应用电子显微镜技术检测云南省烟草病毒病原

应用负染色,超薄切片等电镜制样技术,结合病毒分离提纯方法,对云南省各烟区烟草病毒病植株及马铃薯病毒病植株进行了电镜检测分析,观察到五种类似烟草病毒病原的分离物。从烟草花叶病叶中检测出类似烟草花叶病毒(TMV)及黄瓜花叶病毒(CMV)的分离物,从烟草蚀纹病叶中检测出类似烟草蚀纹病毒(TEV)的分离物,在马铃薯小叶病叶及蓝叶病叶中检测出类似马铃薯病毒Y(PVY)、烟草脆裂病毒(TRV)的分离物。首次从形态学上证实了上述病原或病原所属组成员在这一地区的存在。     

云南水稻上检测到南方水稻黑条矮缩病毒

南方水稻黑条矮缩病(Southern rice black streaked dwarf disease)是我国南方稻区一种新的水稻病毒病害.自2001年在广东省阳西县首次发现以来,该病危害范围逐年扩大,2009年我国湖南、江西、广东、广西、海南、浙江、福建、湖北和安徽9个水稻主产省(区)及越南北部19个省发病面积约33.33万hm2,基本绝收面积0.67万hm2[1,2],对水稻生产威胁巨大.     

云南香料烟曲叶病发生流行特点

对香料烟曲叶病发生危害情况进行了全面的调查,结合传播介体烟粉虱发生流行及中间寄主植物的调查,研究了不同育苗移栽时期、不同品种、不同育苗方式、不同海拔、不同育苗环境对香料烟曲叶病发生流行的影响,基本掌握了香料烟曲叶病发生流行特点。     

番茄环纹斑点病毒非结构蛋白NSs的原核表达及多抗血清制备

用RT-PCR从感染番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的番茄中扩增出编码病毒非结构蛋白NSs基因,将NSs基因构建到原核表达载体p ET-30 a中,获得原核表达载体p ET-30a-NSs,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDSPAGE电泳分析显示,高效诱导表达了57k Da融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/8192。用制备好的抗血清对TZSV感病病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清可用于TZSV的检测,并为进一步研究NSs功能奠定了基础。     

2012年元江早稻南方水稻黑条矮缩病及介体昆虫白背飞虱的发生动态研究

对2012年云南元江地区早稻田南方水稻黑条矮缩病与传毒介体白背飞虱的发生动态的调查研究表明,白背飞虱的虫口数量与南方水稻黑条矮缩病的发病率呈正相关关系(r＞0.9),即当白背飞虱数量较大时,南方水稻黑条矮缩病发病率也处于较高水平.     

云南甘蔗花叶病病原检测及一个分离物的分子鉴定

 调查表明甘蔗花叶病在云南发生普遍。电镜检测采自云南6个蔗区主栽品种上的28个甘蔗花叶病病样(分离物),其中25个病样的病叶汁液中观察到弯曲线状的病毒粒体,病叶组织中有风轮状和卷筒状内含体;对这25个分离物进行间接ELISA检测,16个与马铃薯Y病毒属抗血清呈阳性反应,其余呈阴性反应。根据蔗区及其主栽品种的不同,挑选7个分离物进行鉴别寄主测定,结果显示不同分离物鉴别寄主范围和致病性存在明显差异,分离物HH-1有范围最广的鉴别寄主和较强的致病性。克隆并测定HH-1基因组3'末端序列,序列分析发现HH-1的外壳蛋白(CP)基因共864个核苷酸,编码287个氨基酸,与高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)余杭分离物CP氨基酸序列的同源性最高,为97.7%;因此推定HH-1属于SrMV的一个新分离物。     

云南省烟草病毒病发生状况研究初报

1990年以来,作者应用电镜技术、病毒分离提纯技术对云南的烟草病毒病样品进行鉴定研究,同时,对重病区宾川进行集中采样调查及防治试验,结果报道如下。一、材料与方法 (一)材料烟草病毒样品采自玉溪、澄江等12个县市烤烟生产田。PVX、PVY标准抗原与抗体由中国农业科学院生物技术中心提供。TMV、CMV、PVY标样电镜图谱由北京农业大学电镜室、病毒室提供。 (二)方法按采集地点、栽培品种、症状类型等分类采样,参照陈保善等(1986)、田波等(1987)及Hamilton等(1981)的方法制样。样品置JEM100CX—Ⅲ型透射电子显微镜下放大5万倍观察30个以上有效视野,检测病原种类及其相对含量、带毒率,研究分布特点。用NS—83增抗剂、病毒A及硫酸锌作防治处理,清水作对照,考察对病情的抑制效果。     

西瓜花叶病毒2号南瓜分离物的鉴定及其外壳蛋白基因序列分析

 利用电镜和酶联免疫吸附测定法(ELISA)在黑龙江省采集的南瓜病样中检测到西瓜花叶病毒2号(WMV-2)。再利用免疫PCR (IC-PCR)和反转录PCR (RT-PCR)方法,扩增获得其外壳蛋白(CP)基因片段,并克隆到pGEM-T载体中。核苷酸序列测定表明,该分离物CP基因全长为852个核苷酸,编码由284个氨基酸组成的31.8 kDa蛋白。与国外已报道的WMV-2 CP基因相比,其核苷酸序列同源性为92.2%~94.0%,由此推导的氨基酸序列同源性为94.5%~98.1%。与国内2个分离物相比,和山西分离物核苷酸和氨基酸的同源性都达到98.5%,和郑州分离物核苷酸和氨基酸的同源性分别为91.5%和95.0%。     

云南水稻矮缩病毒病调查检测初报

以云南中部的昆明市和东北部的曲靖、昭通的水稻产区为重点,对水稻矮缩病毒病(RDV)的发生情况作了初步调查,采集疑似感染水稻矮缩病毒病病株样本,并进行了ELISA检测确认.结果表明:寻甸县和嵩明县的水稻产区中水稻矮缩病毒病发生较普遍,与其相邻的地区和与其有一定距离的滇东北地区也有发生.     

侵染曼陀罗的中国番茄黄化曲叶病毒及其卫星DNAβ全基因组结构特征

 从云南大理曼陀罗上采集到病毒分离物YN72,症状表现为叶脉增厚、叶片褪绿、植株矮化。全序列测定表明,YN72DNA-A全长2739个核苷酸。基因组比较发现,YN72DNA-A与中国番茄黄化曲叶病毒分离物(TYLCCNV-[Y43])同源性最高(93.4%),与中国番茄黄化曲叶病毒烟草分离物(TYLCCNV-[Y5])的同源性次之(92.9%),而与亚洲地区的其它双生病毒的同源性均在90%以下,表明曼陀罗中的分离物YN72是TYLCCNV的1个分离物。利用WTGs卫星分子DNAβ的特异性引物beta01和beta02,在YN72中PCR扩增到DNAβ分子。序列分析表明,YN7213全长1335个核苷酸,在其互补链上编码1个有功能的ORF(C1)。YN72β的全序列与TYLCCNV分离物卫星分子Beanβ和Y297β的同源性最高,分别为99.8%和99.3%;与其它所比较的DNAβ的同源性均低于80.6%。系统进化树研究表明,YN72卫星分子DNAβ与其辅助病毒是共同进化的。