非抗性RNAi载体及沙门氏菌递送系统的构建

为了获得一种新型、高效、安全的s iRNA片段的递送系统,应用PCR方法扩增的RNA i-R eady pS IREN-R etroQZsG reen载体中包含了U 6启动子的3.6 kb的产物,特产物与限制性内切酶B g lⅡ酶切平衡致死系统质粒PYA 3334所得的1.8 kb携带链球菌asd基因的DNA片段相连接,转化X 6212感受态细胞,通过平衡致死系统和抗性筛选得到非抗性的目的克隆。结果成功构建了非抗性RNA i载体,命名为pS IREN-A SD ZsG reen,并将此转化X 4550,最终获得稳定性的递送系统。该载体及减毒鼠伤寒沙门氏菌递送系统为今后RNA i干扰技术应用于动物病毒性疾病预防和控制的研究及转基因生物工程产品的研制打下了基础。     

差示苯酚-硫酸法结合DNS法测定红芪多糖(HPS)含量

[目的]优化建立差示苯酚-硫酸法结合DNS法测定红芪多糖含量的方法。[方法]采用单因素试验筛选考察差示苯酚-硫酸法的检测波长、显色剂用量、反应时间等条件;通过线性关系、精密度、稳定性、重复性、加样回收率分别对差示苯酚-硫酸法和DNS法进行方法学考察。[结果]差示苯酚-硫酸法测得的红芪样品中以葡萄糖计的总糖含量平均值为72.49%,DNS法测得样品中以葡萄糖计的还原性单糖含量平均值为8.13%,以葡萄糖计的多糖含量平均为64.36%,RSD均小于4%。[结论]该研究采用所建立的差示苯酚-硫酸法结合DNS法测定了红芪多糖的含量,结果显示此方法较准确稳定、重复性较好,在一定程度上减少游离还原糖及杂质的干扰,降低了由于操作等带来的系统误差,使样品中多糖含量的测定结果更接近真实值,为红芪多糖等中药多糖的含量测定提供更好的参考方法。     

甘松不同提取物GC-MS分析及体外抗氧化活性研究

采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对甘松的水蒸气蒸馏提取物、水提取物、石油醚提取物、95%乙醇提取物、乙醇提取物石油醚萃取相、乙醇提取物氯仿萃取相、乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、乙醇提取物正丁醇萃取相、乙醇提取物剩余萃取相中所含挥发性物质进行对比分析,并考察其对DPPH·、ABTS·⁺、超氧阴离子自由基的清除活性和对Fe³⁺的还原能力(FRAP值)。结果表明,甘松不同提取物中共鉴别出109种化学成分;乙醇提取物正丁醇萃取相对ABTS·⁺自由基的清除活性最强,乙醇提取物乙酸乙酯萃取相对DPPH·、超氧阴离子自由基的清除活性和对Fe³⁺的还原能力最强。本研究可为甘松挥发性成分的临床应用提供依据。     

头孢喹肟与马立克病疫苗联用的试验观察

为了解头孢喹肟对马立克病疫苗的影响,以及头孢喹肟对鸡白痢的预防效果。将不同浓度的头孢喹肟与马立克病疫苗混合后置于25℃,不同时间点取样,采用病毒蚀班计数法进行疫苗效价测定。设头孢喹肟高、中、低3个剂量组,1日龄雏鸡注射混合液2 h后,人工诱发鸡白痢,记录10 d内每组的发病和死亡情况。在与马立克疫苗联合使用时,头孢喹肟的终浓度不超过0.5 mg/m L,混合液在室温放置时间不超过45 min,对疫苗效价无显著影响;头孢喹肟预防鸡白痢试验中,高剂量组和中剂量组的发病率和死亡率均不同程度低于低剂量组,且差异极显著(P0.01);高剂量组与中剂量组之间发病率和死亡率不存在统计学差异。这证明头孢喹肟与马立克病疫苗联合使用是可行的。     

超量添加头孢噻呋对马立克氏病疫苗的危害性评估

头孢噻呋(Ceftiofur)作为第一个动物专用的第三代头孢菌素类抗生素,其抗菌谱广、抗菌活性强,已经在动物细菌性疾病的预防和治疗中得到广泛应用[1~3]。鸡白痢沙门菌是我国养鸡生产中的一种危害非常严重的病原菌,该菌既能水平传播,也能垂直传播[4,5]。研究表明,雏鸡出壳后早期注射头孢噻呋进行预防可有效控制鸡白痢沙门菌引起的雏鸡早期感染,该方法目前在生产中已经大规模推广应用。但是近两年中,本实验室发现国内多家生产管理水平较高的种鸡场生产的商     

鸡白细胞介素6研究进展

白细胞介素6（IL-6）是由多种细胞产生并具有复杂生物学功能的细胞因子,是动物机体内重要的细胞因子之一,它在调节免疫应答、诱导急性期蛋白、调节造血功能方面起着十分重要作用。本文就鸡IL-6在分子生物学、生物活性检测方面的研究进展及其应用前景等进行综述。     

作为疫苗和疫苗载体的胞内细菌

本文综述了结核分支杆菌、单核细胞增生性李斯特菌和沙门氏菌等胞内细菌作为疫苗物质和载体。目前，人们正在考虑预防这些病原体的新的免疫预防策略。策略之一就是使用胞内菌的减毒活菌疫苗以及减毒细菌疫苗载体。这一策略包括两方面的工作，即减毒疫苗菌株的改良和重新构建强毒菌株的减毒突变体。另一种策略是应用亚单位疫苗免疫，如核酸疫苗或病原体的蛋白抗原。     

携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。     

H120活疫苗对部分基因型传染性支气管炎病毒的免疫保护效力

对LH、PZ、CZ-JT和JT等最新分离的传染性支气管炎病毒(IBV)进行S1基因序列分析和基因分型.结果表明:LH株和PZ株均属于QX基因型,但分属2个不同的基因亚群;CZ-JT株属于HN08基因型;JT株则属于CK/CH/LSC/991基因型.用商品化传染性支气管炎活疫苗(H120株)对4个分离株和M41标准强毒株...     

空肠弯曲菌PCR-RAPD分子亚分型及其毒力相关基因分析

对113株不同来源的空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)进行RAPD分析,得到15个基因型,其中菌株分布最集中的基因型为V10、V11、V12和V14,所占比例分别为11.50%、12.39%、13.27%和10.62%,不同源分离株呈高度交叉分布.空肠弯曲菌分离株毒力相关基因分析显示,黏附相关基因codF和racR的平均携带率分别为92.45%和38.69%,鞭毛蛋白基因flaA的平均携带率为73.58%;毒素调节基因cdtA、cdtB、cdtC、wlaN和virB11质粒基因的平均携带率分别为71.70%、52.83%、96.23%、12.26%和1.89%;热休克蛋白和转运相关蛋白基因dnaJ和ceuE的平均携带率分别为0.94%和65.09%,CiaB和pldA基因的平均携带率分别为39.62%和9.43%,58.82%的细菌含有6个以上的毒力相关基因.对不同来源的空肠弯曲菌毒力基因的分析结果显示,鸡源各类毒力基因的携带率普遍高于其他来源的检测结果.