安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建(英文)

[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆和在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入Hela细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。     

安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因的表达及免疫保护性

以筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白（CA42）部分编码基因的序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组表达载体pET-28a-CA42,通过大肠杆菌BL21的诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。然后纯化重组蛋白,免疫BALB／c进行体液和细胞免疫水平的检测,并观察重组蛋白对微小隐孢子虫的交叉保护性效果。结果显示,成功构建重组原核表达质粒pET-28a-CA42,Western-blotting显示重组蛋白约为19ku,能被安氏隐孢子虫免疫小鼠的多克隆抗体识别。重组蛋白免疫BALB／c小鼠的抗体水平差异显著（P〈0．05）,CD4^＋T淋巴细胞数差异均显著,CD4^4／CD8^＋T淋巴细胞数的值与佐剂对照组和空白对照组相比差异均显著（P〈0．05）。各组小鼠经接种微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比卵囊减少率为32．2％,差异均显著（P〈0．05）。结果表明,成功表达了重组安氏隐孢子虫肌动蛋白,纯化的重组蛋白具有一定的免疫原性和交叉保护性。     

天山马鹿鼻蝇蛆感染病例

<正> 兵团农四师工建团砖厂职工薛平家养天山马鹿,1985年3月27日发现烦燥不安,呼吸困难,不吃不喝,3月29日求医就诊。临床检查:年龄3周岁,性别公,体膘、营养下等.畜主自述,该鹿1984年夏、秋置天山山麓饲     

应用豆油炸辣椒治疗奶牛瘤胃臌气

<正> 应用豆油炸辣椒治疗奶牛(羊)瘤胃臌气,笔者经过十几年的临床应用、效果良好。方法是取豆油500～750毫升、干辣椒面50～75克。先将豆油炸开,稍凉后投入辣椒面,搅拌,待凉后备用。用量是:成年奶牛和大育成牛一般     

饲粮处理对奶牛产奶量及脂肪组织瘦素基因表达的影响

 【目的】观察不同饲粮处理对奶牛产后泌乳量、血浆瘦素浓度和脂肪组织中leptin基因表达的影响。【方法】选用妊娠后期健康奶牛30头随机分为3组，每组10头。其中Ⅰ组为对照组，Ⅱ组和Ⅲ组为试验组；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3组于产前28 d开始分别饲喂中国奶牛饲养标准(2000)标准饲粮 (能量摄入100%组)、标准增加20%饲粮（能量摄入120%组）和标准饲粮减少20%饲粮（能量摄入80%组）；产后各组奶牛均饲喂同一标准饲粮，至56 d结束。【结果】试验结果表明，Ⅲ组与Ⅰ组和Ⅱ组比较，不仅显著提高了产后奶牛产乳量，而且明显提高了产后奶牛血液leptin浓度，同时脂肪组织中leptin基因表达水平也增强。【结论】奶牛不同饲粮摄入水平与产奶量、血液leptin和脂肪组织中leptin基因表达之间存在着密切的关系。     

猪布鲁氏菌病的诊断及控防措施

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病。其特征是生殖器官和粘膜发炎,引起流产、不育和多种组织的局部病灶。在家畜中猪和牛最常发生,且都可以传给人和其他家畜。     

纳米二氧化钛应用技术研究

攀钢集团攀枝花钢铁研究院科研工作者,针对日趋严重的室内空气污染、日益突出自来水有机污染(TOC常可高达1.5-3.5 ppm),以及消毒副产物含量高(主要是含氯化合物,一般达5-30ppm)等诸多问题,于是构建了开放式的研究开发联合体--联合实验室(中心)强大技术平台,充分利用攀西的资源优势,经过多年的潜心研究,先后取得了:采用金属离子非均匀改性制备高催化活性的新型光催化剂(中国专利申请号:02152041.O),采用旋转浸渍提法进行催化剂固定(中国专利申请号:O2149602.1),以及以偏钛酸为原料,在低温条件下,采用水热法低成本合成具有高可见光活性的稀土离子改性锐钛矿纳米溶胶(中国专利申请号:200410077615)等三项专利技术.     

梅花鹿colX基因的克隆及原核表达

提取健康梅花鹿鹿茸肥大软骨细胞总RNA,以RT-PCR获得colX基因2 038 bp的完整编码序列,将其克隆入载体pMD18-T中,经限制性内切酶和质粒PCR分析,并测序证实的阳性重组子与表达载体pET-28a( )连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)。以IPTG诱导,经SDS-PAGE及Western-blot分析表明,获得相对分子质量为65 000的colX蛋白表达带,与预期相符,表明成功获得梅花鹿colX基因蛋白。     

柔嫩艾美耳球虫F2杂交株Rhomboid基因在大肠杆菌中的表达

根据ET-Rhomboid基因开放阅读框,插入有利于表达的酶切位点设计引物,以虫体DNA为模板扩增并克隆了ET-Rhomboid基因,并将该基因与PET-28a(+)质粒载体连接,构建成了原核表达载体PET-ET-Rhomboid.将构建好的表达质粒转入大肠杆菌DE3,经IFTG诱导表达后,用SDS-PAGE检测表达产物,用蛋白印迹(Western blotting)检测其反应原性.结果表明:含重组质粒的工程菌有明显的表达产物为31 kD的融合蛋白,与推测的融合蛋白的分子量吻合,蛋白印迹检测具有反应原性.     

阴道毛滴虫dsRNA病毒的鉴定

临床收集阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)进行体外纯培养,通过总核酸电泳筛选携病毒株.分别用DNA酶和RNA酶处理携病毒株总核酸后电泳.电镜观察阴道毛滴虫及其病毒粒子.根据已发表的阴道毛滴虫病毒基因序列设计合成1对引物,进行RT-PCR,将其产物连接到pMD18-T载体,进行克隆并测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAStar分子生物学软件进行分析.用放射自显影测定阴道毛滴虫病毒的RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)活性.结果显示,阴道毛滴虫病毒呈球形、二十面体、直径33 nm.病毒基因组约5.5 kb,病毒核酸不能被DNA酶(100 mg/L)降解,但可被RNA酶(1.0 mg/L)降解,病毒基因组有RDRP活性.经RT-PCR扩增后得到1条1 454 bp的片段,与预计大小基本相符,其序列与阴道毛滴虫病毒T1基因的同源性为82.9%.结果表明,在我国阴道毛滴虫长春分离株发现阴道毛滴虫病毒,该病毒属于dsRNA病毒.