河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建

采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.     

猪圆环病毒2型ORF2／猪白介素2（POIL-2）嵌合基因真核表达载体的构建、表达及在小鼠体内的免疫效果

为了研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus typc 2,PCV2)核酸疫苗,采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过--基因柔性接头(linker)(G4S)3,将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1( )真核表达载体中;筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞,分别采用PCV2抗原间接免疫荧光和PoIL-2蛋白ELISA方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性;提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2 ORF2基因的重组表达质粒PcDNA3.1/OFR2(rpcDNA3.1/OFR2)免疫Balb/c小鼠并检测其免疫效果.结果表明,成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1( )重组表达质粒;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达,表达的rCap-linker-PoIL-2融合蛋白可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应,表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap和PoIL-2蛋白的双重生物学活性;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导产生明显的抗PCV2抗体,且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2.     

鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的分子检测

对豫北地区临床分离的102株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定、MICS值测定及氟苯尼考耐药基因floR的检测.最敏感的是头孢喹肟,敏感率为93.1%;其次为阿米卡星和氟苯尼考,敏感率分别为59.8%和54.9%;而对复方新诺明的耐药率达到100%;此外,对四环素,多西环素,氨苄西林,恩诺沙星和沙拉沙星的耐药率为78.4%~94.1%.氟苯尼考耐药基因的分子检测显示,有45.1%的菌株显示floR基因阳性.对其中4株大肠杆菌的氟苯尼考耐药基因floR进行了克隆和测序.结果表明,克隆的floR基因所推导的氨基酸序列与其它12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与报道的floR序列间仅存在1~3个氨基酸替代.     

仔猪关节炎粪肠球菌生物学特性研究

从病猪肿大的跗关节中分离了1株疑似肠球菌菌株,经过常规方法进行染色特性、培养特性观察以及敏感性和致病试验,利用Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行生化特定,并用PCR方法扩增分离株的16S rRNA基因克隆测序,与GenBank上登录的相关菌株及3个粪肠球菌标准菌株进行16S rRNA序列比较、同源性分析并构建系统发...     

不同佐剂PRV灭活苗免疫奶牛及山羊抗体消长规律研究

用间接ELISA检测伪狂犬病病毒 (PRV闽A株 )自制的油乳剂灭活苗、氢氧化铝胶灭活苗免疫山羊和犊牛后的抗体效价 ,并以市场购买的基因缺失油乳剂灭活苗作对照 ,依据山羊抗体的ELISA效价找出抗体消长规律 .采集犊牛、山羊血清用中和试验测抗体 .试验结果表明 ,(1)首次免疫后抗体上升幅度低 ,仅 2～ 3个滴度 ,且维持时间短 ,仅为 2周 ;二免后抗体上升可高达 12个滴度 ,且维持时间长达 4个月 .(2 )试验组油乳剂灭活苗免疫效果优于氢氧化铝胶灭活苗 .(3)用同种疫苗免疫的犊牛与山羊具有相似的抗体水平和消长规律     

复方芩连汤对几种禽病病毒体外增殖的抑制作用

以黄连、黄芩、板蓝根、黄芪等为主要成分的复方芩连汤作为抗病毒药,利用细胞病变(CPE)抑制试验测定中药复方在长成单层的鸡胚成纤维细胞(CEFC)上对鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)等几种禽病病毒的抑制作用。结果表明:中药复方对NDV具有较好的抑制作用,其最小直接杀灭浓度为7.81μg/mL,最小阻断浓度为3.9μg/mL,最小治疗浓度为15.62μg/mL;中药复方在体外对IBV的T株和M41株也具有显著定的抑制作用,而对IBDV的抑制作用则不明显。     

表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测

为构建表达鸡IL-18的重组禽痘病毒，将含痘病毒启动子IP2EP2驱动的鸡，IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681／ChIL-18。将pSY681／ChIL-18转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组，产生表达鸡IL-18的重组禽痘病毒rFPV-ChIL-18。在含有X—gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后，对重组病毒rFPV-ChIL-18又进行了多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板，利用鸡IL-18基因特异引物进行PCR，扩增出1条约0．6kb的带。收集含鸡IL-18蛋白的细胞上清液进行MTT试验，表达的产物能明显提高鸡淋巴细胞的转化率。     

鸡甘保罗病及其混合或继发感染

从1988年开始,鸡甘保罗病(传染性囊病、IBD)在我国广泛流行,1989～1990年我省少数鸡场发生该病。1991年几乎所有的鸡场都未能幸免,造成巨大经济损失。广大养鸡人员和兽医工作者为防治本病做了大量的探索。本文结合我们的工作体会,着重就此病及其混合感染和防治措施综合报道如下:     

不同毒株猪细小病毒VP2基因的克隆与序列分析

应用PCR扩增了猪细小病毒NJ-1株、NJ-2株、7909株和Vaccine株的VP2基因,分别克隆于pGEM-TEasy载体中,测定其核苷酸序列,并推导出相应的氨基酸序列,对其核苷酸和氨基酸序列进行分析和同源性比较。所测4个序列中,NJ-1株、NJ-2株和7909株序列均为1437bp,共编码479个氨基酸;而Vaccine序列为657bp,比其他毒株缺失780bp,共编码219个氨基酸。将所得4个序列与GenBank中NADL-2株、Kresse株、China株及VR-1株相应的核苷酸及氨基酸进行同源性比较,发现其核苷酸和氨基酸的同源性分别在97.7%~99.9%和97.2%~99.2%之间,具有高度同源性;通过绘制系统进化树可知,分离自国内的China株、NJ-1株、NJ-2株、7909株及Vaccine株亲缘性最为相近,与其他毒株的亲缘关系较远。