黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持.[方法]针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性.[结果]TaqMan-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:Premix Ex TaqTM 10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL.扩增程序:95℃预变性20 s;95℃10 s,60℃20 s,进行40个循环.该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37%~1.18%,均小于1.20%.采用建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株.[结论]针对mcr-1基因建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持.     

适用于夜晚环境下多个车牌的定位算法

提出了一种适用于夜晚环境下多个车牌的定位算法。该算法首先利用Retinex图像增强算法,突出在夜晚环境下获取的车辆彩色图像中的车牌目标,然后用提出的图像背景消除算法粗略地提取目标车牌,进而利用K-means聚类算法精确地提取目标车牌区域,并用数学形态学算法消除目标车牌二值图像中的噪声,最后利用Canny算法检测车牌边缘,检测结果叠加在原始车辆彩色图像上完成车牌的定位。实验结果表明,该算法对夜晚环境下的多个车牌定位准确度可达86.5%,证明该算法在此环境下可行、有效。     

毛竹阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的基因克隆、原核表达及纯化

毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸异构酶（PeKdsD）是2-酮-3-脱氧辛糖酸（KDO）生物合成途径的第1个关键酶。采用逆转录实时聚合酶链式反应（qRT-PCR）克隆得到毛竹KdsD基因。该基因cDNA全长1 038 bp,编码346个氨基酸;对不同物种来源的KdsD氨基酸序列进行比对和系统进化树分析。结果表明:毛竹的KdsD与玉米Zea mays等植物来源的KdsD有很高的序列一致性,而与微生物来源的KdsD序列一致性较低。毛竹不同组织实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）结果表明:PeKdsD基因在叶中表达量远远高于其他组织。在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KdsD的可溶性高表达蛋白,将大量表达的重组蛋白经过Ni-NTA亲和层析和分子筛层析（SEC）进行纯化,发现KdsD在溶液（30 mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠）中以多种聚体的形式存在;酶学性质测定的结果表明:毛竹KdsD酶最适pH值为pH 8.5,最适作用温度为37℃。此结果为后期研究植物KdsD蛋白的结构与功能奠定了基础。图7参17     

浅谈黄龙山林业局油松容器苗造林技术

经过多年来造林实践,油松容器苗造林具有起苗快、无缓苗期、苗木质量高、造林成活率高等优势,已成为黄龙山林区油松造林的一项成熟造林技术,分享以供大家参考。     

奶牛产犊后子宫输液处理可提高冷配受胎率

将60头7周岁以内的经产母牛随机分成药物处理组和常规组。药物处理组在牛产后7～14天内向子宫灌注青、链霉素,常规组不做任何药物处理。结果表明,药物处理组比常规处理组,产后第1次发情提前10～20天;第一情期受胎率提高13.33％。     

广东省畜牧业结构调整调研报告

按照广东省农业厅的统一部署,我办于2003年第3季度对全省畜牧业结构调整开展了调研活动,现将调研情况综合报告如下。     

滤纸法测定饲用纤维素酶酶活的研究

本文采用滤纸法研究了影响饲用纤维素酶酶活测定的因素.结果表明:在37℃、pH 5.5条件下,滤纸法测定纤维素酶酶活的适宜波长是540 nm,DNS添加量为2 mL,沸水浴显色时间为5 min,显色后吸光值在15～90min内保持稳定.     

关于统计工作在企业中重要性的思考

统计工作是实行科学管理,监督企业活动的重要手段,是企业制定政策和计划的主要依据。然而,目前企业统计工作却存在一些问题,随着现代企业制度的建立和现代化管理的发展,我们必须提高统计人员     

陕西省地方小麦品种多酚氧化酶基因等位变异检测及分布

小麦籽粒中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)基因活性与面条等面制品颜色褐变密切相关,降低籽粒PPO活性是小麦品质改良的重要目标.利用PPO基因的功能标记PPO18和PPO29,对115份陕西省地方冬小麦品种(系)进行2A和2D染色体上PPO等位基因印Ppo-A 1a、Ppo-A1b和Ppo-D1b检测,并分析了品种等位变异的分布特点.结果显示:PPO18在等位基因Ppo-A1a(高PPO)和Ppo-A1b(低PPO)中分别扩增685 bp和876 bp的片段,PP029在Ppo-D1b(高PPO)等位基因中扩增490bp的片段.115份品种(系)中Ppo-A1a、Ppo-A1b6和Ppo-D1b等位基因的频率分别为37.39%、60.00%和45.22%.在陕西省所培育和引进的冬小麦品种(系)中,地方当家品种中最低PPO活性基因分布较多,而引进的冬小麦品种中高PPO活性基因分布较多.     

桔梗种子生物学特性研究概况

综述了桔梗种子的形态特征、寿命、休眠、成熟度、萌发和播前处理等生物学特性。