SYBR Green Ⅰ实时PCR对猪细小病毒体外复制动态分析

根据已经发表的猪细小病毒（PPV）的VP2基因序列,设计2对特异性引物,建立了检测PPV的SYBR GreenⅠ实时PCR方法。该方法最小检出量为12个PPV拷贝。模板稀释度在108范围内呈良好的线性关系,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒无交叉反应。应用本方法对PPV在体外感染细胞后的复制动态进行了观察,并绘制了病毒的体外增殖曲线。数据换算为每瓶中细胞内、外病毒拷贝数,结果显示细胞外病毒含量在接毒初始的36h逐渐下降,随后开始逐步增加;接毒后84h培养液中的病毒含量（1.739×1010拷贝）逐渐超过细胞内的病毒含量（1.321×1010拷贝）;在接毒后108h培养液中病毒含量达到峰值（7.626×1010拷贝）,随即病毒含量开始快速下降。细胞内病毒粒子在接毒后24h内为对数增长期,然后为缓慢增长期,至接种后72h达到复制峰值（1.425×1010拷贝）,并维持至108h。与病毒复制动态变化相对应的细胞病变是从细胞聚集、开始形成空斑到约80%的细胞病变产生,108h之后随着细胞的大量死亡,细胞内、外病毒数量都开始急剧减少。     

香连溶液阻断猪流行性腹泻病毒感染的临床效力研究

为有效阻断猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染提供一种优质的新型环保消毒剂。本试验选用香连溶液开展了对Vero细胞安全浓度的测定、对PEDV增殖抑制作用的测定、对PEDV感染仔猪的防治试验和对PEDV传播途径的阻断试验,并进行了临床推广。结果显示,将香连溶液作50倍稀释时对Vero细胞生长没有明显影响,作50~100倍稀释时可明显抑制PEDV增殖;对初生仔猪灌服香连溶液无法阻止PEDV的感染和发病;每昼夜应用香连溶液擦拭消毒乳头6次,同时配合及时清除粪便和产床喷雾消毒,可使猪流行性腹泻病毒(PEDV)发病率控制至30%以内;母猪产前免疫2次猪传染性胃肠炎(TGE)-PED二联灭活疫苗,产后7 d内使用香连溶液进行乳头消毒,PED发病率仅为2.8%,并在不同规模的猪场进行推广应用,效果良好。研究结果表明,所构建的"母猪产前免疫PED疫苗配合产后使用香连溶液消毒乳头"模式,可以有效阻断猪场PEDV的大面积感染和发病,为猪腹泻性疫病的综合防控工作探索出一条行之有效的技术思路。     

猪链球菌血清2型抗体IHA检测方法的建立及应用

用猪链球菌血清2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)致敏经戊二醛处理过的鸡红细胞,优化致敏醛化红细胞的抗原量和时间.结果显示,在37℃条件下CPS(2.2 5 mg/L)致敏鸡红细胞90 min,IHA试验在25℃条件下操作,被检血清IHA效价在1∶8及其以上时判为SS2抗体阳性.应用此方法对猪大肠杆茵、副嗜血杆菌、猪肠球菌、SS1、SS7、SS9、金黄色葡萄球菌、沙门菌、巴氏杆茵阳性血清进行检测,结果表明,SS2抗体均为阴性.对1044份无临床症状的猪血清进行检测,SS2抗体阳性率为61.69％.该方法敏感性高,特异性较强,可用于大规模SS2抗体水平的检测和SS2的血清流行病学调查.     

