湖北麻鸡多杀性巴氏杆菌的分离和PCR鉴定

从发病的湖北麻鸡中采集病料,通过细菌分离、生化鉴定,初步判定分离菌株为多杀性巴氏杆菌;应用PCR分别对病料组织和分离菌株进行检测,均能扩增出特异性的条带,PCR产物测序后经NCBIBlast分析,与多杀性巴氏杆菌同源性为99%。经过以上的试验分析,确诊为多杀性巴氏杆菌感染。     

1型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立

以1型鸭疫里氏杆菌(RA)全基因组保守区域ompA基因的重组表达产物为包被抗原,建立了检测RA血清抗体的间接ELISA方法。原核表达的重组ompA蛋白经纯化后作为包被物,以方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度为1.5μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶100。与普通的微量凝集试验相比较,该方法灵敏度高于凝集试验约16倍～128倍。与鸭源大肠埃希菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭链球菌、鸭源呼肠病毒、鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒感染鸭血清均无交叉反应,表明该方法特异性好。利用该方法检测了雏鸭免疫RA灭活油乳剂疫苗之后血清抗体水平。     

一株猪肺炎支原体HN0613株的分离鉴定

采集疑似猪支原体肺炎病理变化的肺脏,经Friis液体、固体培养基培养、纯化,PCR、测序分析、生化鉴定、生长抑制、代谢抑制和致病性试验证实分离获得一株猪肺炎支原体菌株,命名为HN0613.该菌株能适应人工培养基的培养,且传代生长良好,液体培养基中培养达108 CCU/mL;菌株有较强的毒力,可作为疫苗候选株进一步研究.该菌株的分离鉴定为研制猪支原体肺炎灭活疫苗奠定了基础.     

鸭瘟病毒DNA的快速诊断研究

根据文献报道的鸭瘟病毒基因序列，设计合成了一对引物，其扩增跨幅为498bp。用这对引物，以采用纯水直接研磨临床病料组织再按常规酚一氟仿抽提DNA的方法制备模板，对2株鸭瘟病毒进行扩增，均获得了与设计大小相符的明亮条带，为阳性；而对其他7株非鸭瘟病毒病料的基因扩增不出任何条带，为阴性；以该PCR方法检测14份DPV临床病料，均为阳性，与病毒分离和血清中和试验的结果一致。敏感性试验表明可检测到10fg的鸭瘟病毒DNA模板。研究建立的直接从临床样品微量检测DPV的PCR方法，能达到鸭瘟病毒基因的快速诊断要求。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对武汉周边地区发病鸭场的病死鸭进行了病理剖检,直接从病死鸭肝脏、心血及脑组织中进行细菌分离培养,通过培养特性、生化鉴定、动物回归试验确定为鸭疫里默氏杆菌感染.分离到8株鸭疫里默氏杆菌,对分离株进行了药敏试验,结果表明分离株对头孢唑啉钠、先锋V、丁胺卡那霉素、新霉素、氨苄青霉素的敏感性较高.     

规模化猪场蓝耳病防制措施的制定及应用效果

有选择性地在湖北省12个猪场进行了猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的调查,结果显示,PRRSV血清阳性率为40%～60%,感染母猪因出现流产、死胎的损失率为18.8%～34.7%,仔猪出生至断乳后保育阶段的死亡率平均为21.3%.针对于此,通过建立合理的PRRS免疫程序、更新饲养管理方法、加强卫生防疫制度、提高鉴别诊断水平、防止其他疾病混合感染、强化对病猪的护理等防治措施后,母猪的产活仔数从窝平6.84头提高到9.20头,窝平提高了2.36头,死胎、流产造成的损失率由26.4%降到4.75%,仔猪从哺乳阶段到保育阶段结束的死亡率由21.3%降到8.72%.     

免疫鸡群病鸡脑组织中2株NDV弱毒株分离鉴定

湖北某鸡场15000余只肉用杂交麻鸡先后2批发生呼吸道症状为主的疾病．死亡鸡主要病理变化为消化道斑状出血,气管充血出血,个别鸡腺胃乳头出血,取病鸡脑组织进行病原分离,分离2株新城疫病毒（NDV）。并对其致病指数进行了测定,结果为：鸡胚平均致死时间（MDT）为120h,脑内致病指数（ICPI）为0．18～0．21,静脉接种致病指数（IVPI）为0．2～0．4。根据国际有关NDV毒力标准,分离的2株病毒为弱毒株。     

鹌鹑H9亚型禽流感病毒的分离鉴定

2009年从湖北省某鹌鹑(Coturnix coturnix Linnaeus)饲养场送检的成年产蛋病死鹌鹑的肺、脑等实质器官中,分离到一株低致病力的禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV),经AIV-PCR检测、血清中和试验、AIVHA-HI试验、ND-HI试验,证明分离的AIV为H9亚型。人工感染30日龄鹌鹑做毒力测定,结果为低致病力毒株,该毒株自然感染能引起1%～3%的成年鹌鹑死亡。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究Ⅱ报——疫苗的免疫持续期及保存期试验

采用新城疫病毒(NDV)Lasota株感染鸡胚尿囊液毒和多杀性巴氏杆菌(禽A型)接种固体培养基收获茵液,经灭活后制备成5批油乳剂灭活苗(批号2001-1～2001-5),用于免疫2月龄以上的青年鸡,试验分一次免疫组和二次免疫组,分别在免疫后1个月、3个月、6个月、9个月进行ND和FC强毒攻击保护试验,结果表明,相同剂量分两次免疫,近期效果差异不明显.一次免疫组,6个月攻毒ND的保护为100%、FC保护为80%;8个月攻毒ND的保护为95%、FC保护为52.5%.二次免疫组.6个月攻毒ND的保护为100%,HI抗体1:64以上;FC攻毒保护87.5%;8个月攻毒ND的保护为100%,FC保护为77.5%.疫苗保存期试验证明,4～8℃冰箱保存可达18个月,10～20℃保存的有效期为4个月.     

人工感染鸭病毒性肠炎急性病例超微结构变化

用鸭病毒性肠炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）CH强毒株感染成年鸭复制鸭病毒性肠炎急性病例，分别于接种后不同时间，取心、肝、肾、脾、胸腺、十二指肠、法氏囊、脑和胰组织，制作超薄切片，电镜观察。结果表明：病变最早发生于肝和肾，而鸭死亡后以免疫器官和消化器官损伤最严重；各种细胞的变化主要表现为细胞肿胀，染色质或浓缩、碎裂或溶解，线粒体溶解成空泡样结构，其他细胞器破坏；脾、胸腺、法氏囊以及小肠固有层中的淋巴细胞在感染24h后，在出现细胞坏死的同时还出现较为明显的细胞凋亡变化；而鸭死亡后淋巴细胞主要表现为黑洞核样变化，整个细胞凝聚深染，染色质固缩，细胞浆均质深染，细胞膜模糊或不完整。