不对称PCR-SSCP在基因突变检测中的应用

为了研究不对称PCR-SSCP在基因突变检测中的准确性,以鲁西黄牛和荷斯坦奶牛为研究对象,用不对称PCR-SSCP分析技术分析了牛SMAD4基因3′端非翻译区的碱基突变情况,比较了不对称PCR-SSCP和传统PCR-SSCP分析的优缺点。结果表明,鲁西黄牛和荷斯坦奶牛SMAD4基因3′端非翻译区有1个T碱基插入突变位点和1个G→A突变位点,其中G→A突变产生了1个HhaⅠ酶切位点;不对称PCR-SSCP和HhaⅠ酶切分析116头鲁西黄牛和75头荷斯坦奶牛群体G→A突变位点的频率完全一致,说明不对称PCR-SSCP不仅可以用于基因突变的检测,而且具有较高的准确性;不对称PCR-SSCP较传统PCR-SSCP的条带少且带型清晰、稳定性较高。以上结果表明,不对称PCR-SSCP可以用于基因突变的检测。     

牛BMP15基因5''''UTR区克隆及生物信息学分析

研究克隆了牛BMP15基因5'UTR区1 350 bp的基因组序列,利用promoter在线工具分析发现,在扩增片段的255～305 bp 处存在可能的启动子位点;利用TFSEARCH在线程序发现该段序列上有35个评分在90分以上的潜在的转录因子结合位点,其中评分在95分以上的有5个.在这些转录因子的结合位点中,部分与启动子有关(如GC-box等),但没有发现对转录有重要调控作用的TATA-box.     

北京鸭胸肉发育过程中MRFs和SIRT1基因的表达规律研究

生肌决定因子对肌细胞的增殖和分化、肌纤维的数量和大小起着关键的调控作用,而且对肉质和风味也有着非常重要的影响.SIRT1对生肌决定因子的表达具有一定的调控作用,因而影响肌肉和脂肪细胞的增殖、分化和凋亡.本研究利用qRT-PCR技术分析了北京鸭出壳后胸肌发育过程中生肌决定因子家族的4个成员(MyoD、MyoG、Myf5和Myf6)和SIRT1基因的表达变化模式,结果发现MyoD1和Myf5基因在北京鸭出壳后的肌肉组织中呈下降趋势,而且这两个基因具有相似的表达模式;Myf6基因在北京鸭出壳后的肌肉发育过程中没有显著的变化;MyoG基因在北京鸭出壳后的肌肉发育过程中表达量低且没有明显的变化规律.SIRT1基因与MyoD和Myf5基因的表达模式具有显著的相关性,整体上也呈现出下降的趋势.本研究对生肌决定因子和SIRT1基因在北京鸭出壳后胸肌组织中的表达模式进行了比较详细的研究,为揭示北京鸭胸肌发育的分子调控机制提供参考.     

骨形态发生蛋白15及其受体的信号转导

骨形态发生蛋白15(bonem orphogeneticp rotein15,BMP15),也称为生长分化因子9B(growthd iferentiationfactor-9B,G DF-9B)属于TGF-β超家族.BMP15通过促进颗粒细胞有丝分裂、抑制促卵泡素受体在颗粒细胞中表达和促进颗粒细胞分泌的一种因子kit ligand表达来调节颗粒细胞增殖和分化,在雌性哺乳动物生殖中起着关键的调节作用,是近几年来,哺乳动物生殖发育领域的一个研究热点(Moore et al,2005;Shamik Polley et al,2005;Chu et al,2007;Vacca et al,2010)     

3个鹌鹑群体的微卫星标记多态性分析

为了从分子水平上揭示朝鲜鹌鹑、中国黄羽鹌鹑、中国黑羽鹌鹑3个鹌鹑群体的遗传结构和亲缘关系,为鹌鹑的遗传资源研究提供科学依据,本研究采用PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚类分析等方法对3个鹌鹑群体进行了微卫星标记的多态性分析。结果表明,12个微卫星标记在3个鹌鹑群体中检测到的观测等位基因数在4~7个之间,中国黄羽鹌鹑、中国黑羽鹌鹑、朝鲜鹌鹑的平均多态信息含量分别为0.6853、0.6401和0.6565;平均期望杂合度分别为0.7333、0.6957和0.7111,以中国黄羽鹌鹑群体遗传多态样性最为丰富。聚类分析结果表明,中国黑羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑的遗传距离最小为0.0628,因此中国黑羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑先聚为一类,而后与中国黄羽鹌鹑聚合在一起。这也更进一步证明了中国黑羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑有更近的亲缘关系,而中国黑羽鹌鹑,朝鲜鹌鹑与中国黄羽鹌鹑的亲缘关系要远一些。     

