突变体黑羽鹌鹑MHC classⅠ第4～8外显子多态性

以突变体黑羽鹌鹑为试验动物,用优化煮沸法提取鹌鹑基因组DNA。根据日本鹌鹑MHC classⅠ的mRNA设计1对引物,采用PCR技术扩增突变体黑羽鹌鹑MHC classⅠ基因片段,运用DNAStar6.0软件对该序列进行分析,显示该片段大小为991bp,G＋C含量较高为62.46%,A＋T为37.44%,并检测到5个突变位点。利用Blast程序与日本鹌鹑mRNA比对,该片段上含有第4～8外显子和第4～7内含子,其中第4外显子上含有4个T/C突变位点。结果表明,突变体黑羽鹌鹑MHC classⅠ第4外显子具有多态性,这些多态性与其免疫功能的关系如何,有待进一步研究。     

伏马菌素B1人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

本研究合成并鉴定伏马菌素B₁(FB₁)人工抗原,通过动物免疫制备敏感性高、特异性好的鼠源FB₁多克隆抗血清。采用碳二亚胺(EDC)法将FB₁分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成免疫抗原FB₁-BSA和检测抗原FB₁-OVA,经鉴定后,分别按10和30μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔3周,最后1次免疫30d后,断尾采血,制备多抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。结果表明,免疫的6只小鼠效价均达1∶104以上,3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC₅₀为61.3ng/ml,且具有良好的特异性。本试验成功合成了FB₁人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的鼠源多克隆抗体血清,为FB₁单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

分泌抗春雷霉素单克隆杂交瘤细胞株的建立 及免疫学特性鉴定

【目的】制备高灵敏、高特异性的抗春雷霉素单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】采用EDC法将KSM分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫原KSM-BSA和包被原KSM-OVA,经SDS-PAGE鉴定后,免疫Balb/c小鼠,免疫间隔4周,4次免疫后,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗KSM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗KSM的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。【结果】SDS-PAGE鉴定结果显示KSM-BSA成功偶联,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠血清效价均达1:104以上,其中3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为73.9ng•mL-1,融合后筛选出两株杂交瘤细胞株1G7和2C8,亚型均为IgG1型,其细胞上清效价分别为1:5.12×103 和1:1.28×103,腹水效价分别为1:5.12×105和1:2.56×105,抗KSM的单克隆抗体对春雷霉素的IC50为8.902ng•mL-1,与其它竞争物的交叉率均小于0.03%。【结论】本试验成功合成了春雷霉素人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体,为春雷霉素免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

大宝鸽、石岐鸽和杂交王鸽生产性能和肌肉营养成分分析

为了解大宝鸽、石岐鸽和杂交王鸽的生产性能和肌肉营养成分,本实验分别测定分析大宝鸽、石岐鸽、杂交王鸽3种鸽子0～30日龄及成年鸽（3年龄鸽）生长性能、30日龄鸽屠宰性能、成年鸽（3年龄鸽）胸肌中的常规营养成分、氨基酸及脂肪酸含量。结果表明：大宝鸽的宰前活重和胸肌重高于石岐鸽和杂交王鸽（P<0.05）,但是屠宰率低于石岐鸽和杂交王鸽（P<0.05）;大宝鸽的生长速度、体重、体斜长、龙骨长、胸宽、骨盆宽及胫长高于石岐鸽和杂交王鸽（P<0.05）;杂交王鸽和大宝鸽的肌肉蛋白质含量高于石岐鸽（P<0.05）,杂交王鸽的肌肉脂肪含量低于大宝鸽和石岐鸽（P<0.05）,杂交王鸽的肉质与大宝鸽和石岐鸽相比更符合高蛋白低脂肪的理想型可食用肉质消费理念,并且杂交王鸽的风味氨基酸含量与大宝鸽相似且高于石岐鸽（P<0.05）,但是不饱和脂肪酸含量低于大宝鸽和石岐鸽（P<0.05）。研究表明大宝鸽的宰前活重和生长速度、杂交王鸽高蛋白低脂肪的肉质和屠宰率以及石岐鸽的屠宰率都是表现突出的遗传特性,可以作为后期专门化品系培育选择的遗传特性。     

