鸡毒支原体与鸡安卡拉病毒混合感染病例的实验室诊断

为查明贵州省铜仁市某蛋鸡场11月龄蛋鸡发病死亡的原因,采集病死鸡病料进行细菌分离培养,以及禽流感病毒、新城疫病毒、鸡安卡拉病毒、鸡毒支原体的核酸检测.结果:病料中未分离出细菌;鸡安卡拉病毒和鸡毒支原体核酸检测均为阳性,禽流感病毒、新城疫病毒核酸检测为阴性.结论:鸡场病例存在鸡毒支原体与鸡安卡拉病毒混合感染.     

山羊痘病毒P32蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定

为了获得具有生物安全性高的体外表达蛋白,以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因不同片段,将基因片段克隆至毕赤酵母菌表达载体pPICZαA中,构建了重组表达载体,转化感受态毕赤酵母菌X-33中并诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,有分子量约为64 ku的融合蛋白获得表达,与预期结果相符;Western-blot证实该表达蛋白具有免疫学活性。     

鸡毒支原体PstS蛋白的原核表达及其定位

通过SOE-PCR技术获得PstS基因全长并克隆到pColdⅠ,将重组表达载体pCold-PstS转化进BL21(DE3)后经IPTG诱导表达融合蛋白PstS,将其纯化后免疫新西兰兔制备多克隆兔抗血清,提取鸡毒支原体总蛋白、膜蛋白和胞浆蛋白,通过Western blot分析PstS蛋白的亚细胞定位.结果表明,PstS基因长度为1 065 bp,其蛋白在氨基酸9～31之间存在跨膜区,pCold-PstS经诱导表达获得融合蛋白PstS(存在于细胞膜和胞浆中),其约43 ku并具有较好的抗原性. PstS蛋白是鸡毒支原体膜表面的免疫原性蛋白,可为进一步研究其生物学功能和基因工程疫苗提供依据.     

贵阳市鸡群中禽流感不同亚型抗体的检测与分析

禽流感是由A型流感病毒引起禽类的一种烈性传染病,被世界动物卫生组织及国家农业部列为一类或A类动物疫病。根据A型流感病毒的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的差异,可将A型流感病毒分为不同的亚型。禽流感病毒属于A型,不同毒株的致病性存在差异,根据其对禽类致病力的不同,又可划分为高致病性毒株、低致病性毒株和非致病性毒株。     

一例鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定

为确诊某养鸡场发病的原因,采集临床病死鸡的肝脏、脾脏进行细菌分离培养,并通过细菌形态学观察、生化试验、分子生物学鉴定和药物敏感性试验.结果:分离细菌为革兰氏阴性杆菌,菌落形态和生化鉴定特征与大肠杆菌相符;16S rDNA PCR扩增及基因同源性分析确定为大肠杆菌;菌株对安普霉素、泰妙菌素、多西环素、硫酸粘菌素较敏感,对替米考星、泰万菌素、磺胺间甲氧嘧啶、泰乐菌素、阿莫西林存在耐药性.     

猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查与RT-PCR鉴定

对贵州省11个猪场出现的疑似猪繁殖与呼吸综合征病例进行流行病学调查和病原RT-PCR鉴定,结果表明,发病仔猪主要表现高热,死亡率为40.35％（642／1591）;3个种猪场的待产母猪群发生繁殖障碍,流产率为8．11％（38／469）;成年猪群发病率为24．47％（162／662）,死亡率为4．35％（30／662）;感染猪群PRRS血清抗体平均阳性率为28.12％（45／160）。对病死猪病料进行PRRS病原核酸鉴定,其平均检出率为84．44％（38／45）,变异毒株试剂盒检测显示,11个临床发病猪场病例是由变异毒株引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征。     