9个微卫星基因座在太行黑山羊中的遗传多样性研究

通过9个微卫星标记研究太行黑山羊的遗传多样性,为地方山羊品种的选种、选育及保种工作奠定基础。本研究选取位于绵羊第6号染色体上与高繁殖力主效基因FecX和FecB紧密连锁的7个微卫星基因座(TGLA68、OarAE101、BM1329、LSCV043、BM143、OarHH55、GC101)和第4号染色体上的微卫星基因座OarHH35及第8号染色体上的微卫星基因座BM1227,对其进行遗传多样性研究。结果表明:在太行黑山羊中的9个微卫星座位共检测到69个等位基因,平均为7.67个;9个微卫星基因座的平均多态信息含量为0.781,每个微卫星基因座的PIC>0.5,9个微卫星基因座的平均有效等位基因数、平均杂合度分别为5.24、0.81。由此表明,9个微卫星标记均具有高度多态性,可用于太行黑山羊的遗传多样性的分析。     

朝鲜鹌鹑MHC class Ⅰ基因第2、3外显子多态性与NDV抗性的关联分析

【目的】研究朝鲜鹌鹑MHC classⅠ基因第1,2和3外显子的多态性,并与新城疫病毒抗性进行关联分析。【方法】采用胸肌注射的方法对14日龄朝鲜鹌鹑进行新城疫La Sota弱毒株攻毒,每周注射1次,连续攻毒3周后,心脏采血,采用β-微量法测定血清中新城疫抗体水平。PCR扩增朝鲜鹌鹑MHC classⅠ基因,测序后采用DNA Star、SPSS等分析软件研究朝鲜鹌鹑MHC classⅠ基因第1,2,3外显子的多态性,并分析不同基因型新城疫抗体水平的差异。【结果】朝鲜鹌鹑的新城疫抗体效价为26～210。PCR扩增获得了1 290bp的MHC classⅠ基因,其编码区序列为780bp,编码259个氨基酸。通过与已知序列日本鹌鹑RNA(AB005528)比对,得到长度分别为76,272和274bp的第1,2和3外显子。在第1外显子上未检测到突变为点,在第2和3外显子上共检测到11个突变位点(第2外显子上4个突变位点:257bp(A/C)、267bp(A/T)、366bp(A/G)和500bp(T/G);第3外显子上7个突变位点:795bp(T/C)、798bp(T/C)、810bp(T/G)、830bp(A/G)、873bp(A/T)、927bp(A/G)和932bp(C/G)),均为中度多态基因座,11个突变位点中,267bp(A/T)、830bp(A/G)、873bp(A/T)、932bp(C/G)突变导致编码氨基酸改变,500bp(T/G)、873bp(A/T)、932bp(C/G)突变位点基因型之间新城疫抗体水平存在显著差异(P0.05)。【结论】朝鲜鹌鹑MHC classⅠ基因第2、3外显子具有丰富的多态性,并且与新城疫病毒抗性相关。     

种根尺寸对掌叶覆盆子埋根育苗效果的影响

开展不同尺寸种根对掌叶覆盆子埋根育苗效果的试验结果表明:掌叶覆盆子种根粗度和长度增加,苗木存活率、苗高生长量、新根长度也相应增加;当根径0.4～0.6 cm、根长5 cm时,苗木平均存活率达到77.25％,苗高平均生长量17.68 cm,新根平均长度11.09 cm;当根径0.15 cm、根长10 cm时,苗木平均存活...     

定安鹅IGF1基因克隆及生物信息学分析

[目的]研究定安鹅IGF1基因的结构特征及其编码蛋白的功能预测和分析。[方法]利用RT-PCR技术及生物信息分析技术,克隆并分析了定安鹅IGF1基因的cDNA序列。[结果]通过基因克隆与分析,得到558 bp的cDNA片段,其中包含1个462 bp的开放阅读框,编码153个氨基酸残基。通过Blast分析发现,鹅IGF1基因在进化上非常保守。信号肽预测分析表明,定安鹅IGF1蛋白的前49个氨基酸残基为信号肽序列。通过亚细胞定位分析发现,定安鹅IGF1成熟蛋白可能位于细胞外。[结论]该研究可为进一步研究定安鹅IGF1基因的功能奠定基础。     

TNC基因在牛肌肉发育和前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达研究

【目的】分析TNC基因在牛背最长肌组织发育和前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化趋势及其与脂肪沉积之间的关系。【方法】利用qRT-PCR技术分析了3、6、12、18、24和30月龄南阳牛背最长肌组织中TNC基因的表达变化,利用索氏抽提法测定了24头牛背最长肌组织中的脂肪含量。分离了牛前体脂肪细胞,通过在培养基中添加2μmol/L柠檬苦素干扰细胞的分化,利用qRT-PCR技术分析了正常诱导分化和柠檬苦素干扰后的诱导分化过程中TNC基因的表达变化。【结果】TNC基因在18月龄之后的牛背最长肌组织中的表达水平逐渐升高。根据肌肉组织中脂肪含量的高低分为高肌内脂肪含量组和低肌内脂肪含量组,发现TNC基因的表达水平在这2组之间没有显著差异。TNC基因在牛前体脂肪细胞诱导分化开始后的第6小时表达量急剧升高,之后开始下降;在诱导分化的后期,当细胞质中有明显的脂质液滴积累时,TNC基因的表达水平再次升高。在诱导分化培养基中添加柠檬苦素能够抑制细胞的分化和脂质的积累,同时也导致TNC基因表达量显著下降。【结论】TNC基因参与了脂肪细胞的分化和脂质沉积的调控过程,该基因表达量上调有利于细胞质中脂质液滴的积累。