传染性法氏囊病病毒DNA疫苗的免疫原性研究

 将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DNA疫苗以 2 0 0 μg的剂量经腿肌和皮下结合途径首免 14日龄SPF鸡 ,2 8日龄以相同的剂量二免 ,二免后 14d攻击IBDV标准强毒BC6 / 85株。结果表明 ,含A节段或多聚蛋白基因的表达载体均能诱导较高水平的中和抗体并能提供对强毒的免疫保护 ,多聚蛋白基因构建成的DNA疫苗与弱毒苗B87的免疫效果相当 ;编码VP2基因的DNA疫苗仅能诱导很低水平的中和抗体 ,几乎不能提供免疫保护 ;以 pCI为表达载体的免疫效果优于pcDNA3;源于ZJ2 0 0 0株基因构建成的DNA疫苗诱导的免疫反应优于JD1株 ,提示DNA疫苗的免疫效果与VP2蛋白的构象、表达载体的调控元件和毒株差异等因素有关。     

高校兽医实验室资质认定体系建设与运行分析

高校兽医实验室唯有通过实验室资质认定,才能开展动物检疫、兽医流行病学调查等社会的服务工作,提供具有法律效力与权威性的检测数据。浙江农林大学动物健康检测中心于2015年成为全国高校系统兽医领域首个通过资质认定的第三方检测实验室,其检测范围从最初19项动物疫病检测项目发展到现在145项,年检测量4万项次以上,出具检测报告200余份。依据最新要求及高校实际情况,本文从资质认定体系的建立、试运行、资质认定评审及体系的正式运行等方面,创新性阐述了高校兽医实验室资质认定体系建立与运行的全过程,为计划开展资质认定的高校兽医实验室提供参考。     

猪链球菌ZJ株溶血素基因的克隆和序列分析

猪链球菌ZJ株溶血素（suilysin）基因（sly)用特异引物进行PCR扩增后，采用T-A克隆策略将其克隆至E.Coli DH5a。PCR产物和重组质粒酶切分析表明该基因与已报道的sly基因一致，核苷酸序列分析表明sly基因与P1/7株和1933株的同源性分别为99.6%和99.7%。     

单增李斯特菌plcB缺失株的生物学特性及酵母双杂交诱饵载体构建

为探究单增李斯特菌磷脂酶PlcB在细菌感染过程中的作用及挖掘可能与宿主互作的相关蛋白,本试验利用李斯特菌遗传操作系统构建了 plcB缺失回补株及基于PlcB为诱饵的酵母双杂交系统,并通过体外生长曲线、细胞内增殖试验、空斑形成能力等试验研究PlcB介导的生物学功能;通过酵母双杂交诱饵质粒自激活及毒性试验和诱饵蛋白表达检测...     

单增李斯特菌内化素家族蛋白的研究进展

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种革兰阳性病原菌,是食源性李斯特菌病的病原体,在免疫力低下的人和动物中能够引起高死亡率.该菌致病的关键是其能在非吞噬细胞发生内化作用并在其中存活.内化素家族蛋白(internalins)在单增李斯特菌感染过程中起着至关重要的作用,该族蛋白是一组以...     

传染性法氏囊病病毒浙江分离株(ZJ2000)基因组A节段全长cDNA的克隆和序列分析

以传染性法氏囊病病毒（IBDV）浙江分离株（ZJ2000）基因组RNA为模板，采用Long-accurate RT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了IBDV ZJ2000株基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明，克隆的A节段全长共3259个核苷酸，包括5'、3'端的非编码区（NCRs）和2个部分重叠的开放阅读框（ORF1和ORF2），与参比的血清1型毒株核苷酸序列的同源性高达95．2％－99．2％。二级结构预测表明，在5'-NCRs存在1个大型的茎环发夹结构。ORF2编码145个氨基酸的VP5，与参比毒株的同源性高达98．6％－100％。ORF1编码1012个氨基酸的VP2／VP4／VP3，在氨基酸水平上VP2、VP3、VP4与参比毒株的同源性分别达到94．9％－98．8、96．1％－98．5％、97．1％－99．2％。ZJ2000共有14－38氨基酸的替代，其中特有氨基酸6个，变异大多数集中在VP2高变区，突变率达2．9％－11％。第2个小亲水区内280位氨基酸由S替代了N、290位M替代了L。这2个突变可能与IBDV的抗原性有关。VP2－VP4剪切位点附近511和540位氨基酸的变异可能使ZJ2000株的毒力增强。分子系统进化树分析表明，ZJ2000与欧洲Cu-1株、P2株、CEF94株和中国Harbin株的有关最近，而与欧洲、香港、日本的超强毒株和美国的变异株相对较远。     

