新疆犊牛源大肠杆菌系统进化及其耐药特性

本研究利用三重PCR的方法对新疆犊牛源大肠杆菌临床分离株进行系统进化分群,对不同进化群的菌株进行致病性和16种药物的敏感性试验。结果:粪便样品中分离出的127株大肠杆菌中非致病群A(37.8%)和高致病群D(30.7%)菌株分布相对较多,其次是低致病群B1(18.1%)和高致病群B2(13.4%);其中腹泻犊牛源(B2+D)群大肠杆菌明显多于健康犊牛。药敏结果显示,犊牛源大肠杆菌多重耐药表型的菌株占85.0%,主要分布在3耐~7耐,其中腹泻犊牛携带的大肠杆菌耐药率高于健康犊牛,D群大肠杆菌耐药率最高,B2群耐药率最低,A群和B1群居中。结论:新疆犊牛源大肠杆菌耐药性比较严重,应受到重视。     

养鸡场免疫失败原因及防制方法

随着养殖业的发展,应用疫苗免疫预防传染性疾病已成为养鸡场的主要手段,合理的免疫可以减少疾病的发生,避免疾病的暴发而造成人力物力、财力上的巨大损失。但由于人们对免疫预防工作中的某些环节认识模糊或操作上的失误等原因,致使免疫失败的现象时有发生,这仍给养殖业带来较大的经济损失。1免疫失败的原因1.1鸡体自身因素1.1.1鸡群自身的健康状况、日龄、品种:健康的鸡对疾病的抵抗力强,免疫后可获得较理想的抵抗力。幼龄鸡的免疫器官尚未发育成熟,过早免疫制性疾病,这些疾病病原侵害鸡的体液或细胞免疫中枢器官,造成免疫系统先天性不足。…     

绵羊大肠埃希菌生物被膜形成及相关基因的检测

检测绵羊大肠埃希菌中的XJ10生物被膜(biofilm,BF)形成情况并确定与BF形成相关基因的携带情况。采用96孔聚苯乙烯微孔板培养XJ10观察BF的形态和测定OD值分析XJ10BF在不同的时间段形成的情况,采用PCR方法检测BF 12种形成相关基因的分布情况。结果表明,在37℃,BF的OD值从2 h开始逐渐升高,24 h左右接近最高峰,维持至36 h后,OD值开始缓慢下降,直至72 h仍维持较高水平,在整个检测时间段内XJ10BF OD值显著高于对照组,且差异显著(P0.05);6 h时BF形成初具形态,8 h～10 h呈现不完整的网格结构,12 h时BF形成较明显的网状结构,24 h～36 h形成有序的较为密集的网格结构,48 h后网状结构开始解离和脱落。同时在XJ10中检测到了其中8种与BF形成相关的基因,测序结果与GenBank公布的相应序列同源性为97.2%以上。试验表明XJ10具有形成BF的能力,但形成能力较弱,且携带8个与BF形成相关的基因。     

抗牛结核分枝杆菌VHH抗体T7噬菌体库的构建与筛选

为获得抗牛结核分枝杆菌的VHH纳米抗体,本研究利用牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白免疫双峰驼,免疫效价达到1∶8 000后采外周血分离淋巴细胞,提取RNA反转录成cDNA,利用巢式PCR方法扩增出编码单域抗体VHH的400 bp基因片段。将目的片段用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,与T7噬菌体载体臂T7Select 10-3RI Arms连接,再通过体外重新包装含目的片段的噬菌体。对建立的VHH噬菌体抗体库进行鉴定,原始文库库容为5.7×10~8 PFU,库阳性率为85.7%。通过4轮生物亲和淘选,筛选并表达出2株高特异性的VHH抗体,均对牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白具有特异性。本研究为进一步探讨VHH抗体在牛结核病的诊断和治疗奠定了基础。     

