中国明对虾血浆蛋白质组双向电泳技术的建立与主要高丰度蛋白点的质谱鉴定

中国明对虾的血浆脱盐处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同pH范围IPG胶条、脱盐方式、上样量等进行了优化,并分别利用硝酸银和胶体考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析,采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对主要的高丰度蛋白点进行了质谱鉴定。结果显示,中国明对虾血浆在pH 4~7范围、18 cm的2-DE胶上得到了很好的分离,上样量为150 μg左右,采用银染可以获得较好的分析胶图谱;而上样1 000 μg左右,采用胶体考染方法能获得较好的制备胶图谱;通过MALDI-TOF/TOF MS鉴定的11个最主要的高丰度蛋白点都是血蓝蛋白。建立并优化了中国明对虾血浆蛋白质组学的双向电泳技术体系,为进一步开展对虾等甲壳动物的血浆蛋白质组学研究奠定了基础。     

中国明对虾血浆蛋白质组学研究中高丰度蛋白的超速离心去除技术

应用超速离心技术对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血浆样品进行处理,比较去除和未去除高丰度蛋白血浆的双向凝胶电泳(2-DE)图谱。结果表明:对虾血浆高丰度蛋白经去除后,血浆样品中的低丰度蛋白得到较好的分离和浓缩。未处理样品的2-DE图谱分离的蛋白质170个,而去除高丰度蛋白后血浆2-DE图谱上分辨率增高,分离出蛋白质点520个,一些低丰度蛋白质被有效分离出来。研究证实,超速离心技术可有效去除对虾血浆高丰度蛋白(血蓝蛋白),提高低丰度蛋白的检出敏感性,为对虾等甲壳动物的血浆蛋白质组学研究提供了基础保障。     

长牡蛎非整倍体的制备、胚胎发育及存活能力

通过二倍体、三倍体杂交的方法制备长牡蛎(Crassostreagigas)非整倍体。实验组设为2n♀×3n♂组、3n♀×2n♂组和3n×3n组,对照组为2n×2n组。与对照组相比,实验组畸形率高,担轮虫孵化率及D形幼虫生成率等参数均降低,幼虫死亡率高。在担轮幼虫向D形幼虫转化期,实验组发育滞后。培育过程中染色体数为25左右的非整倍体不能存活,整倍体和染色体数与整倍体接近的非整倍体能够存活。实验证实该方法是进行贝类非整倍体制备的有效手段。     

炭凝集反应快速检验猪囊虫病的探讨

近几年来,研究囊虫病的实验室检验方法如:环状沉淀、琼脂扩散、补体结合、间接血凝、乳胶凝集等试验都有报导。我们用炭凝集试验快速检验猪囊虫病曾进行探讨,现就其应用价值小结如下。     

母猪妊娠期不同营养水平对繁殖性能的影响

<正> 近年来,随着饲养科研工作的进展,美、英、日等国饲养标准的营养水平较前均有下降的趋势。美国国家科委(NRC)1964年规定妊娠母猜日粮营养水平要求D.E8,200—9,800千卡,D.C.P 396—410克,到1973年D.E降到6,600千卡,D.C.P降到280克,1975年D.E降到6,560千卡,1979年又降到6,120千卡,D.C.P 216克。为了更合理的利用饲料,不断提高母猪生产水平,降低饲养成本,我们连续进行3年妊娠母猪不同营养水平试验,为拟定母猪的合理饲养标准提供依据。     

中国蛤蜊壳形态性状对体质量性状的影响

随机测量115个中国蛤蜊Mactra chinensis Philipi 2龄个体的性状指标,以壳形态性状(壳长X1、壳高X2、壳宽X3)为自变量,以体质量性状(活体质量WL、软体质量WM)为因变量计算了通径系数(P)、相关指数(R2)和决定系数(di),研究了中国蛤蜊壳形态性状对体质量性状的影响效果。结果表明:5个数量性状间的相关系数均达到极显著性水平(P<0.01);壳宽对活体质量的直接作用最大(0.319),是影响活体质量的主要因素,壳高对活体质量的间接作用最大(0.513),是影响活体质量的次要因素;壳长对软体质量的直接作用最大(0.398),是影响软体质量的主要因素,壳宽对软体质量的间接作用最大(0.544),是影响软体质量的次要因素;壳形态性状对体质量性状的决定系数分析结果与通径分析结果一致。多元回归分析显示,壳长、壳高和壳宽与活体质量、软体质量呈极显著相关(P<0.01),剔除通径系数检验不显著的自变量,利用逐步回归方法,建立了活体质量和软体质量的最优回归方程为WL=-37.816+0.675X1+1.015X3和WM=-15.206+0.228X1+0.290X2。     

