牛BMPRⅠA基因cDNA的克隆及组织表达谱分析

【目的】克隆牛BMPRⅠA基因cDNA全长,以进行生物信息学分析和组织表达谱研究。【方法】运用生物信息学方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,对牛BMPRⅠA基因进行cDNA全长克隆和生物信息学分析,并通过RT-PCR方法进行了组织表达谱研究。【结果】克隆得到了牛BMPRⅠA基因4 067 bp的cDNA全长序列,通过核酸序列分析发现,该基因编码532个氨基酸,与人、黑猩猩、小鼠、大鼠、犬和红原鸡在核酸序列上分别有91%,93%,89%,88%,91%和82%的同源性;在氨基酸序列上分别有97%,95%,96%,95%,97%和91%的同源性。通过生物信息学分析发现,牛BMPRⅠA蛋白包含一个信号肽序列和一个跨膜区序列,其成熟蛋白可能位于细胞膜上。在牛卵巢、肝、肌肉、小肠、脂肪、子宫、肾脏、心肌、肺、胰腺、睾丸、乳腺、瘤胃、脾脏、淋巴、胸腺等组织中都检测到有BMPRⅠA基因表达。【结论】牛BMPRⅠA基因是一个功能重要、进化保守的基因,具有广泛的组织表达谱。     

南阳黄牛肌肉发育过程中的MyoD和MEF2基因的表达变化研究

利用荧光实时定量PCR技术分析了南阳黄牛3月龄到24月龄间背最长肌组织中MyoD和MEF2基因家族的表达变化情况.结果表明,MyoD基因的表达呈先升高后降低的趋势,在18月龄时表达量最高.MEF2A基因在3月龄时表达量最低,在12月龄和18月龄时表达量显著升高,随后表达量下降;MEF2B基因的表达呈持续上升趋势;MEF2C基因在3月龄时表达量最低,在肌肉发育过程中表达量变化比较小;MEF2D基因表现出明显的先升高后降低趋势,18月龄和24月龄时的表达量比3月龄时显著高.     

微卫星标记BMS2508和Bulge5在河南淮山羊中的遗传多样性研究

用2个微卫星标记,通过PCR扩增,利用12％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色等方法对河南淮山羊进行微卫星DNA遗传多态性进行研究.结果显示:在Bulge5基因座上检测出6个等位基因,其片段大小在105～140 bp之间,其多态信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)、平均杂合度(He)分别为0.7340、3.182 0、0.8325;BMS2508位点有6个等位基因,其片段大小在100～150 bp之间,其多态信息含量、有效等位基因数、平均杂合度分别为0.843 0、3.706 0、0.8446.说明BMS2508和Bulge5等2个微卫星位点在河南淮山羊上均为高度多态位点,利用微卫星DNA多态性预测山羊的生产性能是可行的,本研究为山羊的选育、保种和开发利用提供了理论依据.     

三疣梭子蟹F型ATP酶β亚基(F-ATPaseβ)基因的克隆、组织表达及在家系近交中的变化

采用RACE技术(cDNA末端快速扩增技术)克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)F型ATP酶β亚基(F-ATPaseβ)基因,命名为ptF-ATPaseβ。该基因cDNA全长为1965 bp,5'和3'非编码区分别为571 bp和341 bp,开放阅读框为1053 bp,推测编码350个氨基酸,预测分子量为37.9 kDa,理论等电点为4.86。ptF-ATPaseβ氨基酸序列含有F1-ATPaseβ标志性蛋白结构域、AAA结构域和ATP-synt-ab-C结构域。同源性及系统分析显示,ptF-ATPaseβ氨基酸序列与斑节对虾(Penaeus monodon)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性高达89%。实时荧光定量PCR显示,ptF-ATPaseβ基因在肝胰腺、肌肉、心脏、鳃、胃、肠、精巢和卵巢中均有表达,其中,在肝胰腺和心脏中表达量最高,在肠中最少。随着近交系数的增加,各代ptF-ATPaseβ基因的表达量在肝胰腺和心脏中均下降且显著低于F0代(P0.05)。酶活检测结果显示,心脏中的ATP合酶活性从F6代开始出现下降且显著低于F0代(P0.05),但肝胰腺中ATP合酶活性无显著变化。本研究结果表明,近交造成了三疣梭子蟹ptF-ATPaseβ基因表达及ATP合酶活力的衰退。     

