大麦条纹花叶病毒中国株CP基因克隆分析、原核表达及抗血清制备

 首次用PCR方法,自大麦条纹花叶病毒中国株(BSMV-CH)的RNA₂(GenBank登录号为:AY789694,未报道)中扩增出外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。结果表明BSMV-CH的CP全长597bp,它与BSMV其它株系CP的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93.1%~93.8%和91.4%~92.4%;与同属的早熟禾半潜病毒(PSLV)和剪秋罗环斑病毒(LRSV)的核苷酸同源性分别为53.0%和41.8%,氨基酸同源性分别为48.1%和40.0%。根据大麦病毒属病毒已经报道的CP氨基酸序列绘制系统发育树,分析表明分离的各毒株在进化上存在明显地理位置的相关性。把CP基因亚克隆到GST融合表达载体pEGX-6p-1上,优化IPTG诱导终浓度后,在37℃ IPTG终浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白GST-CP在大肠杆菌BL21中得到了特异表达。12% SDS-PAGE表明,表达产物大小为48.5kDa,主要以包含体形式存在。对蛋白进行定量后,用冰冷的KCl显色,分离表达的蛋白质特异条带制备抗原,免疫家兔得到抗血清,酶联法(enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)测定的抗血清效价为1/6 400。用抗血清对感病大麦和健康大麦进行检测,结果表明抗血清有很高特异性。     

贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5对烟草赤星病菌的拮抗研究

从山西运城盐湖泥中采样获得了贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5,为了确定其固体发酵产出的次代菌株是否有效拮抗烟草赤星病菌,进行了贝莱斯芽孢杆菌菌株RJW-5-5的固体发酵,接着使用其次代菌株JW-5-AN和烟草赤星病菌进行平板对峙试验,并建立了一种平板对峙试验描述方法,提出了几个平板对峙试验描述术语,再结合显微检测,结果表明,贝莱斯芽孢杆菌JW-5-AN拮抗烟草赤星病菌,其进攻型拮抗速率为5.56 mm/d,防御型拮抗指数为0.5760,固体发酵次代菌株JW-5-AN的平板检测结果为5×108CFU/g.这表明贝莱斯芽孢杆菌菌株RJW-5-5具有研发防治烟草赤星病菌微生物菌剂的潜力.     

应用3.85%病毒必克防治番茄病毒病

室内生物学测定表明,3.85%病毒必克可湿性粉剂接种前施药 ,对黄瓜花叶病毒的抑制作用明显高于对照药剂 ,防效达86.7% ,接种后施药抑制效果依然显著 ,达到78.57%。小区药剂对比试验,3.85%病毒必克可湿性粉剂500倍液喷雾 ,对番茄病毒病的防治效果达76.5%。     

西北地区小麦黄矮病流行分析及人工神经网络模型的构建

对西北地区半干旱气候区小麦黄矮病1992—2009年发生、流行情况进行长期监测、分析,选择制约小麦黄矮病发生、流行的23个因素,利用三层人工神经网络可以逼近任意连续函数,对非线性预测系统进行模拟处理的特点,分析所选预测分子,提出一套完整的建立BP人工神经网络模型的方法,并建立陕西省BP神经网络长期预测模型。对1992—2006年数据进行网络训练,利用2007—2009年数据进行测试。结果表明,以发病率为指标,输出结果误差在0.001~0.034之间;以发病级别作为预测结果,模型计算得出的数值与实际病级完全吻合,准确率为100%。说明利用神经网络建立小麦黄矮病预测模型是可行的。     

大麦条纹花叶病毒诱导大麦cDNA文库的构建

构建病毒诱导的寄主植物cDNA文库是利用酵母双杂交方法筛选与病毒相互作用寄主因子的前提奈件.该文以大麦条纹花叶病毒接种大麦,在ELISA跟踪检测的病毒复制和运动初期,采集大麦叶片,用TRIZOL法提取总RNA,利用SMART原理进行反转录PCR获得dscDNA,Sfi I/Xho I共切后1.1%琼脂糖凝胶检测并分段回收dscDNA,分别与Sfi I/Xho I共切的载体连接后,共同转化X-blue感受态细胞构建文库.文库的容量和质量检测结果表明:文库的容量为1.27×106,插入片段大于500 bp,集中在1.2 kb左右,符合酵母双杂交筛选文库的要求.     

西北地区小麦黄矮病流行趋势预测模型

为给小麦黄矮病防治适期的确定提供有效手段,利用2001-2010年西北地区小麦黄矮病资料,分析了小麦黄矮病不同年份病害流行动态、品种抗性差异、主麦区流行状况以及病害流行与气象因子的关系。结果表明,不同年份或同一年份不同月份小麦黄矮病发病情况不同,不同品种抗病性存在差异,西北地区主要麦区间该病害流行具有相关性。利用筛选出的8个主要影响因子构建了多因子线性回归预测模型,模型历史拟合率达96.5%,预测效果较好,可用于西北地区小麦黄矮病流行的预测预报。     

陕西烟田杂草初步调查

在室内查阅标本和文献资料的基础上,结合野外实地调查,对陕西烟田主产区的汉中、安康、商洛、宝鸡、咸阳和延安等的杂草进行了全面调查。结果表明:陕西烟田共有杂草35科72属88种,其中恶性杂草13种,次恶性杂草14种,一般杂草59种,偶见杂草2种。     

一株抗猕猴桃溃疡病的芽孢杆菌分离和筛选研究初报

从猕猴桃根际土壤中分离到的115株芽孢杆菌中,经过皿内拮抗活性试验筛选到12株对猕猴桃细菌性溃疡病有较好抑制效果菌株。进一步单胞分离纯化后,拮抗活性明显增强,尤以B17-4、B56-1和B56-3效果显著。田间药效试验表明：B56-3菌株发酵滤液稀释500倍时,采用刮除病斑涂抹法防治效果达到88%。