利用Cre/lox定位重组系统获得无选择标记GFP转基因烟草

【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性,以绿色荧光蛋白GFP为目的基因,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草后获得抗除草剂Basta的GFP转基因植株。GFP转基因植株叶盘二次转化导入重组酶Cre基因后,实现与GFP基因连锁的Bar基因表达盒剔除,剔除Bar基因的植株开花后自交使重组酶Cre基因分离,获得无选择标记的GFP转基因烟草。【结果】将含Bar基因表达盒以及GFP基因表达盒的植物表达载体转化烟草Wisconsin 38后获得了抗除草剂Basta以及GFP荧光表达的转基因植株。随机抽取5株转基因植株二次转化导入Cre基因,所获得的再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,绝大多数单株对应叶盘在含8 mg•L-1 PPT（phosphinothricin）的筛选培养基上无法再生死亡,删除效率在76%～100%。对Bar基因删除后区域片段进行克隆测序分析显示,Bar基因表达盒已经被精确删除。Bar基因删除植株开花后自交,获得的自交后代进行NPTⅡ抗性检测,NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有GFP基因。【结论】利用Cre/lox系统获得烟草无选择标记的转基因植物是稳定可行的,可广泛应用于其它无选择标记转基因植物的培育。     

植物花青素生物合成转录调控研究进展

花青素是高等植物中发现的一种次生代谢物,能够决定花和果实的颜色,保护植物免受各种生物和非生物胁迫损伤。花青素生物合成由一系列结构基因编码的酶催化完成,属于类黄酮途径一个特异分支,其合成结构基因的表达受由MYB、bHLH和WD40 3类转录因子组成的MBW（MYB-bHLH-WD40）转录复合体协同调控。文章主要就MYB、bHLH和WD40 3类转录因子在调节结构基因表达和花青素合成中的功能和作用进行综述。     

应用RAPD标记鉴定结球甘蓝品种

利用RAPD标记对17个结球甘蓝品种进行了分析.结果显示较低浓度基因组DNA、高浓度Taq酶及一致的Mg2+浓度,有利于RAPD结果的稳定.所有品种经12个引物扩增后,发现利用其中4个引物在17个品种间所扩增出的多态性标记可将全部品种鉴别.17个品种的遗传多样性分析显示,秋冬甘蓝品种内的遗传差异较春甘蓝品种内更大.因此,为保持结球甘蓝多样性,将更多的遗传资源用于春甘蓝品种选育是必要的.     

热胁迫下甘蓝细胞膜叶绿体线粒体超微结构研究

研究了热胁迫下,不同抗热性甘蓝叶片细胞的细胞膜、叶绿体及线粒体结构。结果表明,抗热性材料在细胞膜及叶绿体结构上较热敏材料更完整,可作为抗热性鉴定标准之一;材料间在线粒体结构上则未发现有明显差异。     

胭脂萝卜种子纯度的RAPD检测研究

用80个随机引物对胭脂萝卜及杂株（花心萝卜和白心萝卜）的总DNA进行了RAPD分析,发现引物S50可在胭脂萝卜和杂株（花心萝卜和白心萝卜）的RAPD图谱中形成多态性差异,可用于胭脂萝卜种子的纯度检测。对1份胭脂萝卜种子进行RAPD检测,其结果与田间形态鉴定结果一致。     

春甘蓝新品种西园11号的选育

西园11号是以优良自交不亲和系2004G为母本,以自交不亲和系2004I为父本配制的春甘蓝一代杂种.该品种全生育期165～185 d(天),叶球高扁圆形,叶球紧实,叶质脆嫩,商品性好,单球质量1.5 kg左右,球叶VC含量344 mg·kg-1(FW),纤维素5.8 g·kg-1(FW),可溶性固形物5.1%,耐先期抽薹,一般产量为3 500 kg·(667m2)-1 左右.适宜重庆、四川等地区作春甘蓝栽培.     

胭脂萝卜及种子繁殖技术

胭脂萝卜为十字花科萝卜属二年生蔬菜作物，是重庆市的一个地方品种。具有成熟较早(播种至收获70～90d)，抽苔晚不易空心，收获时间弹性大；耐寒、耐热、耐贮运，抗病力强；肉质根皮紫肉红色美，组织致密，质地脆嫩，辣味小，品质好；天然红色素的含量、品质、溶解性比其它红萝卜好，色价比国家标准高10倍以上，各项理化指标均符合(萝卜红国家标准)，是提取天然红色素的好原料等特点，深受消费者喜爱。胭脂萝卜除提取天然红色素外，主要用于做泡菜、酱腌菜及筵席雕花、配色的工艺菜。     

结球甘蓝下胚轴高效植株再生系统的研究

研究不同取材时期以及不同浓度BA NAA的组合和不同浓度AgNO3对结球甘蓝(Brassica olerace var capitata L．)下胚轴的不定芽分化率的影响,建立了结球甘蓝下胚轴高效植株再生系统,离体培养再生频率达到76％。最佳取材时期为6、7日苗龄,BA、NAA、AgNO3的最佳浓度配比为BA5．0mg／L NAA1．0mg/L AgNO37．5mg／L。     

TA29-Barnase 转基因雄性不育芥菜的获得

将烟草TA29 花药绒毡层特异启动子驱动下的核糖核酸酶Barnase 基因,利用农杆菌介导的
方法导入渝丰榨菜幼苗下胚轴中,获得了彻底败育的雄性不育植株。细胞学观察结果显示：转基因芥菜植
株的花药绒毡层细胞提前降解,花粉母细胞退化,成熟花药中无正常花粉粒产生。转基因芥菜植株除了花
药瘦小、开花后无花粉散出、自交不能正常结籽外,还出现了花朵变小、雌蕊变短、种荚变短、结籽量下
降的现象。     

结球甘蓝西园4号种子纯度的SSR鉴定

利用SSR分子标记技术对结球甘蓝西园4号及其亲本的DNA进行扩增,从90对SSR引物中筛选出1对具有双亲条带差异明显的引物O112-G04,构建了清晰的DNA扩增指纹图谱,并对西园4号种子进行了纯度鉴定,与田间形态学的鉴定结果高度一致,种子纯度均为96.7%.结果表明,利用这对引物对结球甘蓝西园4号种子的纯度鉴定是可行的.