基于测序技术的贵州主要品种羊TLR2基因多态性分析

为了解贵州省不同品种羊TLR2基因序列的多态性特征,本研究以不同品种羊血液DNA为模板,对TLR2基因完整ORF进行PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,5种羊TLR2基因扩增长度均为2 355 bp。对贵州黑山羊、黔北麻羊、贵州白山羊、波尔山羊和湖羊5种羊TLR2基因进行种内比对结果显示,贵州黑山羊、黔北麻羊、波尔山羊种内TLR2基因序列保守,贵州白山羊种内A1732T位点存在多态性,湖羊种内在G1133A、T1162G、A1949G等位点存在基因多态性;种间比对结果显示,4种山羊有16个核苷酸位点存在多态性,其中有10个错义突变。4种山羊与湖羊进行比对结果显示,湖羊存在较多的多态性位点,其中有11处位点的差异导致氨基酸的变化。蛋白质结构预测分析显示,不同品种羊TLR2基因呈现的错义突变位点引起了其蛋白质二级结构和三级结构的变化,提示可能存在TLR2参与免疫相关信号通路水平的变化。本研究填补了贵州地方山羊品种TLR2基因多态性空白,为探究TLR多态性与羊疫病易感性关系提供基础研究资料。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省都匀市某养殖场的猪死亡病因,采集病死猪病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型核酸检测,细菌分离鉴定及药物敏感试验。结果:猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测和猪圆环病毒2型PCR检测核酸均为阳性,其余病毒核酸检测均为阴性。细菌分离培养表明存在细菌感染,分子生物学鉴定为奇异变形杆菌;分离菌对硫酸安普霉素、硫酸粘菌素、盐酸大观霉素+盐酸林可霉素、氟苯尼考较敏感,对多种药物产生耐药。结论:确诊病例为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染。     

猪繁殖与呼吸综合征综合防控技术的研究

为探索猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的综合防控技术,采用现场调查、血清学监测和病原学诊断等方法,对贵州省2007年3月至2009年10月采集的PRRS样本进行了血清学流行病学调查和病原学诊断,对比了不同疫苗免疫效果,测定了仔猪母源抗体的消长规律,确定了不同免疫/感染状态下仔猪首免日龄,结果表明,PRRS易于7~10月份流行;仔猪和能繁母猪的感染率较高,达到96.15%和74.73%;弱毒疫苗免疫效果优于灭活疫苗;哺乳仔猪母源抗体水平随着日龄增长逐渐降低,因此免疫PRRSV母猪所产仔猪的首免日龄定为17~20日龄;曾感染PRRSV母猪所产仔猪首免日龄定为30~34日龄。同时调查了猪场中蚊蝇携带PRRSV情况,初步证明猪场中的蚊蝇均可携带PRRSV;通过消毒试验对比进行了综合防治措施效果初探,取得理想结果。为贵州省PRRS综合防控措施的实施和推广提供了技术支撑。     

山羊痘病毒ITR基因片段的克隆与序列分析

应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y和B株ITR基因片段,插入pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组载体经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上8株羊痘病毒相应序列进行同源性分析。结果经PCR扩增,4株病毒均可得到一条均一的DNA片段,该片段可被内切酶AluⅠ特异酶切,而且该PCR的DNA模板最小检出量为24.40pg。经测序,该基因片段长度为289bp;序列比较发现,4株病毒ITR片段与GenBank上2株山羊痘病毒的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100%,与3株绵羊痘病毒分别为98.2%和96.5%,与3株牛疙瘩皮肤病病毒为98.2%～99.3%和96.5%～97.7%。这表明ITR基因片段在羊痘病毒属中较为保守,可以针对ITR基因建立羊痘病毒的PCR检测方法。     

山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立

为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green Ⅰ荧光PCR万法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物.以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立燕优化SYBR Green Ⅰ模式荧光PCR检测GPV的TTR基因的方法,并与普通PCR万法进行敏感性比较.结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green Ⅰ荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速.     

丝状支原体山羊亚种LppA蛋白N末端基因真核表达载体构建及小鼠免疫效果分析

基于丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)贵州株的LppA蛋白N末端基因,构建真核重组表达质粒pVAX1-LppA,并对免疫效果进行分析,为防控羊支原体肺炎提供新思路.以构建的真核重组表达质粒pVAX1-LppA(50、100、150 μg)、pVAX1空载体、无菌...     

绵羊肺炎支原体GZ-WN株感染不同品种羊的组织病变与病原核酸载量差异的研究

为探究绵羊肺炎支原体(Mo)致不同品种羊感染及病原核酸载量的差异,本研究利用Mo贵州威宁(GZ-WN)株分别感染5个品种羊,感染后死亡或迫杀后观察各组织的剖检病变,经荧光定量PCR检测各组织Mo的核酸载量,统计分析相同品种羊不同组织中Mo的核酸载量及不同品种羊相同组织中的核酸载量.结果显示,Mo可引起5个品种羊感染,死...     

绵羊肺炎支原体贵州株P113基因的克隆与生物信息学分析

为获得绵羊肺炎支原体贵州株P113基因生物信息学特征,应用DNAStar、Mega 5.0、Protparam、Protscale、IEBD等工具对其(GZ-QX1株)P113蛋白特性、结构和功能进行预测分析。结果显示,绵羊肺炎支原体GZ-QX1株P113基因序列大小为3 240bp,编码1 079个氨基酸,与绵羊肺炎支原体Y98标准株、四川SC01株、猪肺炎支原体P97、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊亚种的核苷酸序列同源性分别为99.9%、81.9%、60.4%、3.9%和5.2%。P113蛋白是分子质量约119ku的碱性蛋白,具有较多优势抗原表位;蛋白结构分析显示,P113蛋白无跨膜结构,有9个N糖基化位点,59个丝氨酸、16个苏氨酸的磷酸化位点,14种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点;蛋白功能分析认为,P113可能是某信号传导通路的信号分子,也是一种具有良好抗原性的结构蛋白。     

贵州省几种猪繁殖障碍性疫病的血清学调查

采用乳胶凝集试验和间接ELISA试验,分别对贵州省部分地区种猪场和规模场猪群进行猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒及猪Ⅱ型圆环病毒抗体水平检测。结果:免疫猪群中猪细小病毒感染、猪伪狂犬病及猪繁殖障碍与呼吸综合征抗体阳性率分别为81.6%(124/152)、84.0%(221/263)和62.7%(406/648);非免疫猪群中猪细小病毒感染、猪伪狂犬病、猪繁殖障碍与呼吸综合征及猪Ⅱ型圆环病毒感染抗体阳性率分别为17.6%(79/449)、13.8%(61/442)、5.4%(19/352)和15.9%(83/519)。表明,猪细小病毒感染、猪伪狂犬病免疫效果比较理想,贵州省猪群中可能存在上述4种疫病的感染,应当引起养猪业的高度重视。     

Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为储备禽腺病毒病疫情防控技术,应用DNAStar软件分析GenBank中Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)全基因序列,选取Hexon基因的保守区域设计合成1对PCR引物和1条TaqMan探针,建立FAdV-4 FQ-PCR检测方法,得到相应的标准曲线,并应用该方法对临床病例和人工感染动物进行FAdV-4核酸检测。结果表明,建立的FAdV-4 FQ-PCR方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性。