香连溶液阻断猪流行性腹泻病毒感染的临床效力研究

为有效阻断猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染提供一种优质的新型环保消毒剂。本试验选用香连溶液开展了对Vero细胞安全浓度的测定、对PEDV增殖抑制作用的测定、对PEDV感染仔猪的防治试验和对PEDV传播途径的阻断试验,并进行了临床推广。结果显示,将香连溶液作50倍稀释时对Vero细胞生长没有明显影响,作50~100倍稀释时可明显抑制PEDV增殖;对初生仔猪灌服香连溶液无法阻止PEDV的感染和发病;每昼夜应用香连溶液擦拭消毒乳头6次,同时配合及时清除粪便和产床喷雾消毒,可使猪流行性腹泻病毒(PEDV)发病率控制至30%以内;母猪产前免疫2次猪传染性胃肠炎(TGE)-PED二联灭活疫苗,产后7 d内使用香连溶液进行乳头消毒,PED发病率仅为2.8%,并在不同规模的猪场进行推广应用,效果良好。研究结果表明,所构建的"母猪产前免疫PED疫苗配合产后使用香连溶液消毒乳头"模式,可以有效阻断猪场PEDV的大面积感染和发病,为猪腹泻性疫病的综合防控工作探索出一条行之有效的技术思路。     

河南省部分猪场猪伪狂犬病免疫状况监测及分析

[目的]了解河南省部分猪场猪伪狂犬病免疫状况。[方法]应用酶联免疫吸附试验方法对河南省部分猪场送检的3 861份血清进行了抗体检测。[结果]血清学检测结果显示其平均阳性率为67.65%,母猪、公猪、育肥猪、保育猪和产房仔猪的平均阳性率分别为79.19%7、5.34%1、7.60%、40.78%和62.24%;其中2010年5月至2011年4月份的各月平均阳性率分别为63.76%7、1.26%6、2.36%、67.15%5、8.86%6、9.53%、61.36%、61.23%和74.41%6、7.66%7、0.76%、85.71%。[结论]河南省大部分猪场伪狂犬病的免疫水平不是特别理想。     

乳酸粪肠球菌的分离鉴定与系统进化分析

目的 分离鉴定一株疑似乳酸粪肠球菌;方法 通过对表型特性包括培养特性、形态学观察、生化试验等鉴定,同时结合16S rDNA系统进化分析;结果：该株革兰氏阳性菌能在10℃和45℃生长,接触酶阴性,发酵葡萄糖产酸不产气,可生长于6.5%NaCl和PH9.6的环境等,16S rDNA系统进化分析与粪肠球菌有最高同源性;结论 分离株为乳酸粪肠球菌。     

SYBR Green Ⅰ实时PCR对猪细小病毒体外复制动态分析

根据已经发表的猪细小病毒（PPV）的VP2基因序列,设计2对特异性引物,建立了检测PPV的SYBR GreenⅠ实时PCR方法。该方法最小检出量为12个PPV拷贝。模板稀释度在108范围内呈良好的线性关系,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒无交叉反应。应用本方法对PPV在体外感染细胞后的复制动态进行了观察,并绘制了病毒的体外增殖曲线。数据换算为每瓶中细胞内、外病毒拷贝数,结果显示细胞外病毒含量在接毒初始的36h逐渐下降,随后开始逐步增加;接毒后84h培养液中的病毒含量（1.739×1010拷贝）逐渐超过细胞内的病毒含量（1.321×1010拷贝）;在接毒后108h培养液中病毒含量达到峰值（7.626×1010拷贝）,随即病毒含量开始快速下降。细胞内病毒粒子在接毒后24h内为对数增长期,然后为缓慢增长期,至接种后72h达到复制峰值（1.425×1010拷贝）,并维持至108h。与病毒复制动态变化相对应的细胞病变是从细胞聚集、开始形成空斑到约80%的细胞病变产生,108h之后随着细胞的大量死亡,细胞内、外病毒数量都开始急剧减少。     

猪链球菌血清2型抗体IHA检测方法的建立及应用

用猪链球菌血清2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)致敏经戊二醛处理过的鸡红细胞,优化致敏醛化红细胞的抗原量和时间.结果显示,在37℃条件下CPS(2.2 5 mg/L)致敏鸡红细胞90 min,IHA试验在25℃条件下操作,被检血清IHA效价在1∶8及其以上时判为SS2抗体阳性.应用此方法对猪大肠杆茵、副嗜血杆菌、猪肠球菌、SS1、SS7、SS9、金黄色葡萄球菌、沙门菌、巴氏杆茵阳性血清进行检测,结果表明,SS2抗体均为阴性.对1044份无临床症状的猪血清进行检测,SS2抗体阳性率为61.69％.该方法敏感性高,特异性较强,可用于大规模SS2抗体水平的检测和SS2的血清流行病学调查.     