鸡传染性支气管炎血清学诊断方法研究进展

鸡传染性支气管炎 (IB)是由传染性支气管炎病毒 (IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道和泌尿生殖道疾病。该病在幼鸡主要表现为罗音、咳嗽、呼吸困难及死亡等 ,产蛋鸡则通常发生产蛋量和蛋的品质下降 ,输卵管受到永久性的损伤而丧失产蛋能力 ;发生肾型传支的病鸡还表现为拉淀粉糊样粪便 ,肾脏苍白、肿大 ,肾小管和输卵管内有大量的尿酸盐沉积 〔1〕。 IB于 1931年由 shalk首先报道于美国 ,并由Beach和 Schalm于 1936年确定了该病病原 〔2〕。 1937年Beaudette和 Hudson首次在鸡胚上成功培养该病毒〔3〕。 196 2年 Winterfeild等首…     

河南省部分猪场猪伪狂犬病免疫状况监测及分析

[目的]了解河南省部分猪场猪伪狂犬病免疫状况。[方法]应用酶联免疫吸附试验方法对河南省部分猪场送检的3 861份血清进行了抗体检测。[结果]血清学检测结果显示其平均阳性率为67.65%,母猪、公猪、育肥猪、保育猪和产房仔猪的平均阳性率分别为79.19%7、5.34%1、7.60%、40.78%和62.24%;其中2010年5月至2011年4月份的各月平均阳性率分别为63.76%7、1.26%6、2.36%、67.15%5、8.86%6、9.53%、61.36%、61.23%和74.41%6、7.66%7、0.76%、85.71%。[结论]河南省大部分猪场伪狂犬病的免疫水平不是特别理想。     

乳酸粪肠球菌的分离鉴定与系统进化分析

目的 分离鉴定一株疑似乳酸粪肠球菌;方法 通过对表型特性包括培养特性、形态学观察、生化试验等鉴定,同时结合16S rDNA系统进化分析;结果：该株革兰氏阳性菌能在10℃和45℃生长,接触酶阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,可生长于6.5%NaCl和PH9.6的环境等,16S rDNA系统进化分析与粪肠球菌有最高同源性;结论 分离株为乳酸粪肠球菌。     

猪流行病防控新思维

<正>1猪流行性腹泻该病是目前猪场发病最严重的疾病之一,主要发生于1周龄以内的小猪,呕吐、急性水泻、严重脱水以及高死亡率是该病主要的特征。首先,病毒变异是导致该病暴发的主要原因,其次是疫苗因素和混合感染导致。所有传染病的最终控制和最经济有效的手段永远是接种疫苗。然而对于本病却很难做到,首先很难分离到流行毒株,即便分离到流行毒株后,也很难在短时间内转化成商品疫苗。所以,临床     

猪细小病毒种子批中污染的猪鼻支原体的清除

支原体是细胞和病毒培养中常见的污染物,本研究尝试使用滤膜过滤法、反复多次冻融法、支原体抑制药物M-plasmocin处理法、氯仿抽提法等4种方法清除猪细小病毒种子批中污染的猪鼻支原体,并对4种方法的清除效果进行比较。结果表明,支原体抑制药物M-plasmocin处理法与氯仿抽提法效果较好,支原体抑制药物处理84 h以及氯仿与被支原体污染的猪细小病毒液作用5 min均能彻底清除猪细小病毒种子批中污染的支原体。本研究筛选出的清除猪细小病毒中支原体方法为非囊膜类病毒种子批中支原体的清除提供了依据。     

河南部分地区猪衣原体感染的血清学调查研究

采用间接血凝试验,对河南6个地区猪场的275份血清进行了衣原体检测。结果表明,各个地区的猪场均有不同程度的感染,平均感染率为25.5%,感染率由10.5%~35.4%不等;不同状况的母猪感染情况不同,有流产、死胎的母猪阳性率明显高于正常母猪。     

豫北地区猪瘟流行病学调查及分折

为了掌握豫北地区猪瘟的免疫和野毒感染状况,更好地为开展相应的免疫预防工作提供依据,试验分别应用猪瘟病毒抗体EUSA检测试剂盒以及RT-PCR方法分别对豫北6地市送检的血清及病料进行了猪瘟抗体、猪瘟抗原的检测,结果显示,所检测的血清总阳性率为74.96%,提示该地区猪瘟疫苗免疫效果较差;猪瘟抗原阳性率为30.09%,说明目前豫北地区的猪场普遍存在猪瘟野毒感染,RT-PCR的结果有力地佐证了这一点.