牛GDF9基因5′侧翼区克隆及生物信息学分析

生长分化因子9(GDF9)是转化生长因子β(TGF-β)超家族的一个新成员,对哺乳动物卵泡的发育有重要的调控作用。本研究克隆了牛GDF9基因5′侧翼区1 370 bp的基因组序列,生物信息学分析表明,该区域的平均GC含量为38.5%,利用CpG岛在线预测软件CpGProD分析表明,牛GDF9基因5′侧翼区没有CpG岛;利用Promoter在线工具分析发现牛GDF9基因可能存在2个启动子位点,一个在翻译起始密码子前353bp处,另一个在翻译起始密码子前683 bp处;利用TFSiteScan在线程序分析发现该区域有98个潜在的转录因子结合位点,其中包括一些真核生物启动子的核心元件,如1个TATA-box、4个GC-box等,表明该区域是转录因子结合位点比较密集的区域。     

朝鲜鹌鹑黑素皮质素受体1基因多态性及其在不同羽色个体中的表达

通过混合样品DNA测序方法寻找黑素皮质素受体l（MC1R）基因的突变位点,采用Alu1-RFLP对突变位点在4种羽色（栗羽、黄羽、白羽、黑羽）鹌鹑群体中的基因分布进行了研究;利用qRT-PCR技术测定了MC1R基因在12日龄时4种羽色鹌鹑胚胎皮肤组织中的表达情况。结果表明,在鹌鹑MC1R基因上发现1个T/C突变位点,该位点没有导致编码蛋白氨基酸序列改变,A1u1-RFLP分析发现,该突变位点的不同基因型在4种羽色鹌鹑群体间的分布有显著差异（P〈0.05）。4种羽色鹌鹑皮肤组织中MC1R基因的表达量存在明显差异,栗羽鹌鹑皮肤组织中该基因的表达量明显高于黑羽鹌鹑皮肤中的表达量（栗羽〉黄羽〉白羽〉黑羽）。本试验没有发现导致日本鹌鹑黑羽突变的Glu92Lys突变位点,表明朝鲜鹌鹑的黑羽突变与报道的日本鹌鹑黑羽突变的机制不同,朝鲜鹌鹑的黑羽可能与其他基因的突变有关。     

鞭笋采挖对毛竹鞭径粗度增加的原因分析

通过对采挖鞭笋与不挖鞭笋之间6 a后地下竹鞭鞭径变化的分析,结果显示:鞭径为1.9 cmd≤2.5 cm的鞭段数减少22.22%;2.5 cmd≤3.0 cm的鞭段数增加22.03%;≥3.0 cm时,鞭段数所占的比例变化很小。采挖鞭笋后竹鞭鞭径增大的主要原因:一是细鞭、弱鞭被挖除,保留了粗壮的竹鞭,直接提高了整体的竹鞭鞭径粗度;二是竹鞭鞭径粗度与立地条件、竹鞭在土层中垂直分布的深度有关,通过人为有意识地将粗壮的浅鞭进行深埋,对竹鞭鞭径生长创造了条件。     

栽培基质对多花黄精生长的影响

为了研究出适宜多花黄精生长的栽培基质,以毛竹林下腐殖土(简称腐殖土)+草木灰(A)、腐殖土+有机肥(B)、腐殖土+菌棒废料(C)作为基质材料与腐殖土(CK)进行对照,开展毛竹林下容器栽培多花黄精试验.结果表明:多花黄精在4种配方的基质中的存活率均超过95％,差异不显著.处理A效果最好(腐殖土:草木灰体积比=95:5)....     

红托竹荪的引进与栽培

红托竹荪是一种营养丰富、味道鲜美的高档食用菌。其含有10种氨基酸及维生素、矿物质和竹荪多糖,营养价值高于棘托长裙竹荪。此外,红托竹荪质地致密,裙短而粗,无异味,具有降胆固醇和减肥等多种功效,其中的竹荪多糖是抗癌的有效成份。因此,红托竹荪的价值     

基质金属蛋白酶2,3,13基因表达水平与牛肉质性状的相关性分析

系水力、剪切力和蒸煮损失是肉质性状的重要指标,肌纤维细胞外基质的成分和结构对肉质性状有重要的影响,基质金属蛋白酶(MMPs)是体内降解细胞外基质的蛋白酶。本研究采用qRT-PCR技术分析了南阳牛肌肉发育过程中MMP2,3,13基因的表达变化规律,发现MMP2和MMP3基因在18月龄时表达量显著降低(P0.05),MMP13基因表达水平在整个发育期间无显著差异。采集了24头2岁左右的南阳牛与夏洛莱F1代杂交牛背最长肌组织,分别测定了系水力、剪切力、蒸煮损失和肌内脂肪含量,发现MMP2基因的表达量与剪切力间呈显著负相关(r=-0.542 0,P0.01);MMP13基因的表达量与系水力间呈显著负相关(r=-0.489 1,P0.05)。结合已有研究,可初步推断MMPs基因可能通过调控胶原蛋白等细胞外基质成分的重构而影响肉质。