人大血管内皮细胞培养条件的完善

本研究的目的是确定支持人大血管内皮细胞增殖的最适培养条件，以人隐静脉内皮细胞（HSVEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为研究对象，研究了基础培养基（14种），胎牛血清（FBS）和有丝分裂原（3种）的影响与细胞增殖的关系。另外还测定了几种胞外基质（ECM）包被的培养皿的效果。结果表明，促进细胞增殖最有效的培养基为MCDB131，与更常用的M119培养基相比，MCDB131可使细胞增殖提高2.3倍，与不加血甭的培养基相比，培养基中加入20?S可使细胞增殖提高7.5倍，肝素（50μg/mL)和内皮细胞生长补充物（ECGS）（50μg/mL)能显著提高细胞增殖，上皮细胞生长因子（EGF）不能提高细胞增殖，与生长在用纤维粘连蛋白，层粘连蛋白，明胶或胶原Ⅰ和Ⅳ包被的培养板上的细胞相比，生长在未包被的培养板上的内皮细胞在增殖和形态方面无统计学差异。HSVEC和HUVEC增殖最大的培养条件为MCDB131培养基中加入2mmol/L谷氨酰胺，20?S，50μg/mL肝素和50μg/mLECGS，ECM包被培养皿无增殖作用。     

陕西省牛猝死症的病原分离鉴定

猝死症(Sudden death syndrome,SDS),又称暴死症或急性死亡综合征,该病的共同特点是发病急、病程短、死亡率高。20世纪80年代,本病只在我国河南商丘、周口地区零星发生,以犊牛发病为主,成年牛很少发病;但90年代以后,家畜发病数量及品种逐年增多,发病地区也逐年扩大,涉及到河南、吉林、宁夏、山东等20多个省和500多个县(市),给我国的养牛业带来了巨大的经济损失。本病作为一种综合征,     

人工感染猪支原体肺炎的病理学观察

用猪肺炎支原体人工感染仔猪。发病猪临床表现轻度咳嗽和气喘。尸体剖解可见肺呈心叶、尖叶、中间叶和膈叶边缘胰样变,支气管淋巴结肿胀,切面湿润;右心室肥大、心包积液;肾脏稍肿大,色褐黄;肝脏轻度肿大,色泽较黄。病理组织学变化为细支气管周围有淋巴细胞增生,形成"管套"或结节,肺泡壁上皮细胞变性、坏死;肝细胞、肾小管上皮细胞颗粒变性。     

马立克病肿瘤相关抗原间接ELISA检测方法的建立

用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原（MATSA）免疫SPF级BALB／c小鼠制备阳性对照抗体，以SPF级BALB／c小鼠血清为阴性对照抗体，筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果，包被液为0．1mol／L pH9．6的碳酸盐缓冲液，抗原包被浓度为4μg／mL，封闭液为含10g／LBSA的PBST，抗血清稀释比例为1：800，酶标抗体稀释比例为1：1200，酶标抗体作用时间为37℃温育45min，底物作用时问为37℃温育15min，终止液为2mol／LH2SO4，洗涤4次，每次1min为最佳反应条件。将建立的方法应用于MATSA单克隆抗体研制过程中阳性克隆的筛选，成功获得了MATSA的单克隆抗体，表明该优化条件为间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。     

醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备

为研制检测醋酸甲羟孕酮（MPA）的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）上制备免疫原（MPA—BSA）与包被原聊PA—OVA）,通过BALB／c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明：成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8：1、12：1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1：8×10^4,IgG1亚类,K型轻链,腹水抗体IC50为5．0ng·mL^-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12．5％、〈0．01％、〈0．01％和〈0．01％。作者认为：MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。     

表达miR-150shRNA细胞株的初步建立

为了探讨融合microRNA重组干扰载体构建的方法,为今后mi R-150对猪瘟病毒(CSFV)潜在的调控进行研究,利用生物信息学技术筛选出mi R-150,设计并合成了表达mi R-150的两条shRNA序列的DNA单链,将其退火后与干扰载体pGenesil-1连接,构建了含有mi R-150shRNA和绿色荧光蛋白基因的重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,提取并纯化质粒后,采用脂质体法将重组质粒转染PK-15细胞,用G418抗性筛选。经过酶切鉴定和测序鉴定,表明成功构建了重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,并在转染24 h后即可检测到绿色荧光。本研究成功得到稳定表达mi R-150的细胞株,所建的方法可以应用于各种microRNA的构建。     

IFN-γ对PCV-2增殖效果的影响

在病毒培养物中添加IFN-γ,研究提高PCV-2病毒滴度的最佳培养方法。以不同活性单位的IFN-γ和不同浓度的NH4Cl配合使用分别添加至培养基,用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)对病毒毒价(TCID50)进行测定;于72h后分别测定添加与不添加IFN-γ接毒细胞的细胞周期。结果显示,500U/mL IFN-γ和75mmol/L NH4Cl处理PK-15后病毒的TCID50达到最大值5.9;且无论在病毒接种细胞前还是接种后添加IFN-γ均大幅提高病毒增殖力,而且两者提高幅度相同;细胞周期测定显示,最适量的IFN-γ和NH4Cl配合使用后,细胞增殖活性增加。说明,重组IFN-γ可以提高PCV-2在PK-15中的病毒增殖滴度。     

疫情爆发下《兽医公共卫生学》课程教学改革探讨--以西北农林科技大学为例

非洲猪瘟疫情爆发使我国面临的兽医公共卫生问题日益严峻,同时,新冠肺炎疫情防控对本科教学工作提出挑战。新形势下高校教师应充分认识到创新工作思路的必要性。作者根据自身的教学与实践经验,根据农业院校《兽医公共卫生学》课程安排现状以及该课程在兽医领域的重要性,提出将该门课程纳入必修课学习的建议,同时对该门课程的教学内容、教学形式、考核方式以及教师队伍的建设等进行改革和探讨,让学生在特殊时期对知识点融会贯通,引导学生对兽医公共卫生学的认知从被动吸收转变为主动学习,培养出符合新时代社会发展需求的兽医公共卫生人才。