鸭致病性大肠埃希菌的分离鉴定与毒力基因检测及菌蜕制备

从江苏省某水禽场的疑似感染致病性大肠埃希菌的病鸭中分离获得鸭致病性大肠埃希菌野毒株;通过玻板凝集和试管凝集试验确定其血清型,采用PCR进行分群分析和毒力基因检测;扩增φX_(174)噬菌体裂解蛋白E的基因序列,构建温控型表达质粒pBV221–E,并将其电击转化入分离毒株,升温诱导E蛋白表达制备菌蜕;通过测量菌液A600 nm值和在透射电镜下观察细菌形态,评估菌蜕构建效果;用该菌蜕进行灭活处理和无菌检测后,对雏鸭进行免疫,用间接ELISA法检测血清IgG水平。结果表明:该大肠埃希菌的血清型为O24,属于B1群,具有毒力基因fimC、csgA和iroN;获得的鸭致病性大肠埃希菌菌蜕裂解率为99.96%;经透射电镜观察发现,制备获得的菌蜕表面有明显孔道,细胞质从孔道溢出,细胞膜皱缩变形;抗体水平检测结果显示,二免后菌蜕免疫组雏鸭血清IgG水平显著提高。可见,通过将pBV221–E重组质粒转化至鸭致病性大肠埃希菌分离株,调节细菌培养温度诱导E蛋白表达,能制备鸭致病性大肠埃希菌B1群O24型野毒株菌蜕。该菌蜕可诱发机体产生体液免疫。     

品种和部位对鸭肉肉质的影响

选择番鸭、樱桃谷鸭和高邮鸭等3个品种鸭各30只,测定屠宰性能、常规营养成分、胶原蛋白含量、剪切力值、肌纤维直径、肌束膜厚度等相关指标。结果表明：番鸭是肉用性能最好的优质肉鸭。各品种鸭胸肌率均比腿肌率高,胸肉剪切力值小于腿肉,胸肉显著嫩于腿肉（P〈0.05）。剪切力值和肌纤维直径、肌束膜厚度呈极显著正相关（P〈0.01）,与蒸煮损失、胶原蛋白含量显著相关。影响鸭肉嫩度差异的关键是肌纤维直径的粗细和肌束膜厚度的大小,肌纤维直径越粗,肌束膜厚度越大,剪切力值也越高,鸭肉嫩度越差,蒸煮损失和胶原蛋白含量对鸭肉嫩度也有影响。     

鸡支康口服液的亚慢性毒性试验研究

试验根据《兽药试验技术规范汇编》进行了鸡支康口服液对小白鼠的亚慢性毒性研究,试验设高、中、低3个剂量组,另设空白对照组,连续给药28 d后剖杀各组小鼠,观察其临床表现,并进行血常规和血液生化指标检测及脏器系数和组织病毒学检查。统计学分析结果表明,各组间的体重变化和脏器系数均无显著差异(P>0.05);血常规检查结果表明,试验组的红细胞数、血小板数、红细胞压积及淋巴细胞数与空白对照组相比呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05),其余各检测指标各试验组与空白对照组相比差异均不显著(P>0.05);血液生化指标结果表明,试验组的谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血糖含量与空白对照组相比呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05),其余各检测指标各试验组与空白对照组相比差异均不显著(P>0.05);组织病理学检查结果显示,小鼠的主要内脏器官未见明显异常。试验结果表明,鸡支康口服液对小鼠血常规和血液生化指标影响甚微。提示,其按临床剂量使用无毒性反应,安全可靠。     

伴大豆球蛋白的酶解研究

[目的]筛选水解伴大豆球蛋白效率高的蛋白酶。[方法]采用几种常用的蛋白酶水解伴大豆球蛋白,以水解度为指标,筛选最适水解伴大豆球蛋白的蛋白酶,并对水解工艺进行初步优化研究。[结果]在相同水解条件下,复合风味蛋白酶对伴大豆球蛋白的水解能力相对较强,水解率达到22%,因而选用其作为酶解伴大豆球蛋白的工具酶。通过单因素试验和正交试验确定复合风味蛋白酶水解伴大豆球蛋白的最佳条件：pH值为7,温度为50℃,底物浓度为14%,酶与底物浓度比为6%,酶解时间为8 h。[结论]该研究为伴大豆球蛋白的开发应用提供了理论和试验依据。     

大豆黄酮对产蛋鸡摄食行为及有关内分泌的影响

选用35周龄伊莎产蛋鸡8只,分别安装慢性颈静脉血管插管,手术后经过适应期,待产蛋鸡体况良好、摄食正常,开始实验。实验采用自身对照法,对照期饲喂基础日粮,实验期在喂料前通过颈静脉血管插管注射大豆黄酮。应用摄食行为计算机监测系统(FIDAS系统)记录各个实验期产蛋鸡喂料后4 h内的采食行为数据。结果显示,实验期(注射大豆黄酮后)与对照期相比较,产蛋鸡午前(8:00~12:00)与午后(13:00~17:00)4 h内摄食量分别增加21.9%与33.9%(P<0.05);摄食时间分别增加3.3%与12.3%;摄食餐数分别增加14.3%与49.1%(P<0.01);血糖水平分别降低10.3%(P<0.05)与21.5%(P<0.01),瘦素水平分别升高14.9%与4.32%,胰岛素水平分别升高14.6%与27.7%(P<0.01)。提示大豆黄酮能够促进蛋鸡摄食,并影响有关内分泌激素的水平。     

