大蒜内参基因筛选及AsACO基因对盐胁迫和促生菌的响应分析

【目的】筛选大蒜在盐胁迫下的稳定内参基因,并分析1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因（AsACO）对盐胁迫和促生菌的响应表达特性,为深入探究促生菌的促生机制及大蒜对盐胁迫的响应机制研究提供理论参考。【方法】以乐都紫皮大蒜为试材,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测5个内参基因ACT、UBC、HIS3、18S rRNA、TUB在盐胁迫下的表达稳定性,结合GeNorm、NormFinder和BestKeeper筛选出最稳定的内参基因,并分析恶臭假单胞菌UW4对盐胁迫下AsACO基因表达的影响。【结果】 5个候选内参基因引物的特异性强、无引物二聚体。GeNorm分析得出候选内参基因稳定性排名为18S rRNA=TUB>HIS3>UBC>ACT,NormFinder分析得出内参基因稳定性排名为18S rRNA>HIS3>TUB>UBC>ACT,BestKeeper分析得出内参基因稳定性排名为UBC>HIS3>18S rRNA>TUB>ACT,最终以几何平均数综合分析得出18S rRNA为最稳定的内参基因。以18S rRNA为内参基因,检测出AsACO基因表达具有明显的组织特异性,在叶片中的相对表达量明显高于根。整个处理过程中,盐胁迫明显诱导AsACO基因在不同处理时间及不同组织中表达上调,根和叶片中AsACO基因的相对表达量分别在2 d和12 h时达最高,较正常培养（CK）分别显著升高124.43%和238.34%（P<0.05,下同）,与盐胁迫处理相比,盐胁迫+浇施恶臭假单胞菌UW4处理显著降低AsACO基因在不同处理时间根和叶片中的相对表达量,其中在2 d和12 h时降幅较大,分别降低了112.08%和343.34%。【结论】18S rRNA是盐胁迫下大蒜中最稳定的内参基因。盐胁迫可诱导大蒜根和叶片中AsACO基因的上调表达,从而间接促进ACO和乙烯水平升高,加速由乙烯调控的细胞衰老,甚至死亡,但盐胁迫下恶臭假单胞UW4具有抑制AsACO基因表达的作用,以减少ACO和乙烯的合成,从而延缓大蒜细胞衰老,提高逆境耐受性。     

新疆新源县32个向日葵品种对黑茎病和白锈病抗性鉴定

向日葵白锈病和黑茎病是近年来外来入侵的两种检疫性新病害,国内对种植的向日葵品种抗病性鉴定研究较少.在自然发病条件下,通过对2011年新疆伊犁河谷新源县向日葵种植产区的32个向日葵品种(油葵16个品种,食葵16个品种)发病程度的调查结果表明:向日葵品种间存在明显的抗病性差异,向日葵两种外来入侵检疫性病害-向日葵黑茎病、白锈病的抗性调查结果.32个品种无一免疫品种.油葵品种对黑茎病的相对抗病性无免疫品种,有6.25％表现为高抗,68.75％表现为中抗,18.75％表现为中感,6.25％表现为高感;对白锈病的相对抗病性无免疫品种,37.5％表现为高抗,50％表现为中抗,6.25％表现为中感和高感.供试油葵品种中CK3-KWS303、TK555、TK601三个品种向日葵黑茎病、白锈病的病情指数相对较低,抗病性强,产量高;CK3-KWS303、TK555二个品种产量较高.食葵品种对黑茎病的相对抗病性无免疫和高抗品种,25％表现为中抗,50％表现为中感,25％表现为高感;对白锈病的相对抗病性无免疫品种,6.25％表现为高抗,62.5％表现为中抗,12.5％表现为中感,18.75％表现为高感.供试食葵品种中CK1-5009向日葵黑茎病、白锈病发病较轻,对黑茎病表现为中感,白锈病表现为中抗.     

诱导哈密瓜系统抗病性内生细菌的筛选

试验从38个哈密瓜内生细菌中筛选出具有诱导哈密瓜植株抗细菌性叶斑病和疫霉病能力的菌株。研究结果表明：以诱抗效果达到30%为标准,筛选出有12株具有诱导哈密瓜抗细菌叶斑病的菌株;有8株具有诱导哈密瓜抗疫霉病的菌株;有4株具有诱导哈密瓜同时抗细菌叶斑病和疫霉病的菌株,诱抗效果高于或相当于化学诱抗剂水杨酸,且诱抗效果较持续稳定。试验证明了从哈密瓜内生细菌菌株中可以筛选出能显著提高哈密瓜抗病性的菌株,具有作为生防菌开发利用的潜能。     

ELISA及实时荧光PCR检测番茄细菌性溃疡病菌的方法比较

本文以番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)菌悬液和田间采集的病组织为材料,比较ELISA试剂金、常规PCR方法和实时荧光PCR方法检测番茄细菌性溃疡病菌灵敏度和适用性.结果表明,ELISA试剂盒检测灵敏度为105cfu/mL,具有简便、快速、易操作特点,适用于田间病害诊断;常规PCR检测灵敏度为105cfu/mL;TaqMan探针实时荧光PCR检测灵敏度为103～4cfu/mL,比常规PCR和ELISA检测灵敏度提高10～100倍,且不需要琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色和Southem杂交,但需要昂贵的仪器和试剂,适用于室内检测及相关研究.