沙门氏菌的基因工程减毒以及在DNA疫苗载体中的应用

沙门氏菌是最常见的人畜共患的重要病原菌,引起人和动物肠热症、胃肠炎、败血症等,呈全球性分布.通过基因工程技术对沙门氏菌进行减毒,感染宿主细胞后可在体内长期存活并诱导产生保护性免疫反应.同时,沙门氏菌是一种侵袭性胞内菌,减毒沙门氏菌运载编码有外源基因的真核表达质粒可在体细胞内进行持续表达,诱导产生特异性的体液和细胞免疫应答.因此,减毒沙门氏菌既可作为针对同源抗原的活疫苗,也可作为诱导针对其他病原微生物产生保护性反应DNA疫苗的载体[1].本文综述了沙门氏菌的基因工程减毒以及在DNA疫苗载体中应用方面的最新进展.     

猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立

猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2, PCV2）,是感染猪Sus scrofa domestica的一种单链DNA病毒。建立一种快速、灵敏的检测方法,对于PCV2感染猪的筛选和疾病预防非常重要。根据PCV2 ORF2基因保守区,设计了荧光定量聚合酶链式反应（PCR）引物,利用SYBR Green作为荧光染料建立了一种定量检测PCV2的PCR方法。结果表明:该方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的优点,每微升的最低检测限低至101拷贝DNA。利用该方法对34份PCV2阳性临床样本进行检测,检测符合率为100%,明显高于普通PCR方法的50.0%。因此,本研究建立的PCV2实时荧光定量PCR检测方法为该疾病的预防和控制提供一种有效的检测工具。图4表4参26     

翁芩复方对多杀性巴氏杆菌人工感染雏鸭的保护作用

为了探讨翁芩复方(WQ)对雏鸭感染禽多杀性巴氏杆菌(Pm)的预防效果及其作用,本研究采用肉汤二倍稀释法体外测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);灌胃氟苯尼考(FF)及不同剂量WQ预处理雏鸭7 d后口服感染Pm,通过比较日增质量和成活率评价WQ对Pm感染雏鸭的预防效果,RT-PCR和细菌计数检测Pm入侵和定植肝脏程度,全血细胞计数(CBC)检测血液中血细胞变化,RT-qPCR检测十二指肠白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)、白介素4(IL-4)表达。结果表明：WQ对Pm有明显的体外抑菌效果;WQ干预后雏鸭成活率提高,日增质量提高;WQ组肝脏的Pm数量减少;WQ能显著改善血红蛋白浓度(HGB)和红细胞压积(HCT);WQ降低Pm诱导的IL-10和IL-4水平。因此,WQ可有效预防Pm感染,为临床防控该菌大规模流行提供了技术支撑。     

猪圆环病毒2型巢式PCR检测方法的建立与初步应用

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)给养猪业造成了重大的经济损失,建立经济、快速的检测方法尤为重要。本研究旨在利用巢式PCR技术,建立高灵敏度PCV2检测平台,以加强对猪圆环病毒病的防控。根据PCV2 ORF2基因保守区,设计内、外2对巢式PCR引物,通过优化PCR反应条件,建立巢式PCR检测方法,并对猪场临床样本进行检测。结果显示,本研究建立的巢式PCR检测方法灵敏度高、重复性强,最低检出量为10拷贝/μL,检出率达97.3%。本研究建立的巢式PCR检测方法为快速、高效地检测PCV2以及为猪圆环病毒病的防控提供有力手段。