不同水平豌豆蛋白粉对高邮鸭生长及其相关激素与基因表达的影响

【目的】本试验研究了豌豆蛋白粉对0~4周龄高邮鸭生长性能、血清激素以及与生长相关基因表达的影响。【方法】试验选用160只1日龄高邮鸭,随机分为4组,每组4个重复,每个重复10只鸭。对照组(C0组)饲喂基础饲粮,试验组(C1、C2、C3组)分别饲喂以3%、6%、9%的豌豆蛋白粉替代基础饲粮中豆粕的试验饲粮,试验期为28 d。【结果】(1)试验组C1、C3鸭日增重和采食量均极显著低于对照组(P0.01),C2日增重和采食量显著低于对照组(P0.05)。试验组C1料重比显著高于对照组(P0.05),C2、C3料重比与对照组差异不显著(P0.05)。(2)试验组血清GH、Insulin、Leptin和IGF-I激素水平与对照组差异不显著(P0.05),试验组C2和C3的IGF-I水平显著高于试验组C1(P0.05)。(3)试验组对鸭肌肉中GH表达量的影响与对照组差异不显著,但表达量均有所提高。试验组对Insulin表达量没有显著影响,试验组C2腿肌中Obese基因表达量显著高于对照组C0(P0.05)。试验组C2、C3相对于对照组上调了肌肉组织中IGF-I的表达量(P0.05),而试验组C2中腿肌IGF-I表达量显著高于对照组(P0.05)。【结论】综上研究结果,饲粮中用6%豌豆蛋白粉代替部分豆粕后养分利用率最高,对血清激素水平没有显著影响,但促进了GH等生长相关基因的表达,特别是上调了腿肌中IGF-I的表达。     

豌豆蛋白粉对1~4周龄高邮鸭生长性能、养分表观消化率、消化器官发育及血清生化指标的影响

本试验旨在研究豌豆蛋白粉对1~4周龄高邮鸭生长性能、养分表观消化率、消化器官发育及血清生化指标的影响。试验选用160只1日龄高邮鸭,随机分为4个组,每组4个重复,每个重复10只鸭。对照组(C0组)饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验组(C1、C2、C3组)分别饲喂以3%、6%、9%的豌豆蛋白粉替代基础饲粮中豆粕的试验饲粮。试验期28 d。结果表明:1)C1、C2、C3组的平均日增重和平均日采食量均显著低于对照组(P0.05);C1组的料重比显著高于对照组(P0.05),C2、C3组的料重比与对照组差异不显著(P0.05)。2)C1、C2、C3组的粗蛋白质(CP)和总磷(TP)表观消化率与对照组差异不显著(P0.05),C2组的粗纤维(CF)、粗脂肪(EE)和钙(Ca)表观消化率与对照组差异不显著(P0.05),C1、C3组的CF、EE和Ca表观消化率均显著低于对照组(P0.05)。3)豌豆蛋白粉对腺胃、胰腺和十二指肠的相对重量没有显著影响(P0.05)。C1组的肌胃相对重量显著高于对照组(P0.05),C2组的空肠和回肠相对重量均显著高于对照组(P0.05),C2组的十二指肠密度、空肠密度和回肠相对长度均显著高于对照组(P0.05)。4)豌豆蛋白粉对血清白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)含量没有显著影响(P0.05),C3组的血清总蛋白(TP)含量显著高于对照组(P0.05),C2、C3组的血清尿素氮(UN)含量均显著高于对照组(P0.05),C1、C2、C3组的血清甘油三酯(TG)含量均显著高于对照组(P0.05),C1、C3组的血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量显著低于对照组(P0.05)。综上,饲粮中使用豌豆蛋白粉替代豆粕会降低1~4周龄高邮鸭的平均日增重和平均日采食量,但6%豌豆蛋白粉替代豆粕对养分表观消化率没有显著影响,料重比低于对照组,而且有助于小肠器官发育指数提高,影响体内蛋白质和脂肪代谢的变化。建议6%豌豆蛋白粉作为高邮鸭饲粮的推荐使用量。     

鸡α-干扰素成熟肽的原核表达及其多价血清的制备

以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素的成熟肽基因序列,构建原核表达质粒pET32a-α和pGEX6p-α;SDS-PAGE及Western blotting法检测两载体特异性表达成熟肽;将纯化的pET32a-α诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清并以pGEX6p-α诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果表明:扩增的鸡α-干扰素成熟肽基因成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶12 000。其结果为制备安全、高效的重组干扰素奠定了基础,为定量检测机体内产生的α干扰素进而了解机体免疫状态提供较为可靠的技术手段。     

重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用

在前期研究基础上,将经转座获得的杆状病毒重组穿梭质粒rBacmid-Rep、rBacmid-VP和rBacmid-LYZ共转染Sf9昆虫细胞,产生了表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(rAAAV)(rAAAV-hLYZ);然后用纯化好的rAAAV-hLYZ溶液,在固体培养基上对常见病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、白色念珠菌进行体外抑菌活性试验,研究重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用。结果表明,溶菌酶基因能在重组禽腺联病毒中高效表达,这为进一步探索溶菌酶作为新型兽用生物药物奠定了基础。     

内含肽-弹性蛋白介导的人溶菌酶在毕赤酵母中的表达

将人溶菌酶、内含肽、弹性蛋白3个基因串联插入巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC-MIELYZ,经Pme I酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选阳性克隆,并用甲醇诱导表达,以探讨内含肽-弹性蛋白介导的人溶菌酶在毕赤酵母中的表达情况。结果表明:SDS-PAGE和Western blot证实表达的融合蛋白分子量正确,抑菌试验表明融合蛋白对微球菌具有良好的抑菌效果。说明融合基因在毕赤酵母中成功表达,为后继的纯化工作及新型毕赤酵母表达载体的构建奠定基础。