重庆市璧山区城乡建设用地与人口时空演变分析

土地与人口的城镇化失调已久,厘清内在的变化机理,是协调人地结构矛盾的迫切需求.本文以重庆市璧山区为例,采用增长弹性系数法,利用2004-2014年的城乡建设用地和人口数据,分析二者的关系演变轨迹.研究结果表明:1)城镇建设用地增长率182.5%,农村建设用地减少率4.12%,二者增减幅度差距大;2)城镇人地增长弹性系数为1.81,城镇建设用地增长快于人口增加,有土地城镇化倾向,且城镇化发展存在区域不平衡;3)农村人地增长弹性系数为0.17,农村建设用地减少慢于农村人口的析出;4)城镇人地关系与农村人地关系变化剧烈的地区分布存在一致性,形成以璧山主城为中心的向相邻街镇震荡的环形格局.农村建设用地的增减决定了农村人地关系是否协调,应加强对农村闲置宅基地的整治.另外,应促进农村人口城镇化,提高城镇建设用地集约利用度.     

芥菜型油菜莫利（Moricandia arvensis）细胞质雄性不育系统研究进展

授粉控制系统是油菜杂种优势利用中的关键一环。其中,细胞质雄性不育系统（CMS）是目前较理想的授粉控制系统之一,创制新型的授粉系统在油菜杂种优势利用中具有重要意义。芥菜型油菜莫利（M. arvensis）CMS是印度Prakash等人于1998年创造的一个新型油菜细胞质系统,该系统不育系育性彻底稳定,无不良胞质副效应,目前在印度已应用于芥菜型油菜杂种优势利用。本文综述了该不育系统的创制、雄性不育基因研究、恢复基因分子标记开发,以及该系统在芥菜型油菜育种上的应用,旨在为油菜杂交种选育和分子标记辅助选择育种提供参考。     

非洲猪瘟病毒P30-54融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及反应原性研究

【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30-54融合蛋白基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBac1中,构建重组质粒pFastBac-P30-54;将重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌进行重组,经抗性与蓝白斑筛选得到杆状病毒重组质粒Bacmid-P30-54;将reBacmid-P30-54转染sf9细胞,获得重组杆状病毒reAcMNPV-P30-54。将获得的reAcMNPV-P30-54接种sf9细胞,待细胞出现CPE时收集细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)和SDS-PAGE进行分析重组蛋白的表达情况;通过Western blot检测重组蛋白的反应原性。【结果】在重组杆状病毒中成功表达P30-54蛋白,该重组蛋白可与ASFV多克隆抗体发生免疫学反应。【结论】证实该重组蛋白具有良好的反应原性。     

1株B基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

为探究新疆某集约化牛场1～6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况,对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析。结果显示,样品中BPIV3核酸阳性率为11.67%。从核酸阳性样品中分离获得1株BPIV3,并命名为XJ21032-1(45),其基因组全长为15 512 bp;遗传进化分析表明,XJ21032-1(45)属于BPIV3 B基因型,该分离株与澳大利亚的BPIV3 B基因型参考株Q5592(EU277658)的同源性最高为93.4%。本研究成功分离得到了1株B基因型BPIV3,证实B型毒株在我国的存在和流行,为BPIV3疫苗研发提供了原材料,也有助于我国BPIV3分子进化规律及溯源的进一步研究。     

牛呼吸道疾病两种细菌性病原研究进展

牛呼吸道疾病(BRD)给北美乃至世界养牛业造成巨大的经济损失,是引起舍饲牛发病的主要原因,具有高发病率和高病死率的特点,是仅次于新生犊牛腹泻的第二大疾病.引起BRD的主要细菌性病原体包括溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌,掌握两种细菌的生物学特性、免疫逃避和致病机制、耐药性与耐药现状及多重耐药的遗传机制是制定科学防控措施的...     

抗磺胺二甲氧嘧啶VHH抗体噬菌体库的构建和鉴定

旨在制备抗磺胺二甲氧嘧啶(SDM)驼源单域重链(VHH)抗体,用于检测动物源性食品中SDM的残留.采用重氮化法,SDM分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成人工免疫原(SDM-BSA)和包被抗原(SDM-OVA).用SDM-BSA免疫骆驼,在第5 次免疫后1周采集骆驼外周血液,分离外周血淋巴细胞,...