梨属植物RAPD反应体系的建立与优化

以鸭梨、杜梨为材料,对梨属植物DNA的提取及RAPD反应体系进行了系统优化,建立了梨属植物最佳反应体系及参数。结果表明,适当提高抗氧化、抗酚类物质的浓度(2%β-巯基乙醇,2%PVP-40,20 mmol/LNa2S2O5),提取的基因组DNA纯度较高;反应体系中含有Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs浓度200μmol/L,引物0.4μmol/L,模板DNA 1.6 ng/μL,Taq DNA聚合酶0.06 U/μL,可成功用于梨属植物RAPD扩增。说明改良的CTAB法能成功用于梨属植物DNA提取,建立的最佳反应体系可用于梨属植物RAPD扩增。     

4种梨的多酚氧化酶基因克隆及其序列比较

以4种不同来源的梨基因组DNA为模板,根据已经发表的多酚氧化酶基因序列设计引物,利用PCR技术,克隆到了鸭梨、雪花梨、砂梨、黄冠梨约1．8kb的完整多酚氧化酶基因,将纯化后的扩增产物克隆到质粒pGEM-T veetor中,转化DH-5α菌,挑选阳性克隆进行测序。利用Clustalx软件对PPO核苷酸序列进行了同源性分析,用DNAStar软件对PPO核苷酸序列进行进化树分析,并进行部分植物PPO氨基酸的同源性分析。结果表明,4种梨多酚氧化酶基因的蛋白编码区含有1782个核苷酸,鸭梨基因已经在GenBank上登录,登录号为EU048225。梨多酚氧化酶基因与其他植物中的多酚氧化酶基因有较高的相似性,尤其在铜离子结合部位,所有的植物基本上一致;5种梨的同源性高达98％。基于植物PPO基因核苷酸序列的分子进化树显示,可分为两大类,梨的多酚氧化酶可以与大多数的木本植物聚合成一个组。     

梨矮化砧木中矮1号组培快繁技术研究

为建立一种增殖系数高、生根效果好的梨矮化砧木中矮1号的组培快繁技术，本试验以中矮1号组培苗为试材，分别对其快繁的外植体种类、消毒方式、继代培养基配方、生根培养基配方和生根培养条件进行研究筛选。结果表明，一年生枝条水培萌发的叶芽和无花芽混合芽更适合作为中矮1号的外植体，最佳消毒方式为：75%酒精30 s→0.1%升汞3 min→无菌水30 s。最佳继代培养基为：MS+30 g/L蔗糖+1.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L GA₃+7 g/L琼脂、pH=6.0,平均增殖系数为5.52;6-BA对继代增殖的影响最大，主要影响增殖系数、苗高、叶片数和节间数，NAA主要影响芽长和节间长度，GA₃对芽长、苗高和节间长度也有一定影响。两步生根法生根培养效果优：先在配方为1/2MS+15 g/L蔗糖+1.0 mg/L IBA+0.4 mg/L IAA+0.6 mg/L NAA+7 g/L琼脂、pH=6.0的培养基上培养7天(前5天为暗培养),后转入无激素培养基培养，平均生根率达72.22%;活性炭(AC)对生根培养的影响最大...     

水杨酸诱导鸭梨抗黑斑病效果及机理的探讨

为了揭示水杨酸诱导鸭梨抗黑斑病的作用效果及机理，以河北农业大学实验农场梨园鸭梨叶片和果实为试验材料，通过组织分离法分离、纯化梨黑斑病病原菌并对其进行致病性检测，利用形态观察及真菌ITS、HIS、RPB2、ACT多基因综合鉴定法明确鸭梨黑斑病致病菌的类型；鸭梨离体叶片通过针刺接种黑斑病菌分生孢子悬浮液侵染0,6,12,24,48,72,96,120 h,通过实时荧光定量PCR检测水杨酸信号通路中相关基因的表达量变化，通过高效液相色谱(HPLC)检测0,72 h内源水杨酸含量的变化；利用不同浓度水杨酸(0,0.002,0.02,0.2,2.0,10.0,20.0 mmol/L)测定其对黑斑病菌菌丝生长的影响；采用外源0,0.02,0.2,2.0 mmol/L水杨酸处理鸭梨果实，接种黑斑病菌并观察其抗病效果。结果表明，河北农业大学实验农场梨园中鸭梨黑斑病病原菌为链格孢属链格孢菌，鸭梨离体叶片接种黑斑病菌后，72 h游离态水杨酸含量由0 mg/g增至0.02 mg/g,结合态水杨酸含量由0.47 mg/g增至1.55 mg/g, SA信号通路中相关基因Pbrgene12425、Pbrgene6...