皱纹盘鲍一种丝氨酸蛋白酶抑制因子克隆与表达分析

通过RACE方法获得皱纹盘鲍丝氨酸蛋白酶抑制因子的cDNA序列.该序列全长1446个碱基,其中开放阅读框为410个碱基.该基因编码的氨基酸与丝氨酸蛋白酶抑制因子Serpin家族的结构相近.另外,在基因启动子区发现一些与免疫和癌症发生有关的转录因子结合位点.采用qRT-PCR方法分析该基因不同组织中表达情况,结果发现,在所有检测的组织包括外套膜、鳃、消化腺、血淋巴和肌肉中均有表达.另外,使用鳗弧菌感染并检测鳃组织中该基因表达情况,结果发现,细菌刺激后该基因表达量逐渐升高,表明丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在皱纹盘鲍抗菌反应中能够发挥免疫调节作用.     

北方沿海四角蛤蜊人工育苗技术的初步研究

于2004年和2006年对四角蛤蜊Mactra veneriformis人工育苗技术进行了研究。2004年在4个100L塑料桶和30m^3水泥池中分别培育出2—3mm稚贝20万粒和3000万粒,2006年在2个100L塑料桶中育出2～3mm稚贝12万粒。结果表明：室外土池中培育的亲贝（壳长33．97mm&#177;2．90mm）产卵量为（79．7&#177;4．0）万粒／个,海区采集的亲贝（壳长为39．62mm&#177;2．78mm）产卵量为13．2万粒／个;在水温为25．4℃、盐度为24、pH为8．0的条件下,受精卵经过20h 30min发育为D形幼虫;四角蛤蜊的卵径、D形幼虫、后期面盘幼虫、变态规格、单水管、双水管稚贝的大小分别为（50．93&#177;0．49）、（70．96&#177;0．92）、（164．00&#177;3．54）、（186．00&#177;4．22）、（212．00&#177;5．46）、（496．00&#177;9．87）um;壳顶前期生长速度为（7．83—8．83）um／d,壳顶中、后期为（11．38—14．99）um／d;存活率为（80．34&#177;1．86）％。稚贝期（10-45日龄）四角蛤蜊壳长、壳高的比例接近成体;10—15日龄稚贝的生长速度为（32．15—36．82）um／d,存活率近100％;15—30日龄,生长速度达（71．20&#177;9．91）um／d,存活率为（85．30&#177;1．28）％;30～45日龄,生长速度为（49．30&#177;7．12）um／d,存活率只有（14．10&#177;1．61）％。     

不同壳色菲律宾蛤仔免疫机能的比较研究

研究了不同壳色菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum的免疫能力,对野生斑马蛤(Zb)、珍珠白(Pw)、两道红(Tr)、两道白(Tw)、奶牛蛤(Co)5个不同壳色群体的相关免疫指标进行比较.结果表明:不同壳色蛤仔免疫指标表现出较大差异,其中Zb和Pw群体的细胞吞噬能力显著高于Co群体(P＜0.05);Tr和Tw群体的溶菌酶(LYZ)活性显著高于其他3个群体(P＜0.05);Co群体的酚氧化酶(PO)活性显著高于Tr群体(P＜0.05);Pw群体的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于Tr和Co群体(P＜0.05),Zb群体的SOD活性也显著高于Tr群体(P＜0.05);各壳色蛤仔的血细胞总数和亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性差异均不显著(P＞0.05).     

药物诱导皱纹盘鲍三倍体作用机理研究

分别用细胞松驰素Ｂ、咖啡因、６－二甲基氨基嘌呤处理皱纹盘鲍受精卵抑制第一极体后,分析了对照组和处理组受精卵染色体的分离情况。结果表明：对照组受州人１８条四分体染色体,经过减Ⅰ和减Ⅱ,放出两个极体,受精卵的发育具有不同步性;处理组受精卵在第二次减数分裂中出现了特殊的分离类型,即“三极分离”、“联合二级分离”、“独立二极分离”。分析了三种药物抑制第一极体的机理及效果。