河南部分地区猪衣原体感染的血清学调查研究

采用间接血凝试验,对河南6个地区猪场的275份血清进行了衣原体检测。结果表明,各个地区的猪场均有不同程度的感染,平均感染率为25.5%,感染率由10.5%~35.4%不等;不同状况的母猪感染情况不同,有流产、死胎的母猪阳性率明显高于正常母猪。     

鸡传染性支气管炎血清学诊断方法研究进展

鸡传染性支气管炎 (IB)是由传染性支气管炎病毒 (IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道和泌尿生殖道疾病。该病在幼鸡主要表现为罗音、咳嗽、呼吸困难及死亡等 ,产蛋鸡则通常发生产蛋量和蛋的品质下降 ,输卵管受到永久性的损伤而丧失产蛋能力 ;发生肾型传支的病鸡还表现为拉淀粉糊样粪便 ,肾脏苍白、肿大 ,肾小管和输卵管内有大量的尿酸盐沉积 〔1〕。 IB于 1931年由 shalk首先报道于美国 ,并由Beach和 Schalm于 1936年确定了该病病原 〔2〕。 1937年Beaudette和 Hudson首次在鸡胚上成功培养该病毒〔3〕。 196 2年 Winterfeild等首…     

高致病性禽腺病毒4型中国流行株在LMH细胞中的增殖规律

为研究禽腺病毒4型(FAd V-4)中国流行株在鸡肝癌上皮细胞系(LMH)中的生长特性和增殖规律,分别利用SYBR Green I实时荧光定量PCR和病毒滴度测定方法检测FAd V-4感染LMH细胞后12、24、36、48、60、72、84、96和120 h的基因组复制和病毒粒子增殖动态。结果显示,FAd V-4中国流行株在LMH中能够很好增殖,不同时间点的病毒滴度与病毒基因组拷贝数呈正相关,病毒收获的最佳时间为感染后60 h。研究结果为防控鸡肝炎-心包积液综合征疫苗的研发和生产提供一定的依据和参考。     

鸭源鸡杆菌对SPF雏鸡的感染特性研究

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进行检测.结果表明,人工感染鸡无临床症状,组织学检查感染鸡的肝脏、气管和肺脏组织均有损伤.人工感染后第3d和同居感染第2d鸡体内可分离出鸭源鸡杆菌,人工感染后第96d仍能够分离到鸡杆菌.ELISA方法证实人工感染后47 d和同居后32 d出现抗体高峰,持续2～3周,人工感染组和同居组抗体水平均高于对照组(p＜0.05);荧光定量PCR检测病料结果显示人工感染组和同居组的气管组织中细菌含量最高.本研究表明雏鸡在4日龄即可感染鸭源鸡杆菌,并能通过同居传播,长期带菌、排菌;感染后抗体产生缓慢、持续期短.本研究为鸭源鸡杆菌的流行病学、致病机理研究及防治措施的制定等提供了参考依据.     

鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用

扩增鸡杆菌毒力基因gtxA全长序列,对GtxA蛋白的抗原性进行预测。将gtxA基因的部分抗原表位区所处片段克隆至pGEX-6P-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内表达。重组菌在37℃条件下经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果表明该蛋白高效表达,表达蛋白相对分子质量约为50 000,以可溶性蛋白和包涵体蛋白2种形式存在。Western blotting分析表明,获得的蛋白具有良好的反应原性和特异性。以纯化的GtxA蛋白为包被抗原建立了抗GtxA间接ELISA方法:抗原最佳包被质量为0.403μg/孔,一抗血清的最佳稀释度为1∶160,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2 000,阳性判定标准为血清D450≥0.28。应用建立的检测方法对680份临诊鸡血清进行检测,结果显示河南省不同地区鸡群鸡杆菌感染阳性率为19.06%(129/680)。结果表明,该方法可有效检测鸡杆菌血清抗体。