冷处理对民猪皮下脂肪组织基因表达模式的影响

民猪具有不同于我国其他地方猪种的耐寒特性,但其具体耐寒机制未知。本研究构建了民猪15 d冷处理模型,检测了冷处理后的血液生化指标;RNA-seq技术测定了背部皮下脂肪的基因表达变化模式,qRTPCR技术检测了与脂肪代谢、细胞分化、应激、炎症和信号传递等相关基因的表达水平。结果发现,冷处理后民猪血液中的谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、血皮质醇、白细胞总数和血小板总数显著升高,而超氧化物歧化酶和肌酸激酶显著下降。背脂的2 141个基因表达水平发生了1倍以上的变化,其中1 435个为上调表达,706个为下调表达,差异倍数多集中在1～3倍。差异基因显著富集于其他次生代谢产物的生物合成通路和折叠、分类和降解通路。差异最显著的ATP6V0A4、TAP2基因和NOX1基因在背脂、颈脂、腹股沟脂以及腹脂等部位高表达。背脂内C/EBPβ和TNF-α发生了极显著上调,CD137、Tbx1、HSPA6和CIRBP发生了显著上调;PPARα发生了极显著下调。     

卵母细胞核因子促进核移植四倍体胚胎早期发育研究

研究旨在探讨猪卵母细胞核因子在重编程过程中发挥的作用。将体细胞引入未去核的MⅡ期卵母细胞中,构建体细胞核与卵母细胞核共存的核移植四倍体胚胎。通过分析核移植四倍体胚胎的早期发育情况探讨卵母细胞核因子对核移植四倍体胚胎早期发育的影响。结果显示,核移植四倍体胚胎、孤雌二倍体胚胎及孤雌单倍体胚胎这3组胚胎的卵裂率极显著高于核移植二倍体胚胎（P<0.01）,且核移植四倍体囊胚率及总细胞数也极显著高于核移植二倍体囊胚（P<0.01）。与通过标准核移植程序构建的核移植二倍体胚胎相比,核移植四倍体胚胎具有更强的发育能力。本研究建立了一个体细胞核与完整卵母细胞核因子物质共存的四倍体胚胎模型,有助于研究供体核与卵母细胞核之间的联系,为研究核因子在重编程过程中发挥的作用提供了平台。     

MEF2a基因在肌肉组织中的表达研究

分别取90日龄、180日龄和270日龄大白猪心肌、背肌和腿肌,提取总RNA,设计并合成猪MEF2a引物,以β肌动蛋白作为内参,利用Real-time PCR方法检测不同日龄大白猪肌肉组织中MEF2a基因mRNA的表达。结果表明,不同日龄大白猪的心肌和背肌中,MEF2a基因mRNA的表达水平无显著差异,在腿肌中有显著差异（P<0.05）。从90日龄到270日龄,MEF2a基因在心肌、背肌和腿肌的表达水平均差异显著（P<0.05）,腿肌最高,其次是背肌,心肌最低。据此推测,MEF2a基因在猪成体后的肌肉组织中,主要是促进Ⅰ型肌纤维的生成,而不再是介导细胞分化。     

绒毛白蜡smh1基因编码区的克隆及序列分析

为探究绒毛白蜡smh1端粒结合蛋白基因在端粒中的作用以及在植物生长发育过程中的调控机制,进行绒毛白蜡smh1端粒结合蛋白基因克隆及分析。以绒毛白蜡幼苗为试材,Illumina Hi Seq 2000高通量测序技术获得的绒毛白蜡转录组Unigene数据为基础,采用RT-PCR方法克隆绒毛白蜡smh1基因编码区序列并进行生物信息学分析。结果表明:从绒毛白蜡叶片中成功克隆出一个smh类端粒结合蛋白基因编码区序列。基因编码区长度为879 bp,可编码292个氨基酸,分子量为31.66 k Da,等电点为6.5,原子总数为4457个,分子式为C_(1371)H_(2242)N_(392)O_(439)S_(13)。Conserved Domains数据库对蛋白质的保守结构域进行分析,结果显示该蛋白序列具有植物端粒结合蛋白Smh(single myb histone)亚家族典型的结构特征,包括位于N-端的Myb样结构域以及中间的组蛋白H1/5样结构域。将Fv Smh1端粒结合蛋白与含有telobox基序的其他端粒结合蛋白进行系统进化树的构建,结果显示SMH端粒结合蛋白与TRF1和TRF2同属一个分支,具有较近的关系。从上述分析结果可以推断所克隆的绒毛白蜡smh1基因可能对植物端粒结构的维持和功能的发挥具有重要作用。     

维生素C对视黄醇结合蛋白基因作用的初探

采用半定量RT-PCR方法研究了在体外培养的猪成纤维细胞内,添加0.5,5,10,30μg/μL浓度的维生素C后,分别作用12、24、48和72h后,视黄醇结合蛋白基因(RBP4)的表达变化情况。结果表明:维生素C可显著抑制RBP4基因的表达。