利用σ 3和σ 2重组蛋白检测禽呼肠孤病毒抗体ELISA的建立

将纯化好的两个ARV结构蛋白σ3和σ2作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9．5、12．0μg／mL;一抗血清的稀释度为1：200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1：5000,初步建立了能检测ARV抗体的σ3-ELISA、σ2-ELISA以及σ3、σ2两个蛋白同时包被的σ3-σ2-ELISA检测方法。分别用上述3种方法对制备的ARVSPF鸡阳性血清进行检测,结果阳性检出率分别为90．91％、69．70％和100％。表明σ3-σ2-ELISA方法在ARV抗体检测方面具有较高的敏感性。     

巢式PCR检测H1亚型禽流感病毒方法的建立

为建立快速、准确检测H1亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的方法,本研究针对H1亚型AIV血凝素(HA)基因保守区设计合成了2对特异性引物并优化反应条件进行巢式PCR反应。特异性和敏感性试验结果表明,该PCR方法能特异性检测到H1亚型AIV,其敏感性最低能检测到13.2 fg/μL的H1亚型AIV RNA模板。本研究建立的巢式PCR方法为H1亚型AIV的早期诊断及有效防制提供了快速、特异且敏感的检测方法。     

应用多重反转录—聚合酶链反应检测鸡新城疫病毒和传染？…

本文建立了一种同时检测ＮＤＶ和ＩＢＶ二种病原体的多重ＰＣＲ。根据ＮＤＶ和ＩＢＶ的基因文库，设计了两对分别与ＮＤＶ与ＩＢＶ某段基因序列互补的引物，用这两对引物对同一样品ＮＤＶ和ＩＢＶＲＮＡ模板进行多重ＲＴ－ＣＰＲ扩增，结果均得到了两条特异性大步与实验设计相符的３１０ｂｐ和１７２０ｂｐ多重的ＲＴ－ＣＰＲ扩增带，而对其他６种禽病病原的ＰＣＲ扩增结果均为阴性，敏感性测定结果表明，该多重ＲＴ－ＰＣＲ技术能同     

禽巴氏杆菌病B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗保存期试验

禽巴氏杆菌病 B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗在4～8℃温度环境下保存一年的10批苗,菌存率为76.7～93.3%,平均菌存率为86.4%;按瓶签头份稀释后免疫鸡,10批苗的保护率为75%～100%,总保护率为87.5%(37/40).本文就巴氏杆菌病 B_(26)-T_(1200)弱毒冻干苗在4℃～8℃的保存性能及免疫效力进行了试验,现将结果报告如下。     

禽巴氏杆菌病B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗对鸡的免疫产生期和免疫期试验

以禽巴氏杆菌病 B_(26)-T_(1200)弱毒疫苗免疫后8小时即能产生免疫力(1/5鸡得到保护);2～3天有3/5鸡获得保护;4～5天后能产生坚强免疫力(4/5～5/5保护).免疫后2、3、4和5个月的总保护率为83.3%(80/96);免疫后5个月,6批苗的平均保护率为75%(18/24).     

应用PCR-RFLP分析鉴别广西鸡毒霉形体

针对鸡毒霉形体(MG)16S和23SrRNA基因间的高变区序列设计合成了1对引物，对MG菌株进行了PCR扩增，获得了1条899bp的DNA片段，而其他禽病病原DNA无扩增。扩增产物经用限制性内切酶AfaⅠ和Dra Ⅰ进行酶切片段长度多态性分析，表明各MG菌株酶切图谱间均存在差异。     

禽呼肠孤病毒分离株σ2蛋白基因克隆及序列分析

为了解禽呼肠孤病毒（ARV）广西分离株与常用疫苗株在基因水平上的差异,将从广西某鸡场分离获得的2株ARV（R1、R2）分离株的σ2蛋白基因经RT-PCR扩增后,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α,重组质粒经PCR、双酶切鉴定及序列分析。结果表明,2株ARV分离株的σ2蛋白基因已成功克隆到质粒载体上;经序列分析发现,2株ARV分离株与ARV标准株S1133的核苷酸同源性分别高达99.2%和99.3%,其推导的氨基酸同源性分别高达98.1%和98.4%;两分离株间的核苷酸同源性为99.7%,其推导的氨基酸同源性为98.5%,具有很高的同源性。     

Ⅰ群禽腺病毒五邻体基因的克隆及原核表达

根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转化到感受态细胞DH5α中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,获得了45.9 ku的融合蛋白。用不同的IPTG浓度和时间诱导表达,得出诱导的最佳IPTG浓度为1.5 mmol/L,最佳时间为4 h。用尿素提取包涵体表达产物,得到penton纯化蛋白,浓度为2.98 mg/mL。经Western-bolt分析,该蛋白具有良好的反应原性。     

广西牡蛎养殖业的现状与发展对策

[目的]更好地促进广西牡蛎养殖业的健康可持续发展,为政府管理部门及科技工作者提供参考.[方法]对当前广西牡蛎养殖业现状和问题进行分析,找出阻碍当前广西牡蛎养殖业发展的主要原因,提出促进广西牡蛎养殖业健康可持续发展的对策与建议.[结果]目前广西牡蛎养殖业普遍存在种质资源良莠不齐、牡蛎死亡现象时有发生、牡蛎加工方式落后、牡蛎贸易链短等问题.[建议]通过挖掘本地种质资源优势,建立无特定病原体(SPF)牡蛎原种场;合理规划养殖,构建安全高效的健康可持续发展的海水养殖模式;研究、引进养殖和加工新技术,延伸牡蛎产业链条等方式,以促进广西牡蛎养殖业的高效、健康可持续发展,增加牡蛎养殖业的经济效益.