狸猫α-干扰素全基因的克隆及生物信息学分析

根据猫α-干扰素基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,PCR扩增狸猫α-干扰素全基因,并克隆、测序。用DNAStar软件及在线分析方法对克隆的IFN-α基因核苷酸及其推导氨基酸序列进行分析,并与人和其他种动物的IFN-α基因进行同源性和进化分析。结果表明,获得了狸猫α-干扰素全基因序列,其大小为631 bp,编码194个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有1个潜在的N-糖基化位点和7个潜在的O-糖基化位点。IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。狸猫IFN-α基因的成功克隆为进一步研究猫IFN-α基因表达、生物学活性和应用奠定基础。     

伪狂犬病病毒Min-A株gD基因的克隆及其真核表达质粒的构建

参考GeneBank收录的伪狂犬病病毒gD基因的序列设计了一对引物,对PRV Min-A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体.对重组质粒PGTE-gD进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性.测序结果表明目的片段包含一个1203bp的开放性阅读框(ORF),编码400个氨基酸组成的多肽.将gD基因亚克隆至真核表达载体pcDVA3.1-的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pcDNA-gD,为下一步基因免疫奠定了基础.     

猪流感病毒DNA疫苗接种剂量、途径及与猪白介素-6 DNA联用对猪抗流感病毒感染的作用

多年来，古典的H1N1流感病毒感染一直是猪呼吸道疾病的一种常见病因。但是最近，H3N1、H1N2和H4N6病毒在北美猪群中已经出现。猪流感病毒感染常见特征是暴发急性呼吸道疾病，伴有发热、嗜睡、流鼻涕、咳嗽和呼吸困难等症状，随之而来的厌食和体重下降使上市时间推迟。因此，猪流感也是农场主关注的一个经济问题。流感病毒与猪繁殖呼吸综合征病毒混合感染时增加病死率，促进猪呼吸道疾病复合症的发生。     

3 株鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与序列分析

鸡接种传染性喉气管炎病毒（ILTV）弱毒疫苗是预防传染性喉气管炎（ILT）的主要措施,但由于目前使用的弱毒疫苗对雏鸡仍有一定毒力,可引起潜伏性感染及疫情扩散,毒力易于返强,强弱毒无法鉴别诊断等不足,因而缺失毒力基因而保留抗原性的基因工程疫苗等新型ILT疫苗的研制势在必行。研究表明,TK基因是疱疹病毒增殖非必需基因和主要的毒力基因,在神经组织感染与潜伏性感染中具有重要作用。利用基因技术敲除掉病毒的TK基因,可使病毒毒力下降,但不改变其免疫原性,     

体外鉴定的禽流感病毒T细胞表位的免疫效果研究

为验证来源于禽流感病毒的、可与鸡MHCI类分子结合的九肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV的免疫原性,使用TIGECPKYV、LLLAIVSLV和KILTIYSTV3条多肽免疫BALB／c小鼠,加强免疫时和加强免疫1、2、3、4、5周后分别采血,流式细胞术测定免疫前后小鼠外周抗凝血中CD8^＋淋巴细胞的变化情况;加强免疫后14d进行MTT试验;首次免疫3周后进行DTH试验;ELISA检测免疫前后小鼠分泌IFN-γ的变化情况。结果表明,KILTIYSTV、LLLAIVSLV、TIGECPKYV免疫后分别引起CD8^＋T淋巴细胞4．2％、4．0％和0．2％的额外增殖。KILTIYSTV和LLLAIVSLV免疫组的IFN7的增长和迟发型变态反应均显著高于对照组。简言之,与重建的MHCⅠ类分子结合的多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV可以刺激小鼠产生特异性CTL反应,而不结合的多肽TIGECPKYV刺激小鼠未产生特异性CTL反应。     

猪繁殖与呼吸综合征在我国的流行动态

猪繁殖与呼吸系统综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrclme,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱发的一种接触性传染病．主要引起母猪流产、死胎、繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状。PRRS最早于1987年发现于美国,1991年7月由荷兰中央兽医研究所首次分离出PRRSV,并命名为Lelystad virus(LV)。     

不同品种猪IFN-α基因的克隆与序列分析

根据现有猪α干扰素(IFN-α)基因序列设计引物,应用PCR技术直接从肝组织基因组中扩增丹系长白和法系长白、英系大白和法系大白猪IFN-α基因。将克隆得到的特异性片段克隆入pGEM-TEasy载体中,转化感受态细胞JM109,运用蓝白斑筛选、质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性可疑菌株,并将筛选的阳性株进行测序。结果表明,得到了上述4个品系的猪IFN-α基因。核苷酸同源性均在97.2%以上,氨基酸同源性均在92.8%以上。     

板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖及分泌细胞因子和NO的影响

用MTS比色法测定了不同质量浓度的板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖的影响,分别用ELISA法和硝酸还原酶法测定了板蓝根多糖对猪脾脏淋巴细胞分泌IL-2,IL-4,IFN-γ和NO的影响.结果表明,板蓝根多糖能显著促进猪脾脏淋巴细胞的增殖.同时又能协同ConA或LPS诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);能显著促进由ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ,抑制IL-2的分泌,对IL-4分泌的影响不明显;低剂量板蓝根多糖能显著促进NO的分泌(P<0.01).     

鸡传染性支气管炎病毒HN99株N基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)N基因序列,设计并合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增IBVHN99株的N基因,并将其克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌Top10,提取pMD18-T-N重组质粒,进行酶切和PCR鉴定,并对阳性质粒进行测序,将测序结果与H52,Ark99,BJ等参考毒株进行序列分析。结果表明,N基因全长为1230bp,编码1条409个氨基酸组成的多肽;其核苷酸与H52,Ark99和BJ等毒株的同源性为88.4%~90.7%,氨基酸同源性为91.7%~94.4%;HN99株与H52,Ark99和BJ等其他各毒株的亲缘关系均较远,是1株新的IBV变异株。     

北京长白杂交猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建

根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%.