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根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10~100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。 相似文献
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为探明大量元素肥配施微肥和石灰对马尾松蓄积量、松脂产量及土壤地力的影响,探讨最佳施肥处理和肥料效应。于2017年,在广西横县镇龙林场对10年生马尾松材脂兼用林进行施肥试验(6个处理:T1(大量元素+微量元素+石灰)、T2(大量元素+微量元素)、T3(大量元素)、T4(大量元素+石灰)、T5(钙镁磷肥+石灰)、CK(不施肥)),施肥后连续3 a测定林木蓄积增长量及松脂产量,分析6种施肥处理的肥料效应。结果表明:施肥后2.5 a内能显著提高马尾松蓄积增长量和松脂产量,尤其是施肥后1.5 a内肥料效应最好,其中T1处理效果最佳,蓄积量、松脂产量分别比CK分别提高34.53%、24.33%。马尾松蓄积增长量的基础地力贡献率随施肥后时间的延长整体呈先上升后下降并逐渐平稳趋势,肥料贡献率与之相反,尤其施肥后0.5 a和1.5 a间蓄积增长量的基础地力和肥料贡献率差异显著。松脂产量的基础地力和肥料贡献率在不同施肥处理呈不同变化趋势,施肥后3.5 a时T1 相似文献
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为了解2016-2017年中国地区TTSuV2的流行情况以及流行毒株的遗传演化情况,对中国东北、华中、华东、华北、华南、西南、西北7个地区采集的325份仔猪腹泻样品进行PCR检测,并对其中阳性样品的基因组高变区进行克隆与遗传演化分析。结果显示:TTSuV2阳性样品总数为92份,总阳性率为28.31%;成功克隆出目的基因31条,均属于Kappatorquevirus属的TTSuV k2a基因型,且分布于Group1和Group2。基于全长目的基因同源性分析结果显示,31株TTSuV2型鉴定毒株之间的核苷酸同源性为87.5%~99.7%。UTR核苷酸序列比对结果显示,所有鉴定毒株的核苷酸突变位点主要集中在第51~230 nt。ORF2蛋白序列比对结果显示,所有鉴定毒株的氨基酸突变位点主要集中在第39~49 aa;ORF1蛋白序列比对结果显示,氨基酸突变位点主要集中在第19~50 aa。重组分析结果显示,共存在1株潜在重组毒株TTSuV/515。ORF2基因选择压力分析结果显示,3个密码子位点受到正选择压力,4个密码子位点受到负选择压力。 相似文献
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