苹果轮纹病病菌分生孢子离体人工诱导技术研究

为进一步了解苹果轮纹病菌的生物学特性,解决其在离体培养条件下产生分生孢子很少的问题,研究了培养基pH值、培养温度、光源和光照条件对菌丝体生长和分生孢子发生的影响以及刮除菌丝体对分生孢子发生的影响。结果表明,24℃～28℃较适宜菌丝体生长,24℃时分生孢子囊和分生孢子发生最多;培养基pH5.0以及接种后在黑光灯下培养有利于分生孢子囊和分生孢子产生;菌丝体生长到一定程度后,刮除菌丝体对分生孢子囊和分生孢子的发生有显著促进作用。     

适于转基因苹果种子和果肉总DNA提取的方法

为探求适宜的转基因苹果种子和果肉DNA提取方法,以转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（CpTI）嘎拉（Gala）苹果果实为试材,采用改良CTAB法、SDS法与高盐低pH值SDS法对苹果种子和果肉进行基因组总DNA提取。结果表明,在提取种子基因组DNA时,供试3种提取方法均可获得纯度较高的DNA,但不同方法所获得的DNA产量差异较大,以改良CTAB法获得的DNA产量最高,为0.221 mg?g-1鲜重,SDS法和高盐低pH值SDS法所获得DNA产量偏低,分别为0.053 mg?g-1鲜重和0.034 mg?g-1鲜重;在提取果肉基因组DNA时,SDS法在纯度和产量上效果最好,DNA的A260/ A280 值为1.808,产量为0.012 mg?g-1鲜重,而其它两种方法提取质量较差。考虑到质量和得率的综合因素,认为改良CTAB法适宜提取转基因苹果种子DNA,SDS法适宜提取转基因苹果果肉DNA。     

黑暗培养对苹果组培快繁及叶片再生的影响

为明确暗培养在苹果组培中的作用,研究了适当黑暗培养对苹果组培快繁及叶片再生的影响。新红星苹果茎尖外植体接种和生根阶段,1周暗培养有利于茎尖分化和不定根诱导。M26继代苗接种10d后进行10～15d的黑暗培养,可显著增加有效苗数量。乔纳金、王林苹果叶片再生经3周左右暗培养,可将再生率提高3倍多,再生芽数增加4～6倍。生理代谢分析表明,除淀粉含量外,暗培养试管苗的可溶性糖、氨基酸、蛋白质的含量均比光培养苗高。     

外源基因在苹果转基因植株的稳定性研究

以继代培养13年的转豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因和新霉素磷酸转移酶(nptⅡ)基因苹果嘎拉、王林、乔纳金和富士组培苗及田间定植6～8年的转基因植株为试材,应用卡那霉素筛选和PCR扩增分析对外源基因的稳定性进行研究。结果表明,在57个苹果转基因株系组培苗中均可检测出CpTI特异基因片断;转化株系在添加50mg/L卡那霉素的培养基中生长正常。田间株系PCR检测结果表明,转入的外源CpTI基因在所测株系的叶片、花粉及大部分根系中稳定存在,有极少数株系的根系中未检测到特异表达条带。结果说明外源基因可以在转基因植株中稳定存在,但在不定根发生过程中有可能会丢失。     

双向电泳技术在园艺植物蛋白质组学研究中的应用

双向电泳技术是蛋白质组研究的核心技术之一,本文对其原理、发展概况、优缺点及其在园艺植物蛋白质组学研究中的应用做了介绍,并对其今后的发展做了展望。     

苹果砧木离体培养快速繁殖的研究

试验选取苹果砧木难咽(M.micromalus Mak.)为试材,以快速繁殖为目的,对影响外植体建立、新梢增殖、生根及试管苗移栽的各个因素进行了研究。结果表明,外植体接种最适期为4-6月;最佳继代培养基为MS+BA0.5～1.0ppm+NAAO.05ppm+CH200ppm+蔗糖40g/1+琼脂6～8g/1;继代培养的最佳间隔时间是23～28d;取继代8次以上的试管苗嫩茎接种于1/2MS+IBA0.5ppm+蔗糖25g/1+琼脂6g/1的生根培养基上,生根率达90％以上;试管苗根系有根毛,移栽成活率85％,这对大量繁殖苗木具有应用价值。     

利用胚挽救获得葡萄三倍体植株

为获得三倍体葡萄新种质,以葡萄四倍体‘醉金香’×二倍体‘秋黑’杂交所得幼果为试材,研究了幼果低温处理天数、培养基IAA浓度、胚珠处理方式以及不同光质等因素对胚发育及胚萌发的影响。结果表明,采集授粉后35 d的杂交幼果,先进行4℃低温处理,再取出胚珠接种,有利于胚发育和萌发,以低温40 d和30 d处理的胚发育率和萌发率最高,分别为91.8%和24.4%;培养基IAA浓度为0.2 mg/L时可显著提高胚萌发率;进行切喙处理的胚珠胚萌发率显著高于完整胚珠接种;发光二极管LED复合光(红∶蓝∶白=3∶1∶1)比日光色荧光灯(日光灯)更适合杂种胚萌发;用流式细胞仪检测了20个杂种后代株系,其中三倍体株系19个,后代三倍体株率为95.0%。     

保存8~33年的苹果试管苗增殖能力与端粒长度分析

为分析苹果试管种质端粒长度与繁殖能力、衰老的关系,探索端粒长度与苹果试管种质离体保存年限的关系,对保存多年的不同继代次数的3个苹果品种试管苗进行了表型、增殖能力以及端粒长度的研究。结果表明:保存了8~33年的‘富士’、保存8~27年的‘金冠’和保存8~25年的‘嘎拉’苹果茎尖试管苗继代增殖能力大部分没有变化,表型未发生明显变化;3个品种不同继代次数30 d苗龄试管苗叶片端粒长度均差异不显著;继代73代苗龄分别为10、30、50和90 d的试管苗叶片端粒长度变化因品种而异,‘富士’‘嘎拉’差异不显著,‘金冠’50 d苗龄的最长,90 d苗龄的最短;继代71代苗龄30 d的‘金冠’试管苗茎段端粒长度显著高于叶片,茎段和愈伤组织、叶片和愈伤组织之间差异不显著,‘嘎拉’表现为愈伤组织>叶片>茎段。苹果试管苗端粒长度变化与其增殖能力、表型及同一继代周期内衰老程度的变化相吻合。     

外源基因在苹果植株中稳定性研究

以常规离体继代培养的转豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因苹果(Malus domestica Borkh.)(包括皇家嘎拉、王林、乔纳金和富士等60个株系)组培苗为试材,应用卡那霉素筛选、PCR扩增及RT-PCR扩增对其外源基因的稳定性进行研究.结果表明,在60个常规继...     

植物生长调节剂对苹果组培苗延缓生长保存的效应

以富士、乔纳金、金矮生、嘎拉组培苗为试材,在继代培养基中加入不同浓度的比久、矮壮素、多效唑及脱落酸,研究了植物生长延缓剂和生长抑制剂对苹果组培苗延缓生长种质保存的效应。结果表明：比久、矮壮素均有明显抑制苹果组培苗生长的作用,且茎尖存活率高,试管苗生长状况较好,转入常规继代培养基当代即可恢复生长,可用于苹果种质资源的离体保存,比久适宜的浓度为80mg/L,矮壮素为75mg/L左右;多效唑处理虽能明显抑制苹果试管苗生长,但易使有些品种试管苗玻璃化,可选择性应用;脱落酸作用过于剧烈,绝大部分处理苗死亡,不宜在苹果种质保存中使用。