基于PEDV ORF3基因的强弱毒株鉴别方法的建立及初步应用

为了建立一种快速鉴别PEDV强毒株和弱毒株的RT-PCR方法,针对PEDV ORF3基因设计一对引物,优化其反应体系和退火温度,并测试其特异性和敏感性。结果显示,在退火温度55.2℃,上、下游引物各0.5μL时PCR扩增效果最理想。特异性试验结果显示本方法对9种常见猪病病原的核酸模板均不产生扩增条带;敏感性试验显示该方法的检测下限为T-ORF3_IS 272拷贝/μL和T-ORF3_VC 14.4拷贝/μL。将本试验建立的RT-PCR法与已建立的双重RT-PCR方法进行比较,结果显示两种方法符合率为99.2%,且本法的实际检出率更高。对120份临床样本检测结果显示,PEDV强弱毒株的阳性率分别为87.18%和84.21%,其中9份样本中同时检出2种PEDV毒株,但并未对检测方法的准确性造成影响。建立了一种基于ORF3基因的RT-PCR检测法,该方法特异性强、灵敏度高,可准确区分PEDV野毒株和弱毒株。     

鸡冷诱导RNA结合蛋白基因序列分析及组织表达

为研究鸡冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)基因的结构特征和组织定量分布情况,根据GenBank中原鸡CIRP基因(NM-001031347)的编码区序列自行设计引物,从健康雏鸡脾脏中扩增青脚麻羽鸡CIRP基因的编码区(CDS)并进行生物信息学分析;设计引物建立实时荧光定量RT-PCR,检测CIRP mRNA在雏鸡各组织器官中的分布及相对表达水平。结果显示,鸡CIRP基因CDS区全长573bp,编码190个氨基酸,其氨基端包含一个RNA结合域,羧基端富含RGG重复序列,推导的多肽链羧基端比鸭、斑胸草雀及哺乳动物要多18个氨基酸;CIRP基因在鸡各被检组织器官中均有表达,相对表达水平由低到高分别为法氏囊、肺脏、胰腺、胸腺、脾脏、睾丸、盲肠扁桃体、心脏、脑、肾脏、哈德氏腺、肝脏。本研究为进一步探讨鸡CIRP基因的遗传进化及其在病原感染中的作用提供了参考。     

犊牦牛腹泻诊断

正腹泻是犊牛的常发疾病,其既可由细菌、病毒、寄生虫等引起,也可由营养因素、环境因素引发,一般病原微生物感染是引发犊牛腹泻的主要原因。腹泻严重影响犊牛成活率,幸存犊牛的生长发育和生产性能也会受到影响。1临床症状某养殖户的4头犊牦牛发生以急性腹泻为特征的疾病。病牛精神沉郁、被毛粗糙、呼吸短促,水样腹泻,粪便呈灰白色,其中3头牛的粪便混有鲜血。2实验室检测2.1粪便处理及核酸提取采集病牛粪便按     

免疫鸡群新城疫强毒感染及其与HI抗体的相关性研究

为调查新城疫强毒(vNDV)在免疫鸡群中的感染情况及其与抗ND抗体效价的相关性,用自行建立的检测vNDV的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)对采自川、渝两地36个免疫鸡群的360份肛门棉拭子进行检测,同时采血测定其血凝抑制抗体效价.结果共检出5个vNDV 阳性鸡群,每个阳性鸡群检出1例阳性样本,经病毒分离鉴定证实为NDV;36个受检鸡群HI抗体平均效价在4.5～10.1,标准偏差(SD)在0.70～3.19,变异系数在9.5%～44.3%.当SD大于2.0时,vNDV感染鸡群阳性率为50%,6(5/10),当CV大于32%6时,vNDV感染鸡群阳性率为62.5%(5/8);vNDV感染个体HI抗体效价分别为210、29,28,26,23;阳性样本RT-PCR产物经测序分析证实为vNDV F基因序列,发育进化分析显示,2株vNDV属基因Ⅶ型,3株属基因Ⅸ型.研究结果表明,RRT-PCR适合vNDV感染及传播的监测和分子流行病学调查;免疫鸡群是否感染vNDV可能与个体HI抗体水平高低无关,而与群体HI抗体离散度有关,SD和CV值有助于判定鸡群感染vNDV的风险.     

鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响

为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响，进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明，鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE^＋细胞百分数；②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使用IL-2与否对巨噬细胞的吞噬功能没有明显的影响；⑧人工感染法氏囊病的防治试验。在攻毒前后注射IL-2，均可明显降低发病率和死亡率。本研究结果表明，鸡IL-2可明显提高特异性免疫应答能力，与疫苗共同注射可作为佐剂提高疫苗的免疫原性，对法氏囊等病毒性疾病具有一定的防治作用。     

犬腺病毒2型E3基因自然缺失毒株的分离鉴定及其致病性

犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)是重要的犬呼吸道病原，本试验旨在调查CAV-2在川渝部分地区的流行情况及其分离毒株致病性。采用检测CAV-2的特异性PCR方法，对2021—2022年采集自川渝部分地区的121份患呼吸道疾病的犬鼻咽拭子进行检测，分离流行毒株并研究其基因组特征及致病性。结果显示：CAV-2的阳性率为29.8%,值得注意的是，69.4%的阳性样本在E3基因存在9个核苷酸连续缺失(1 035—1 043 nt),导致4个氨基酸缺失(345—348 aa)。成功分离出1株E3基因自然缺失毒株，噬斑纯化后的细胞半数感染值为10^-9.46TCID₅₀·0.1 mL^-1;该毒株经口鼻感染幼犬后，幼犬出现体温升高、打喷嚏、流鼻涕及咳嗽等典型呼吸道症状。该分离毒株基因组全长31 786 bp,与GenBank中CAV-2基因组的核苷酸相似性为98.8%～98.9%。与已知的CAV-2基因组相比，本研究分离毒株除了E3基因的独特突变外，还在Fiber、Hexon和E1A等蛋白有独特...     

双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株

本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。     

鸭大肠杆菌脑炎诊断及防治报告

对成都市郊区5个商品肉鸭场的以神经症状为特征的发病鸭群进行了实验室诊断,确诊为大肠杆菌性脑炎.比对24种抗菌药物的药敏试验结果显示,该分离菌对阿米卡星高度敏感,对其它抗菌药物均存在不同程度的耐药性,而且还存在多重耐药现象.选择敏感药物有效地控制了本病在发病鸭场的流行.     

安宁河流域鸭瘟、鸭霍乱综合防制研究──免疫鸭体内巴氏杆菌抗体消长规律

以巴氏杆菌Ａ群菌苗免疫建昌鸭后,测定其抗体消长规律,对攻毒前后抗体进行比较,并用血凝抑制试验鉴别其抗体类型。结果表明：（１）注苗后５～６ｄ抗体就可达４个ｌｏｇ２及其以上,２９日龄鸭免疫后４０ｄ内,抗体在４个ｌｏｇ２及其以上,５０ｄ时不足４个ｌｏｇ２;３月龄鸭免疫后１１３ｄ内,抗体在４个ｌｏｇ２及其以上,１４６ｄ时为３．８１个ｌｏｇ２,１６５ｄ为２．４１个ｌｏｇ２;（２）攻毒后１５ｄ,抗体普遍比攻毒前下降约１个滴度,但攻毒后３０ｄ抗体比攻毒前高１～２个滴度。当抗体达４个ｌｏｇ２时,具有完全保护性,能抵抗人工感染和自然感染;（３）巴氏杆菌抗体以ＩｇＭ为主（ＩｇＧ甚微）,注苗后的回忆反应很不明显,这可能是巴氏杆菌苗免疫期较短的重要原因。     

Study on histopathology of nuclear polyhedrosis virus ofZethenia rufescentaria Motsch

IntroductionZOtheni8ruf8scent8rtaMotsch.isoneofthemainpestsinlarchpIantationinNortheastChina.Inrecentyears,thepestcauseddisasterintheforestareaofHeilongjiangProvince.TheneedlesofIarchinsomeareawerebeeneatenupcompIetelyandthegrowthoflarchpIantationwasseriousIyaffected.Thenu-clearpoIyhedrosisvirusofZruf8scent8rinMotsch(ZrNPV)wasobtainedfromtheIarvaeofZruf6s-cent8finMotsch,in1991.ZrNPVwasmainpathogenOftheIarvaeofZrufescentBfisMotsch.TOxicitymeasuringindoorsandinvestigationinfieldprov…