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11.
12.
根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premierexpress软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK.15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-TEasy载体中,构建重组质粒.转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.在25此扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1.12TCID50/mL. 相似文献
13.
[目的]进一步了解河南地区猪细小病毒(PPV)的变异特点.[方法]利用PCR方法,对河南郑州、周口、济源等地采集的疑似PPV感染的病料进行检测.PCR检测为阳性的病料经处理后,同步接种猪睾丸细胞盲传6代,对4株PPV全基因组进行分段克隆及测序,并与GenBank登录的国内外PPV流行株全基因组进行比较.[结果]获得的4株PPV全基因组序列全长均为4679 bp.4个毒株之间的核苷酸同源性介于99.6% ~99.8%,与其他毒株间核苷酸同源性为98%~100%,遗传进化较为稳定.[结论]为PPV在河南地区分子流行病学调查及遗传变异分析奠定了基础. 相似文献
14.
整合子与细菌多重耐药性 总被引:2,自引:1,他引:2
细菌的多重耐药已成为临床治疗的难题,其耐药机制、耐药基因的传播与转移是近年来研究的热点。近来研究表明,细菌中存在一种能捕获和表达基因的遗传单位———整合子在细菌获得耐药机制中起了重要作用。整合子编码一个整合酶负责基因盒在重组位点attⅠ和attC上的插入及切除,同时整合子也提供一个启动子(Pant)负责基因盒耐药基因的表达。整合子携带着重组的基因盒插入到转座子或接合质粒中,在不同的细菌间运动而传播耐药性,同时一个整合子可以捕获多个基因盒,对细菌多重耐药的形成起重要作用。现就整合子的结构、类型、基因盒的种类与表达及其与细菌多重耐药性的有关研究进行综述。 相似文献
15.
根据GenBank发表的鸭γ-干扰素cDNA基因序列,自行设计、合成1对引物,应用RT-PCR技术,无需用非特异性免疫原如ConA、PHA等刺激分离的脾淋巴细胞,直接提取总RNA,扩增固始鸭γ-干扰素基因(DuIFN-γ),并进行克隆和测序。测序结果表明,获得了DuIFN-γ全序列,其大小为515 bp,包含一个完整阅读框,编码164个氨基酸残基,推导的氨基酸有3个潜在的N-糖基化位点,有5个与二硫键形成有关的半胱氨酸。序列比较分析发现,克隆的固始鸭IFN-γ基因序列与GenBank中4条鸭IFN-γ基因序列中的3条序列(AF087134,AF100929,AJ012254)完全一致,而与另一条北京鸭核苷酸同源性为99.6%,有2个碱基发生非同义变异,氨基酸同源性为98.8%。固始鸭与人和其他种动物的IFN-γ基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-γ基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。DuIFN-γ基因的成功克隆为进一步研究固始鸭IFN-γ基因表达、生物学活性和应用奠定基础。 相似文献
16.
有机硒和某些中草药对鸡免疫功能的影响 总被引:22,自引:2,他引:22
将购进的 1日龄雏鸡分组 ,其中 1组饲料中添加有机硒 ,另 3组分别添加中草药黄芪、女贞子、淫羊藿 ,另设 1组空白对照。饲养至 60日龄空腹称重 ,采血分离淋巴细胞 ,测其E 玫瑰花环形成率 ,计算其脾指数和法氏囊指数。结果其玫瑰花环形成率、脾指数和法氏囊指数分别为 :有机硒组 (37 79±0 0 2 ) %、 0 2 73、 0 474;黄芪组 (38 63± 0 0 6) %、 0 2 91、 0 486;女贞子组 (35 1 4± 0 0 3) %、 0 2 67、 0 467;淫羊藿组 (36 42± 0 2 ) %、 0 2 69、 0 468;对照组为 (2 6 0 6± 0 0 3) %、 0 2 4 8、 0 42 5。试验组与对照组结果差异显著 ,说明有机硒、黄芪、女贞子、淫羊藿对鸡体的免疫增强作用明显 ,尤其以黄芪组为最高 相似文献
17.
18.
19.
20.
采用随机扩增多态性DNA技术对产气荚膜杆菌进行PCR扩增。结果产气荚膜杆菌A,B,C,D4个型均可扩增出约430bp的条带,B,C型还扩增出约210bp条带,B,D型还扩增出约1210bp条带,A型还扩增出约240bp和690bp条带,各型之间的条带差别明显,从而为产气荚膜杆菌的基因分型、PCR快速诊断提供可靠的依据。 相似文献