利用胚挽救获得葡萄三倍体植株

为获得三倍体葡萄新种质,以葡萄四倍体‘醉金香’×二倍体‘秋黑’杂交所得幼果为试材,研究了幼果低温处理天数、培养基IAA浓度、胚珠处理方式以及不同光质等因素对胚发育及胚萌发的影响。结果表明,采集授粉后35 d的杂交幼果,先进行4℃低温处理,再取出胚珠接种,有利于胚发育和萌发,以低温40 d和30 d处理的胚发育率和萌发率最高,分别为91.8%和24.4%;培养基IAA浓度为0.2 mg/L时可显著提高胚萌发率;进行切喙处理的胚珠胚萌发率显著高于完整胚珠接种;发光二极管LED复合光(红∶蓝∶白=3∶1∶1)比日光色荧光灯(日光灯)更适合杂种胚萌发;用流式细胞仪检测了20个杂种后代株系,其中三倍体株系19个,后代三倍体株率为95.0%。     

毒死蜱在梨果实不同部位的残留及消解动态

为探明毒死蜱在梨果实不同部位的残留及消解规律,以20 a生鸭梨（Pyrus bretschneideri Rehd.cv.Yali）为试材,于果实生长期在套袋后向整株喷施48%毒死蜱乳油500倍液（有效成分960 mg/L）,分析毒死蜱向果实中的运输及分配规律;于果实成熟期在采收前向果面喷施48%毒死蜱乳油1 000倍液（有效成分480 mg/L）,分析采后毒死蜱在梨果实不同组织中的分布特征。采用乙腈萃取和GC-NPD检测方法,测定不同处理试材中的毒死蜱含量。结果表明,在果实套袋情况下,整株喷施毒死蜱后72 h内果实不同部位（果心除外）毒死蜱含量均呈现先逐渐上升而后下降趋势,其中果柄、果皮和果梗洼中毒死蜱最高含量值及其出现的时间分别为6.66 mg/kg（12 h）、2.42 mg/kg（24 h）和0.09 mg/kg（12 h）,表明套袋果实毒死蜱来源于枝叶运输,经果柄进入果实后易向果皮累积;而未套袋果施药后24和72 h果皮中毒死蜱含量分别为套袋果的12.56和7.29倍,表明套袋可有效降低果实中毒死蜱的残留量。于果实成熟期向果面喷施毒死蜱后7、14和25 d,果皮中毒死蜱残留量分别为15.54、13.70和12.81 mg/kg,占全果含量的100%,而果肉中毒死蜱残留量低于本检测方法的最低检出浓度（0.05 mg/kg）,因此果皮为果实中毒死蜱主要残留部位,且贮藏期果皮中毒死蜱不易向果肉扩散。     

花粉管通道法遗传转化核桃的研究

 为了提高核桃花粉管通道法转化成功率,以‘清香’核桃（Juglans regia L.）为试材,研究了外源DNA 导入受体时间、DNA 浓度和导入方法对导入效率的影响。结果表明：外源DNA 滴加处理的适宜时间为授粉后14 ~ 20 h;外源DNA 注射处理的适宜时间为授粉后24 h。综合考虑外源DNA 浓度对坐果率和GUS 检测结果的影响,认为350 ~ 500 μg · mL^-1 DNA 适宜转化。采用切割柱头滴加、柱头直接滴加和子房注射等3 种导入外源DNA 的方法均获得了转化成功的果实,其中以切割柱头滴加法获得的转化果实率最高（36.4%）,其次是柱头直接滴加法（20.7%）,子房注射法因易造成机械损伤,坐果率最低（10.9%）。     

DNA浓度及注射时间对苹果花粉管通道法基因转化率的影响

通过花粉管通道法，将携带CBF3和GUS基因的pWBVec10a质粒DNA导入苹果。坐果后70d左右采收种子，将收获的种子进行离体培养，培养基为MS+BA0.2mg/L+GA2.0mg/L，附加蔗糖50g /L，琼脂6 g/L，培养40d后对转化子叶进行GUS染色检测。结果表明，最佳注射时间为授粉后11~24h之间。随着注入外源DNA浓度的增加，坐果率逐渐降低，DNA浓度为500μg/ml时，坐果率可达3.1%；DNA浓度为1000μg/ml时GUS基因阳性表达率可达12.5%。     

