检测莱克多巴胺胶体金免疫层析试验的建立

采用混合酸酐法制备莱克多巴胺-OVA偶联抗原,胶体金标记莱克多巴胺单克隆抗体,建立了检测莱克多巴胺的胶体金免疫层析试验。该试验具有较好的敏感性和特异性,最低可检测10ng/mL的莱克多巴胺,而与克伦特罗和沙丁醇胺无交叉反应。胶体金免疫层析试验对尿液和饲料样品中莱克多巴胺的最低检测量分别为10ng/mL和0.01mg/kg。     

运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5F基因,约1700bp,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,得到候选DNA疫苗pVAX1-F0将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)X4550,获得运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4550(pVAX1-F).以2×108CFU/只的剂量两次免疫CD1小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体应答,X4550(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于X4550(pVAX1)组(P＜0.05),表明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并能够刺激机体产生免疫应答.     

鸡沙门氏菌弱毒苗与微生态制剂联合应用对三黄肉鸡的增重试验

鸡白痢、鸡伤寒是重要的蛋传疾病之一 ,严重危害养鸡业 ,造成的经济损失巨大。国内常采用药物控制的方法减轻其危害 ,多次反复用药 ,不仅使成本上升 ,而且带来耐药性和药残等一系列问题 [1～ 3 ]。事实证明仅依赖药物控制不是上选之策 ,加之在实际生产中并没有采取严格的净化措     

浅谈畜牧生产对环境的污染及其防治策略

正1畜牧生产对环境污染的现状1.1对土壤的污染我国现在畜牧生产方式还延用较为传统的方法,对土壤有较大的污染,最主要的污染源就是家禽的粪便。传统方法对处理粪便能力较差,大量粪便和尿液对土壤造成污染,易使土壤变质。土壤的变质使土壤中的有利物质发生严重变化,失去了对污染源的过滤能力,易被细菌和寄生虫侵蚀,使土壤无法发挥自身作用。另外,粪便中有大量寄生虫与微生物,导致土壤有机物增加,使土壤体温不断提高,有     

H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017株反向遗传操作系统的建立

为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中.8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1:256.rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性.本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础.     

三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体（MS）活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗（MS-H株）,B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示：三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示：在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。     

反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1，经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标，评价其免疫和交叉免疫保护作用。结果表明：反向遗传操作技术为构建新型的流感疫苗株提供了更好的方法。     

黄芪多糖纯化前后的化学-生物学评价研究

以研究黄芪多糖标准提取物为目标,综合化学指标和生物学指标,对纯化前后所得黄芪多糖进行比较分析。采用改良差示苯酚-硫酸法测定多糖含量,以红外光谱表征、TLC和GC-MS分析单糖组成,对多糖化学特征进行评价分析;采用DPPH自由基、羟自由基·OH、超氧自由基O₂~-·和总抗氧化活性4项指标对多糖抗氧化活性进行评价。结果显示,黄芪粗多糖中的多糖质量分数为50.00%,纯化后的黄芪多糖纯度为81.15%;TLC结合GC-MS结果显示,黄芪多糖水解物中含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖5种单糖,其摩尔比为1.52∶3.27∶1.00∶44.66∶9.55;纯化后的黄芪多糖对DPPH自由基和羟自由基·OH的清除率、对超氧自由基O₂~-·的清除率及总抗氧化活性较纯化前的黄芪粗多糖均更强。结果表明,纯化后黄芪多糖得到有效富集,并保持了原有的性质和活性,产品品质得到提高,为黄芪多糖制备工艺的科学性、合理性提供依据。     

减毒沙门菌运送的H9N2亚型禽流感病毒DNA疫苗的研制及其免疫试验

根据GenBank中已发表的H9N2亚型AIV HA基因序列设计并合成一对PCR引物,通过RT-PCR扩增A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株的HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达质粒pVAX1-HA和asd-pVAX1-HA.将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实,HA基因在细胞内得到了瞬时表达.进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207和X4550,得到两种运送DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA).以5×109 cfu/只的剂量两次口服接种1日龄的商品代伊莎褐蛋鸡,免疫鸡既能检测到HA特异性的血清抗体应答,又能检测到黏膜免疫应答,采用A/Chicken/Shanghai/3/2002(H9N2)AIV毒株经滴鼻和口服同时攻毒免疫鸡后,这两种疫苗抑制免疫鸡排毒的效果与灭活疫苗有显著差异.     

传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定

为制备能与多种基因型传染性支气管炎病毒(IBV)反应的广谱性单克隆抗体,反应谱能够覆盖当前在国内流行的主要优势基因型毒株.通过RT-PCR克隆了QX型IBV CK/CH/JS/2010/12株N基因,分别插入原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6P-1构建了重组质粒pET-N和pGEX-N,并在大肠杆菌中进行原...