中华蜜蜂蜂毒明肽基因克隆及生物信息学分析

【目的】掌握中华蜜蜂蜂毒明肽基因的生物信息,为进一步深入研究其生理功能及通过生物工程技术生产蜂毒明肽产品奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆中华蜜蜂蜂毒明肽基因,并对所获得的基因组序列进行详细的生物信息学分析。【结果】从蜜蜂头部和胸部组织中成功扩增获得511bp的蜂毒明肽基因序列,该序列GC碱基含量仅为24%,包含一个141bp的开放阅读框,编码46个氨基酸残基;该序列与肥大细胞脱颗粒肽的同源性高达58%,存在较明显的信号肽序列和跨膜区结构。【结论】蜂毒明肽是一种小分子抗菌肽,存在较明显的信号肽序列和跨膜区结构,具有生物抗菌肽的典型特性,但需进一步加工切除信号肽序列后才能发挥作用。     

中华蜜蜂防御素基因克隆及生物信息学分析

防御素是昆虫体内抵抗外界微生物的重要物质,中华蜜蜂对病原微生物具有较强的抵抗力。本研究利用PCR技术克隆了中华蜜蜂防御素基因,对得到的基因组序列进行了详细的生物信息学分析,发现中华蜜蜂与意大利蜜蜂防御素蛋白氨基酸序列的相似性达到92%,与其它物种也具有比较高的同源性,防御素蛋白存在比较明显的信号肽序列和跨膜区结构,这与其它昆虫的防御素蛋白的结构和功能相似,从而为进一步研究中华蜜蜂防御素的生物功能提供良好的铺垫。     

牛Smad 9基因cDNA克隆及生物信息学分析

Smad 9属于R-Smads,在TGF-β信号传导过程中起着重要作用。本研究利用生物信息学方法,结合RT-PCR技术和SMARTRACE技术,得到全长为1 871 bp的牛Smad 9基因cDNA序列。通过核酸序列分析发现,牛Smad 9基因编码345个氨基酸残基,牛Smad 9蛋白无跨膜区和信号肽序列,该蛋白与人、小鼠、大鼠和红原鸡在氨基酸序列上分别有78.84%,79.21%,77.88%和70.38%的同源性。通过多组织RT-PCR分析发现,牛Smad 9基因的组织表达谱很广,在卵巢、肝、肌肉、小肠、脂肪、子宫、肾脏、心肌、肺、胰腺、睾丸、乳腺组织中均有表达。     

MC1R基因与朝鲜鹌鹑羽色关系的研究

黑素皮质素受体1(MC1R)又称促黑素细胞激素受体(MSH-R),由毛色扩展位点编码而成,对动物体色的形成起重要作用,本研究分析了MC1R基因突变与朝鲜鹌鹑羽色之间的关系。通过混合样品DNA测序方法寻找MC1R基因的突变位点,采用PCR-SSCP的方法对突变位点在4种羽色鹌鹑(栗羽、黄羽、白羽、黑羽)群体中的分布情况进行了研究,以揭示MC1R基因与鹌鹑羽色性状之间的关系。结果表明,在鹌鹑MC1R基因上存在一个A/G突变位点,导致编码蛋白发生Ile58Val突变,通过PCR-SSCP分析发现,该突变位点在4种羽色鹌鹑群体间没有显著差异(P>0.05)。本研究没有发现与日本鹌鹑报道相同的Glu92Lys突变位点,表明朝鲜鹌鹑的黑羽突变与报道的日本鹌鹑黑羽突变的机制不同,而且朝鲜鹌鹑的黑羽突变可能还与其它基因突变有关。     

肌肉组织液对番鸭脂肪细胞增殖分化和脂质沉积的影响

为研究肌肉组织液对脂肪细胞增殖、分化和脂质沉积的影响，试验在体外培养的番鸭脂肪细胞中添加不同浓度的肌肉组织液，以模拟肌内脂肪的微环境。结果显示，添加10%肌肉组织液对体外培养的番鸭脂肪细胞的增殖、分化有显著抑制作用，导致成熟脂肪细胞中脂质沉积显著减少（P<0.05），同时显著降低脂肪合成相关基因，即脂肪酸合成酶基因（FASN）、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ基因（PPARγ）、细胞核受体共激活因子1和3(SRC1、SRC3)基因表达水平（P<0.05），显著升高脂肪分解相关基因脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）表达水平（P<0.05）。结果表明，在体外培养的番鸭脂肪细胞中添加10%肌肉组织液能够模拟肌内脂肪的微环境，显著抑制脂肪细胞的增殖、分化和脂质沉积。