植物抗病机制及果树抗病育种研究进展

果树病害对果品生产危害严重,长期以来科技工作者们致力于植物抗病机制研究并利用育种方法进行品种改良,以提高果树抗病能力。本文综述了近年来国内外学者在植物物理结构特征与抗病性的关系以及化学抗菌物质与抗病性的关系等方面研究,回顾了果树在抗病育种方面所取得的研究成果,论述了转基因技术在果树抗病育种中的应用,以期为今后果树抗病育种研究提供参考。     

苹果叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

以苹果品种嘠拉试管苗为试材,研究了卡那霉素(Km)、潮霉素(Hm)对继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素(Cef)和羧苄青霉素(Carb)对苹果离体叶片再生的影响及对农杆菌EHA105和LBA4404的抑菌效果;以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。结果表明:Km10mg/L、Hm4.0mg/L完全抑制了叶片不定芽的分化,可作为苹果叶盘法转化时抗性芽的选择压;Km50mg/L、Hm5.0mg/L达到继代苗的半致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度;由于抗性芽再生的选择压与抗性苗筛选浓度相差较小,Hm相对于Km更适合作为苹果基因转化的选择标记;培养基中附加Cef300mg/L能完全抑制农杆菌生长,对叶片不定芽的再生影响不大;而附加Carb则需400mg/L以上才能抑制农杆菌生长,同时严重抑制了叶片再生。因此,宜选用Cef作为苹果基因转化的抑菌抗生素。     

标记基因nptⅡ在转基因苹果嫁接砧穗间无相互传导

 以携带外源新霉素磷酸转移酶基因( nptⅡ基因) 苹果品种嘎拉、未进行基因转化的普通型嘎拉和苹果砧木M26组培苗为试材, 通过试管微嫁接方法, 对其体内所含外源nptⅡ基因在砧穗中的传导性进行了研究。结果表明, 外源nptⅡ基因只在转化植株体内表达, 不通过嫁接在接穗和砧木间进行传导。     

外植体及培养条件对葡萄不定芽再生的影响

以优良无核葡萄品种莫利莎、皇家夏天为试材,分别从外植体类型、叶片接种部位、接种方式及培养条件等方面进行不定芽再生技术研究。结果表明,2品种葡萄试管苗离体叶片切割后接种较节间和叶柄容易诱导不定芽再生;将叶片切分为叶尖、叶中、叶基部叶块分别接种,其不定芽再生能力没有差异;取自培养30～50d继代苗上的叶片,其不定芽再生效果相同;叶块以近轴面或远轴面接触培养基的接种方式对不定芽再生影响不大,不过叶片远轴面贴近培养基接种,产生的愈伤组织状态较好;25℃左右小幅变温或恒温的条件能诱发2个葡萄品种产生较多的不定芽;葡萄不定芽再生须经黑暗培养或弱光培养,暗培养时间在2周与4周之间再生效果差异不显著。     

温度和渗透压对苹果试管苗延缓生长法种质保存的效应

以富士、乔纳金试管苗为试材,通过在继代培养基中加入不同浓度的蔗糖、琼脂、甘露醇提高渗透压或置于不同温度下,筛选合适的延缓生长的条件。试验结果表明：低温条件抑制试管苗生长效果明显,适宜的低温处理为接种后在25℃培养室条件下缓苗5～10d移至8℃培养,可延长保存时间至1年半以上,茎尖成活率达100%;提高培养基琼脂、蔗糖浓度或添加甘露醇都能提高培养基渗透压,抑制试管苗生长,且随浓度增加,抑制作用愈发明显,但琼脂、甘露醇处理中有部分茎尖死亡;综合比较,8℃低温、60 g/L蔗糖处理延缓试管苗生长效果较好。同一处理下品种间有差异,富士延缓生长的效果好于乔纳金。     

苹果转基因研究进展

Main progress of transgenic techniques in apple made in recent years was summarized, and related research achievements in various aspects like transformation method, regenerating ability of explants, strain type and infection conditions of Agrobacterium were reviewed. On this basis, the current bottlenecks in transgenic techniques in apple were put forward.