丝状支原体山羊亚种LppA蛋白N末端基因真核表达载体构建及小鼠免疫效果分析

基于丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)贵州株的LppA蛋白N末端基因,构建真核重组表达质粒pVAX1-LppA,并对免疫效果进行分析,为防控羊支原体肺炎提供新思路.以构建的真核重组表达质粒pVAX1-LppA(50、100、150 μg)、pVAX1空载体、无菌...     

鸡传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、鸭源鸡杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省六盘水市某养殖场蛋鸡群发病死亡的原因,采集病料进行新城疫病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体、滑液囊支原体核酸检测,以及细菌分离培养、鉴定和药敏试验。结果:(1)鸡传染性喉气管炎PCR试验扩增出大小为537 bp目的基因条带,鸡毒支原体PCR试验扩增出大小为636 bp目的基因条带,呈阳性;其余病毒核酸检测均呈阴性。(2)分离菌在血液琼脂培养基上生长呈白色半透明状、可溶血的小菌落,经革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌,分子生物学鉴定为鸭源鸡杆菌;对硫酸安普霉素、氟本尼考、延胡索酸泰妙菌素高度敏感,对硫酸粘菌素、盐酸多西环素、替米考星中度敏感,对酒石酸泰乐菌素低度敏感,对盐酸大观霉素、盐酸林可霉素、磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林耐药。结论:确诊病例为鸡毒支原体、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭源鸡杆菌混合感染。     

贵州省畜禽源葡萄球菌和链球菌快速鉴定双重PCR方法的建立及应用

为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应条件优化,筛选出最佳引物浓度和退火温度;应用该方法对其他73株革兰氏阳性临床分离细菌进行检测,评价该方法的特异性;将培养的葡萄球菌和链球菌倍比稀释计数后鉴定检测方法的敏感性;应用该检测方法对贵州省部分畜禽葡萄球菌和链球菌临床分离样本进行检测。结果显示,所建立的方法最佳引物添加量均为1μL,最佳退火温度为56℃;其他73株供试菌株检测结果均无扩增条带出现,所建双重PCR方法具有较好的特异性;敏感性试验结果显示,葡萄球菌和链球菌敏感度分别达1.50 ng/μL和1.44 pg/μL;临床样本复检结果显示,73株临床分离细菌中葡萄球菌40株(54.79%)、链球菌33株(45.21%),与传统细菌分离鉴定方法的符合率为97.26%。本试验建立了一种特异、敏感和快速鉴定贵州省畜禽葡萄球菌和链球菌病原的双重PCR方法,为临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效技术。     

绵羊肺炎支原体GZ-WN株感染不同品种羊的组织病变与病原核酸载量差异的研究

为探究绵羊肺炎支原体(Mo)致不同品种羊感染及病原核酸载量的差异,本研究利用Mo贵州威宁(GZ-WN)株分别感染5个品种羊,感染后死亡或迫杀后观察各组织的剖检病变,经荧光定量PCR检测各组织Mo的核酸载量,统计分析相同品种羊不同组织中Mo的核酸载量及不同品种羊相同组织中的核酸载量.结果显示,Mo可引起5个品种羊感染,死...     

原鸡传染性法氏囊病的诊断与免疫监测

原鸡又名茶花鸡,是现代鸡的祖先,属于国家二级保护动物,现主要分布在云南、海南、广东、广西等热带和亚热带地区。贵阳市某特种养殖场从云南省引进原鸡品种,自繁自养至23只。2006年7月,30日龄的原鸡群突然发病,采用抗生素对症治疗以后,病情有所缓解,但最终还是发生衰竭死亡3只,     

贵州省种猪场5种传染病的血清学调查分析

近年来,贵州省一些种猪场出现了一种以母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道症状及生长发育不良为主要临床表现的疫病,严重影响了养猪业的健康发展.研究资料表明,引起上述症状的病毒性传染病主要有猪瘟(hog cholera,HC)、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、猪伪狂犬病(pseudorabies, PR)、猪细小病毒病(porcine parvovirus infection,PP)和猪圆环病毒病(porcine circovirus infection,PC)等.     

安卡拉病毒贵州分离株Fiber2基因的克隆及序列分析

Fiber2蛋白是禽腺病毒血清4型(FAdV-4,又称安卡拉病毒)重要的免疫原蛋白,为深入了解FAdV-4贵州株Fiber2基因的遗传变异情况,本研究利用PCR技术扩增FAdV-4贵州晴隆株(GZ-QL)Fiber2基因,胶回收后将其连接至pMD19-T载体,转化入DH5α筛选阳性克隆质粒,经质粒PCR及双酶切鉴定后进行DNA测序,然后对测序结果进行生物信息学分析。结果显示,GZ-QL株Fiber2基因全长为1 440 bp,与四川分离的SCnj1601强毒株、北京分离的NIVD2强毒株Fiber2基因核苷酸同源性均为100.0%,与FAdV-4经典ON1株Fiber2基因核苷酸同源性为95.9%,两者位于相同进化分支。GZ-QL Fiber2蛋白共有33个氨基酸突变位点,其中,在第11～15位之间有5个氨基酸插入;蛋白质亲水性平均值为-0.031,其二级结构以无规则卷曲为主(占51.8%),无跨膜结构域或信号肽,抗原表位分布均匀,预测有8个优势抗原表位区域,且集中于N端。以上结果表明,FAdV-4贵州株GZ-QL Fiber2蛋白在禽腺病毒血清4型内相对保守且抗原性良好,具备成为优势...     

绵羊肺炎支原体贵州株P113基因的克隆与生物信息学分析

为获得绵羊肺炎支原体贵州株P113基因生物信息学特征,应用DNAStar、Mega 5.0、Protparam、Protscale、IEBD等工具对其(GZ-QX1株)P113蛋白特性、结构和功能进行预测分析。结果显示,绵羊肺炎支原体GZ-QX1株P113基因序列大小为3 240bp,编码1 079个氨基酸,与绵羊肺炎支原体Y98标准株、四川SC01株、猪肺炎支原体P97、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊亚种的核苷酸序列同源性分别为99.9%、81.9%、60.4%、3.9%和5.2%。P113蛋白是分子质量约119ku的碱性蛋白,具有较多优势抗原表位;蛋白结构分析显示,P113蛋白无跨膜结构,有9个N糖基化位点,59个丝氨酸、16个苏氨酸的磷酸化位点,14种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点;蛋白功能分析认为,P113可能是某信号传导通路的信号分子,也是一种具有良好抗原性的结构蛋白。     

Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为储备禽腺病毒病疫情防控技术,应用DNAStar软件分析GenBank中Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)全基因序列,选取Hexon基因的保守区域设计合成1对PCR引物和1条TaqMan探针,建立FAdV-4 FQ-PCR检测方法,得到相应的标准曲线,并应用该方法对临床病例和人工感染动物进行FAdV-4核酸检测。结果表明,建立的FAdV-4 FQ-PCR方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性。     

基于山羊痘病毒P32蛋白间接ELISA方法的建立

通过Ni柱亲和层析和G-100层析技术对真核表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE分析GPVP32蛋白纯化效果;应用琼脂扩散试验检测纯化蛋白的抗原反应性,并以纯化蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法。结果显示,从真核表达产物中获得了纯化的GPVP32蛋白,琼脂扩散试验显示纯化的GPVP32蛋白具有良好的抗原反应性;基于纯化蛋白建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。结果表明,本试验建立的间接ELISA方法可用于山羊痘流行病学的调查和血清抗体水平的监测,为山羊痘的防控提供了有效技术。