犊牛肺炎大肠杆菌的分离鉴定、耐药性及致病力检测

为确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为呼吸道症状病死犊牛的细菌性病原，本研究采用常规细菌分离、PCR及生化鉴定方法从采集的病牛组织中分离并鉴定病原菌，采用PCR方法对其系统进化分群、采用K-B纸片扩散法检测细菌的药物敏感性、采用PCR方法分别检测细菌的耐药基因和毒力基因，经腹腔注射菌液进行小鼠的致病性试验，对分离菌株进行生物学特性研究。分离及鉴定结果显示，从病死犊牛的肺脏分离鉴定出的2株大肠杆菌(E1和E2)分属于A群和B1群；药敏试验结果显示两株分离菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、头孢哌酮、美罗培南、链霉素、妥布霉素、多西环素、麦迪霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素耐药；且2株分离菌均检测到β-内酰胺类的blaTEM、喹诺酮类的aac(6’)-Ib、gyr A共3种耐药基因以及crl、csgA、fimH、pap、motA、hlyE、iucD、omp A、espA、Lux S、fyu A、pta共12种毒力基因；分离菌株耐药基因与耐药表型的结果表明分离菌株表现较强的多重耐药现象；小鼠的致病性试验结果显示分离菌株均为致病性大肠杆菌，E1菌株感染小鼠在32 h...     

伊犁地区某肉牛场牛病毒性腹泻血清学调查

为了解伊犁地区某规模化肉牛场牛病毒性腹泻（BVD）感染情况，采用商品化酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒对采集的10 069份血清、3 393份耳组织进行BVD抗原和抗体检测。结果显示，所检血清样本的抗原和抗体阳性率分别为85.93%(8 652/10 069)和0.41%(41/10 069)，耳组织样本BVD抗原阳性率0.06%(3/3 393)，该肉牛场BVD感染较为严重，应该引起高度重视。本次调查为该牛场制定牛病毒性腹泻病的防控和净化措施提供了科学依据。     

绵羊肺炎支原体多表位融合基因MO-meAg1的构建、表达及重组蛋白免疫原性分析

为获得具有良好免疫原性的绵羊肺炎支原体(MO)重组蛋白,利用ABCpred等软件预测分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合基因MO-meAg1,合成后将其亚克隆至表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-32a(+)-MO-meAg1。将pET-32a(+)-MOmeAg1转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后检测重组蛋白反应原性和免疫原性。SDSPAGE结果显示,MO-meAg1重组蛋白分子质量约34.5ku;Western blot分析结果显示,该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。小鼠免疫试验结果表明,重组蛋白MO-meAg1具有较强的免疫原性,诱导机体产生的抗血清其间接血凝效价可达1∶128以上。获得的多表位融合蛋白MO-meAg1为绵羊支原体肺炎的免疫学诊断及新型疫苗研究奠定基础。     

EMS诱变对甘蓝型油菜主要农艺性状的影响

【目的】筛选甘蓝型油菜种子甲基磺酸乙酯（EMS）诱变的最佳处理条件，为构建甘蓝型油菜突变体库和丰富基础资源材料提供理论依据。【方法】以甘蓝型油菜9226种子为试材，采用培养皿萌发与田间试验方法，研究不同EMS浓度（0、0.4%、0.8%、1.4%、1.8%和2%）诱变处理下，甘蓝型油菜种子发芽率和主要农艺性状的变化。【结果】油菜种子的发芽率随EMS浓度的增加呈降低趋势，当浓度为1.4%时，发芽率降至39%，最为接近半致死率。经诱变处理后的农艺性状指标存在丰富变异，变异系数依次为全株有效角果数＞主花序角果数＞每角粒数＞第一有效分枝部高度=一次有效分枝数＞角果长度＞主花序有效长度＞株高；以全株有效角果数最高，为0.50，诱变影响最为突出；部分农艺性状间具有紧密联系，呈显著或极显著相关。变异株系分别为株高降低（Ⅰ类）、角果数增多（Ⅱ类）、角果增长（Ⅲ类）和一次有效分枝数增多（Ⅳ类）4类突变体。【结论】EMS诱变甘蓝型油菜种子，可获得农艺性状变异丰富的突变体材料，最佳处理浓度为1.4%。     

新疆牛源溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性和毒力分析

为鉴定新疆石河子地区某规模化牛场表现呼吸道感染症状荷斯坦病牛的细菌性病原及其分离株的血清型、耐药基因和毒力基因携带情况，本研究无菌采集病死牛病变组织，采用常规细菌分离培养及PCR方法鉴定细菌，采用PCR方法检测其血清型、耐药基因和毒力基因携带情况，采用K-B纸片法检测其耐药表型。结果显示，从病变组织样品中分离了4株荚膜A1型的溶血性曼氏杆菌(Mh-1、Mh-2、Mh-3、Mh-4)；耐药表型显示4株Mh对β-内酰胺类(青霉素)、氨基糖苷类(链霉素)和糖肽类(替考拉宁)药物耐药；耐药基因仅检测到β-内酰胺类基因blaTEM；分离菌株Mh-1携带8类9种毒力基因中的5种(LKT-C、gs60、fbp A、gapA、ptfA),Mh-2携带其中的4种(LKT-C、plpB、dnaN、ptfA),Mh-3携带其中的7种(LKT-C、plpB、gs60、fbp A、gapA、dnaN、ptfA),Mh-4携带其中的6种(LKT-C、 plpB、 gs60、 fbp A、 gapA、 ptfA)。同时分离出1株荚膜A型，脂多糖L3型的多杀性巴氏杆菌(Pm-1);Pm-1仅对克林霉素耐药；Pm-1携...     

绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因缺失对小鼠肺泡巨噬细胞感染的影响

为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用，本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照，通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平，结果显示，与XJ10WT相比，XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P<0.001),crl和pap基因的m RNA转录水平分别在2 h和12 h时均极显著上调(P<0.001)。进一步通过吉姆萨染色观察XJ10WT和XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞情况，采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力，并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示，XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h，随后逐渐下降，在感染后1 h～5 ...