CHO表达生长激素释放因子的生物活性测定

在对生长激素释放因子(GRF)基因改造和化学合成，并构建了其真核表达载体pCDNA3-GRF(1-32)的基础上．用Lipofectin将上述载体转染CHO细胞进行瞬时表达，采用体外单层垂体细胞培养的方法对表达的GRF(1-32)进行了体外生物活性测定，即先将垂体用酶进行消化，再将消化细胞培养，形成单层细胞，利用其能合成与释放生长激素的能力来检测GRF的活性。结果表明：表达产物可刺激生长激素释放，并且比对照组提高3．8倍，     

华北地区冬小麦主要气象灾害风险评价

为了对华北地区冬小麦生育期内遇到的主要气象灾害(干旱和干热风)的综合风险进行评价,根据气象灾害发生机理及区域环境特征建立危险性、暴露性和脆弱性评价模型,并构建综合风险模型,具体分析各地区综合风险的大小及主导风险因子,该文利用华北地区48个农气站冬小麦发育期资料(1981-2010年)和气象资料(1961-2010年)以及近50 a产量资料,将冬小麦全生育期划分为前期(播种期-起身期)、中期(拔节期-开花期)、后期(灌浆期-成熟期)3个阶段,并充分考虑了底墒形成期(播种当年7-9月)内的降水,分别基于水分亏缺指数和加权干热风日数构建了干旱、干热风等级指数,对华北地区冬小麦干旱、干热风灾害以及综合气象灾害风险进行分析。结果表明:危险性、脆弱性和暴露性的权重分别为0.3272、0.3116和0.3612。华北地区冬小麦农业气象灾害风险值有2个高值中心,一个位于冀鲁豫交汇处,一个位于河北省泊头、黄骅等地,风险值由中心向四周逐渐降低。根据该文构建的综合风险评估模型,将华北冬小麦种植区划分为5个不同风险等级区。评价结果具有较强的针对性,可以为华北各地区农业气象灾害风险管理提供参考。     

色素万寿菊产量构成因素的灰色关联度分析

运用灰色关联度分析方法,对10个色素万寿菊杂交组合的单株产量和7个主要性状（株高、株幅、茎粗、分枝数、花径、单株花数、单花重）进行灰色关联度分析。以研究各农艺性状对产量的影响。结果表明,单株花数、单花重、花径对单株产量的影响较大,结果与生产情况基本一致,说明在色素万寿菊育种后代选择上应将这几个性状作为主要指标。     

鸡p15INK4B基因的克隆表达及纯化

为研究鸡p15INK4B蛋白的功能及为制备此蛋白的单克隆抗体提供材料,应用引物搭桥法合成p15INK4B基因,应用基因工程的手段构建p15INK4B基因的原核表达载体,在E.coliRosetta(DE3)菌进行融合表达,并对表达产物进行亲和层析纯化。结果成功地构建了p15INK4B基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。     

HAV表位抗原与HBV核心抗原融合基因的原核表达

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒（HAV）复合多表位抗原基因VPx插入到乙肝病毒核心抗原（HBcAg）基因中,得到CVPx融合基因。将CVPx克隆到原核表达载体pET-28a（＋）中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明：融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。     

不同品系鸡血浆转铁蛋白、血红蛋白和红细胞酯酶D多态性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定了6个品系鸡的血浆转铁蛋白(Tf)、血红蛋白(Hb)和红细胞酯酶D(EsD)的遗传多态性.转铁蛋白出现5种表型,受Tf~A、Tf~B、TP~C3个共显性等位基因控制;血红蛋白出现5种表型,受Hb~F、Hb~(M1)、Hb~(M2)3个共显性等位基因控制;红细胞酯酶D出现5种表型,受EsD~1、EsD~2、EsD~3、EsD~4、EsD~55个共显性等位基因控制.各品系鸡之间的Tf、Hb、EsD的基因频率是不同的.根据基因频率计算遗传距离并用类平均法进行聚类分析.3种肉用鸡中艾维茵和塔特姆亲缘关系最近,罗斯褐鸡与3种肉用鸡亲缘关系较近,而与其它蛋用型鸡亲缘关系较远.     

接种不同毒力马立克氏病毒对鸡端粒酶活性和致病性的影响

以MDV京-1株和GA株诱发的MD为肿瘤模型,跟踪测定了鸡生长过程中脾脏组织的端粒酶活性变化。结果表明,端粒酶活性在没有临床症状和可视病变出现之前便可检测到。随着MDV感染日龄的增加逐渐升高,在其相对活力达到最高值后,总体水平略有下降,但依然存在端粒酶活性;而疫苗株CVI988接种后,整个生长过程其端粒酶均呈阴性。发生MD病变的鸡生长迟缓,中枢性免疫器官胸腺和法式囊严重萎缩,并出现体内肿瘤。无论是病变程度,还是死亡个数和时间,京-1株的致病性均高于GA株。     

鸡马立克氏病肿瘤组织细胞端粒长度的测定

用马立克氏病病毒 ( MDV)京 -1株血毒对 SPF鸡攻毒 ,7周后扑杀 ,采取各内脏组织 ,一部分组织做病理切片 ,发现有肿瘤细胞浸润者即判定为阳性 ;另一部分组织用于端粒长度测定。以 DIG标记的探针( TTAGGG) 4,通过 Southern Blot方法测定细胞端粒长度 ,结果表明 ,阳性肾脏、肝脏、脾脏、神经、卵巢等组织细胞端粒长度较正常组织细胞的明显缩短     

重组小麦组蛋白H4介导绿色荧光蛋白基因(pEGFP/C1)的转染

利用在大肠杆菌体内表达的重组小麦组蛋白H4与质粒DNA形成复合体后,通过琼脂糖凝胶电泳迁移试验(EMSA)验证重组蛋白与DNA的结合情况;MTT法检测蛋白对细胞的毒性作用;转染细胞后,激光共聚焦显微镜检测荧光蛋白的表达。此重组蛋白能很好地结合质粒DNA,且能有效地保护DNA分子不受核酸酶降解,并能高效地携带绿色荧光蛋白基因pEGFP/C1转染进入卵巢癌细胞株H08910。     

马立克氏病毒感染鸡的端粒酶活性及其病毒血症的动态研究

1日龄非免疫鸡分别人工感染马立克氏病病毒(MDV)I型国际标准强毒GA株、I型MDV疫苗毒CVI988株后,从第5日起,定期采血,用本实验室改进的Trap法和Bandscan软件测定、分析并计算感染过程中其外周血液单核细胞(PBMC)的端粒酶活性变化;同时用抗MDV囊膜糖蛋白B(gB)单克隆抗体介导的间接免疫荧光试验检测MDV在外周血液单核细胞中的感染状况。结果表明,自接种I型强毒GA株后,端粒酶在没有临床症状和可视病变出现之前就可检测到,并且随着MDV感染后日龄的增加逐渐升高,在25日龄时其相对活力达到最高值;而接种CVI988后,整个生长过程端粒酶活性均呈阴性。从感染第5日到鸡发病死亡前,都能检出GA株引起的病毒血症,并于18～22 d左右达到高峰;而接种CVI988株后第5日到第20日止,能检出病毒血症,并于第10～12天左右达到高峰。