新城疫病毒检测技术研究进展

新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病。本病发病急,致死率高,是严重危害养禽业的重要疾病之一。本文从病毒的分离与鉴定、电镜技术、血清学方法以及分子生物学诊断技术4个方面介绍了新城疫病毒的检测技术,为今后兽医临床上检测新城疫病毒提供一定的参考。     

一例鸡马立克氏病的病原学诊断

为确诊贵州省福泉市某养殖场鸡群死亡病因,采集病鸡的组织病料进行细菌分离培养,同时采用普通PCR和荧光定量PCR方法对组织病料进行相关病原核酸检测。结果:病鸡组织中未分离出细菌;病原核酸检测显示,马立克氏病病毒阳性,新城疫病毒、禽流感病毒、鸡滑液囊支原体均呈阴性。结论:确诊病例为马立克氏病病毒感染。     

绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒的构建及对小鼠细胞免疫应答的影响

为探究绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,Mo）pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒对小鼠细胞免疫应答影响,本试验构建了绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒。用已构建的pMD19T-P30和pMD19-Hsp70质粒为模板,采用基因定点突变（SDM）原理设计引物,应用SOE-PCR扩增目的基因片段,并将其定向克隆至表达载体pcDNA3.1（+）,构建重组质粒pcDNA 3.1（+）-TBP30和融合重组质pcDNA3.1（+）-TBP30-Hsp70。使用pcDNA3.1-TBP30、pcDNA3.1-TBP30-Hsp70、pcDNA3.1（+）和Elution Buffer对小鼠进行免疫,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、IL-4、干扰素-γ（INF-γ）分泌水平。结果显示,pcDNA3.1-TBP30-Hsp70酶切后可见大小分别约为1 413 bp的目的基因片段和5 400 bp的载体条带。与空白对照组和pcDNA3.1（+）组相比,免疫重组质粒组均可引起小鼠血清中细胞因子INF-γ、IL-2和IL-4分泌水平的增强,与空白对照组和pcDNA3.1（+）组相比差异显著或极显著（P<0.05;P<0.01）;而空白对照组和空质粒组之间差异不显著（P>0.05）;免疫pcDNA3.1-TBP30和pcDNA3.1-TBP30-Hsp70组小鼠血清IL-2、INF-γ和IL-4终分泌量增加,表明重组质粒组可刺激小鼠血清中IL-2、INF-γ和IL-4的变化,并且在时间上都呈现出先增多后减少的规律。本试验结果表明,重组质粒pcDNA3.1（+）-TBP30-Hsp70免疫小鼠后,IL-2和INF-γ分泌水平的升高,增强了机体的细胞免疫功能,进而调节机体细胞免疫影响T细胞和巨噬细胞的分泌,从而提高机体细胞免疫能力;IL-4分泌水平升高,促进机体Th2向Th1分化,维持Th1的优势状态,增强了机体的细胞免疫功能。本试验结果为绵羊肺炎支原体基因工程疫苗的研制提供了参考依据。     

山羊痘病毒的分离与鉴定

对贵州省2002年以来发生的疑似山羊痘病例样品进行了病毒的分离与鉴定。取山羊痘病羊的皮肤痘疹和水疱作待检病料,接种BHK-21传代细胞盲传3代后,出现了明显的、规律的细胞病变(CPE),病毒细胞培养物在F4代以后,能与山羊痘标准阳性血清在琼脂扩散试验中出现白色沉淀线,而与正常细胞的培养物及PBS不出现沉淀线;参照GenBank上山羊痘病毒P32基因序列,设计了1对特异性引物,对现场分离毒株进行PCR扩增,可扩增出963bp特异性的DNA条带。用待检病料感染的BHK-21细胞培养物接种9日龄鸡胚绒毛尿囊膜,随着传代次数的增加,痘斑病变的出现率从13.3%～20%上升至33.3%～40%;用山羊痘病变皮肤、鸡胚绒毛尿囊膜和感染细胞进行超薄切片,在电子显微镜下可以观察到典型的山羊痘病毒粒子。