伪狂犬病病毒gE/gI基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

为获得具有生物活性的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gE/gI蛋白,建立PRV抗体快速检测方法。将含有PRV gE、gI基因的质粒pFastBacdual-GP67-gE/gI转化至宿主菌,经位点特异性重组和蓝白斑筛选后获得重组杆粒rBacmid-gE/gI,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。采用悬浮的Sf9细胞进行发酵并纯化产物,SDS-PAGE和Western blot分析镍柱纯化后的重组蛋白。结果显示,重组杆粒在4800 bp处克隆出预期大小的条带,表示重组杆粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot表明,在50 ku和65 ku处出现预期大小的条带,能与PRV标准阳性血清特异性反应,不与PRV gE/gI缺失疫苗免疫血清反应。结果表明gE/gI重组蛋白具有良好的反应原性,为PRV抗体快速检测及区分PRV野毒感染和疫苗免疫奠定了基础。     

胸腺上皮细胞中雌激素诱导lncRNA的鉴定分析及表达载体构建

为研究胸腺上皮细胞（thymic epithelial cells,TECs）中雌激素（estradiol,E₂）对长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）表达的调节作用,本研究首先培养小鼠胸腺髓质上皮细胞系1（medullary thymic epithelial cell line 1,MTEC1）,经50 nmol/L E₂作用24 h后,观察对细胞表型变化的影响,并用CCK-8试剂盒检测细胞活力;提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术验证E₂对lncRNA-2410006H16Rik表达的调节作用;最后运用RT-PCR技术扩增其目的基因,构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik重组过表达载体。结果显示,50 nmol/L E₂能够明显抑制MTEC1的增殖,且相较于对照组细胞,50 nmol/L E₂处理组细胞的D_{450 nm}值极显著降低（P<0.01）,表明其细胞活力极显著下降。实时荧光定量PCR结果显示,在E₂作用下,lncRNA-2410006H16Rik在MTEC1细胞中的表达极显著上调（P<0.01）,约是对照组的2倍,与高通量测序结果一致。经RT-PCR、双酶切及测序结果分析显示,试验成功构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik表达载体。结果表明,TECs中lncRNA-2410006H16Rik的表达与E₂作用密切相关,为后续在细胞水平上进一步验证lncRNA-2410006H16Rik的调节功能奠定了基础。     

云南省主要野生观赏蕨类植物资源研究

通过整理文献资料和实地调查统计,云南省主要野生观赏蕨类植物共59科102属132种,主要集中分布在滇东南地区海拔1000～2000m的林下,对其生态型和生境的分布类型进行了统计分析。结果表明：81种为陆生,占总种数的61.4%;48种生长在林下或林缘,占总种数的36.4%。     

昆明地区主要观赏草资源及其观赏价值评价

在对昆明地区观赏草资源进行充分调查和研究的基础上,以植株观赏价值、株高、叶色、花序等性状为评价指标,利用灰色关联分析,对45种观赏草资源的观赏价值进行了综合评价。结果表明：45种观赏草中有34种与理想种的关联度在0.6000以上;综合评价比较高的观赏草有金猫尾（Saccharum fallax）、滇蔗茅（Erianthus longisetosus）、蔗茅（Erianthus rufipilus）、菰（Zizania latifolia）等,与理想种的关联度分别为0.8636、0.8125、0.9000和0.8155,可直接应用于园林建设中。     

鸡传染性法氏囊病病毒XX08株VP2高变区基因的克隆与序列分析

应用反转录(RT-PCR)技术从河南新乡某鸡场分离的鸡传染性法氏囊病病毒XX08株总RNA中克隆出593bp的VP2高变区基因。序列分析表明,XX08毒株VP2高变区氨基酸序列与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM以及经典弱毒株D78的同源性均为96.8%。遗传进化分析表明,该毒株与超强毒株UK661和OKYM位于同一进化树。XX08毒株与超强毒株具有相似的氨基酸特征,但是222位的A被P替代,提示XX08毒株可能为中等强毒力毒株。     

猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2研究进展

猪瘟(classical swine fever,CSF)是危害养猪业的主要传染病之一,致病原是猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV),E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要抗原蛋白.本文对E2蛋白的分子结构、抗原特性、对病毒毒力的影响和在进入靶细胞过程中的作用等4个方面的研究现状进行了阐述.     

猪瘟病毒结构蛋白E0抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,采用间接ELISA(E0-ELISA)方法,以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h效果最佳,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉溶液37℃作用2 h,待检血清以1∶100稀释后37℃作用60 min效果最佳,二抗以1∶5 000稀释后37℃孵育45 min效果最佳。当OD_(450)0.370时,判断为猪血清CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为1.99%～7.69%和2.16%～9.23%,表明该方法具有良好的稳定性;E0-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清时结果均为阴性;当CSFV阳性血清稀释至1∶640时结果仍为阳性,表明该检测方法具有良好的敏感性;与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E0-ELISA检测符合率为92.00%,敏感性为97.86%,特异性为78.33%。综上,成功建立一种经济、稳定、特异性好和敏感性高的CSFV血清抗体间接ELISA检测方法。     

纳米抗体技术及其在食品安全检测中的应用

骆驼科动物自然产生的仅由重链组成的抗体称为重链抗体,其中由单个可变结构域组成的称为重链抗体可变区(VHH),也被称为纳米抗体(Nb)。从生物学、免疫遗传学再到医学各个领域的潜在应用来说,纳米抗体具有常规抗体无可比拟的优点,可识别常规抗体不能识别的结构以及隐蔽表位。此外,它还具有高稳定性(耐高温、耐酸碱)、易表达等优点。这些优良特性可使其达到常规抗体无法实现的分析或诊断。因而,纳米抗体成为检测食品中非法添加剂、农药残留及农产品污染的理想抗体。主要论述纳米抗体技术以及在食品安全检测方面应用的最新进展和目前所面临挑战,为纳米抗体更好的应用于食品里的细菌和真菌毒素以及农药残留和农产品污染检测提供借鉴。     

发酵饲料及其在生猪生产中的应用研究进展

随着饲料“禁抗”政策的实施,大量研究表明,益生菌发酵饲料可作为抗生素替代品广泛应用于生猪养殖中。发酵饲料可提高饲料利用率,维持猪肠道菌群平衡,增强机体免疫力。本文综述了发酵饲料的类型及加工工艺,在生猪养殖上的明显优势和广泛应用,以及对养殖环境的影响,并对发酵饲料未来应用的趋势进行了展望。     

几种乔木林碳汇功能研究

根据研究区昆明市海口林场资源的相关资料,利用不同森林类型生物量与蓄积量之间的回归方程,对研究区8种主要乔木林及其不同林龄结构的生物量和碳储量进行了推算,并分析了天然林与人工林的碳储量和碳密度。结果表明,研究区8种主要乔木林的总碳储量为80 142.30 t,针叶林碳储量占总碳储量的57.94%;碳储量最大的乔木林为华山松林,其碳储量占总碳储量的30.73%;8种主要乔木林不同龄级碳储量由高到低分别为中龄林>近熟林>幼龄林>成熟林;同一龄级、不同类型乔木林的碳汇能力表现各异;研究区人工林的碳储量比天然林小,且人工林和天然林的碳密度低于我国的平均水平。