

不同蛋氨酸源对肉仔鸡生产性能的影响

DL-蛋氨酸(DLM)和蛋氨酸羟基类似物(MHA-FA)是常用的两种蛋氨酸添加剂。本试验旨在研究两种蛋氨酸添加剂对肉仔鸡生产性能的影响。试验采用单因素完全随机设计。7日龄艾维茵肉仔鸡560只,随机分为7个处理,每处理5个重复,每重复16只,试验持续至42日龄。自由采食饮水。计算各周及全期增重、采食量和料肉比。试验结果显示,基础日粮中添加适宜水平的蛋氨酸可显著改善肉鸡的生产性能(P<0.05),但不影响肉鸡的采食量。以料肉比为指标肉仔鸡的蛋氨酸需要量为:肉小鸡阶段0.44%(ME12.12MJ/kg,CP19.5%);肉中大鸡阶段0.35%(ME12.25MJ/kg,CP18.0%)。MHA-FA的相对生物学效价分别是:64%(肉小鸡日增重)、55%(肉小鸡料肉比);85%(肉中大鸡日增重)、60%(肉中大鸡料肉比);74%(全期日增重)、61%(全期料肉比)。     

5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立

为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMOV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法.通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度.实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499 bp、137 bp、274 bp、224 bp、389 bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×1 03、1.25×103、6.65×103和2.38×104.利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性.本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性.     

高产优质冬小麦新品种——宁冬10号

宁冬10号(冬育1号,02AW5010)是宁夏农林科学院农作物研究所品种资源研究室以墨西哥小麦和国内冬小麦品种常规杂交,经系谱法选育而成的高产优质冬小麦新品种.     

蓝舌病病毒VP7基因的原核表达

为获得蓝舌病病毒(BTV)VP7基因的原核表达蛋白,本实验采用RT-PCR方法扩增出了血清1型BTV的VP7基因,并克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,构建了重组质粒pMAL-VP7.将重组质粒转化TBl感受态细胞,以0.5 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白MBP-VP7以可溶形式存在,分子质量约为90 ku.以纯化的重组蛋白作为包被抗原,初步建立了检测BTV血清抗体的间接ELISA诊断方法,为今后进一步开展BTV诊断研究奠定了基础.     

非玉米豆饼型仔猪日粮添加酶制剂的饲喂效果

进入九十年代以来，国内在猪日粮中添加酶制剂的研究开展得较多，而且多采用玉米豆饼型日粮添加酶制剂来测定其对猪生产性能的影响，很少有采用大麦或次粉取代部分玉米配制的日粮中添加酶制剂的研究。目前，国内玉米、豆饼价格上扬幅度大，货源紧张，直接导致养猪成本增加，这种情形短时期内不会有较大改变，为此，养猪生产者有必要选用价格相对较低的大麦或次粉等原料来取代部分玉米，以降低饲料成本。但是，大麦和次粉的纤维素含量相对较高，能值偏低，应用时是否会对猪的生产性能产生影响是大家所担心的。为探讨实际应用的可行性，我们与…     

赤羽病病毒囊膜糖蛋白G1基因的截短表达、纯化及间接ELISA诊断方法的建立

为获得赤羽病病毒（Akabane Virus, AKAV）囊膜糖蛋白重组抗原作诊断应用研究,通过软件分析AKAV OBE-1株的囊膜糖蛋白G1的氨基酸序列,筛选出抗原性较好的基因片段G1-2作为目的片段,经RT-PCR扩增后,插入pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段定向亚克隆于pET-28a (+)表达载体中,转化至BL21 (DE3)感受态细胞中进行诱导表达。经SDS-PAGE和Western-blot分析,诱导表达产物以包涵体的形式存在,大小约为40ku,且具有免疫学活性。亲和纯化后的融合蛋白浓度为2mg/ml,纯度为92.6%。以该融合蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为20g/ml,血清最佳稀释度为1:200。交叉试验表明该方法对牛常见的6种疾病阳性血清无交叉反应。应用该方法对病毒微量中和试验检测过的云南（77份）和内蒙（70份）牛血清样品进行了检测。以中和试验为参照,通过统计学处理,得出两地临界值分别为0.493和0.488,本方法的特异性为73%和86.9%,二者的符和率分别为80%和85.9%。     

氮肥和密度对宁冬11号分蘖成穗及产量的影响

采用裂区设计,研究不同施氮量和播种密度对宁冬11号分蘖成穗及穗部结实特性的影响。结果表明,施氮量为90~270kg/hm2时,随着施氮量增加,宁冬11号冬分蘖力、成穗率、有效穗数及产量均增加,当施氮量达到360kg/hm2时全部降低;施氮量对结实小穗数、穗粒质量的影响呈单峰曲线,分别在180kg/hm2和270kg/hm2时达到峰值。随着播种密度增加,分蘖成穗率、结实小穗数、穗粒质量均降低,且对结实小穗数和穗粒质量的影响显著。宁夏引黄灌区冬小麦品种宁冬11号在适宜播期的最佳肥密组合为施氮量270kg/hm2,播种密度600万/hm2。