免疫组织化学技术在兽医诊断中的应用

免疫组织化学技术是利用抗原抗体特异性结合的原理,将物质标记在抗体上,通过标记来显示抗原抗体复合物的存在。随着免疫组织化学技术的发展和成熟,已被广泛应用于兽医诊断中,除用于对病原体准确的检测外,主要用于病原在机体组织中的定位和动态分布特点研究、新病原的发现、活体动物中病原的检测、以及对固定组织进行回顾性研究等,是广泛使用的现代病理学研究手段之一。     

动物狂犬病流行毒株的抗原性差异分析

利用9株抗狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）核蛋白单克隆抗体,通过间接免疫荧光方法对分离的34株传至F6代N2A细胞适应株进行了抗原差异分析。结果表明：这些RABV分离株存在抗原差异,根据病毒与单抗反应的类型,将所分析的病毒株分为6个抗原变异型。根据N基因系统发生分析将所分析的病毒株分为4个进化群,结果表明不同进化群病毒间的遗传差异与抗原分型没有直接的联系。     

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科,是迄今发现的一种最小的动物病毒[1]。它是一种直径仅为17nm、无囊膜、二十面体对称、共价闭合环状的单股DNA病毒。PCV有PCV1和PCV22种基因型。PCV1无致病性,广泛存在于正常猪体各器官及猪源细胞中;PCV2有致病性,且已经证明,     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒YA株的分离鉴定及动物回归试验

广东省某猪场暴发以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病.采集该猪场濒死猪的肺脏,接种Marc-145细胞,产生典型的细胞病变,收集病毒液并命名该病毒为PRRSV YA株.实时荧光RT-PCR试验显示YA株是基因缺失型变异株.扩增YA株的Nsp2基因的部分序列并进行核苷酸克隆、测序,结果显示Nsp2基因缺失第481位和第532～560位氨基酸.扩增Gp5基因序列并测序,绘制遗传进化树,结果显示YA株属于美洲型毒株,与其他7株已发表的高致病性PRRSV同源性达98.8%以上.用YA株病毒接种4头仔猪,其发病率和死亡率分别为100%(4/4)和75%(3/4).     

禽呼肠孤病毒的人工感染试验

从关节炎病鸡分离的禽呼肠孤病毒(ARV)经足垫、皮下和经口接种于无 ARV 母源抗体的1日龄肉用雏鸡,观察其临庆症状、肉眼和显微病变、排毒状况和抗体应答.ARV 主要引起腱滑膜炎、肝脏坏死、心肌炎和心包炎.试验鸡在接种后3天开始死亡,足垫接种鸡的发病率高达100%;足垫和皮下接种鸡发育不良,死亡率比经口接种鸡高,病变也较严重。泄殖腔抗子回收病毒结果说明,ARV 感染鸡向外界排毒。同栏混养鸡检出特异性抗体说明受 ARV 感染。血清中和抗体比沉淀抗体出现早.同栏混养鸡的抗体水平始终低于 ARV 接种鸡.     

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2截短基因的克隆及原核表达

参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型（Porcinecircovirus type 2，PCV2）的ORF2基因序列，设计合成1对引物，对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段（ORF2-ME）进行PCR扩增，并克隆到pMD18-T Simple Vector中，进行序列测定。将重组质粒pMD—ORF2-ME的EcoR Ⅴ和Xhol Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pET-32a（＋），构建原核表达载体pET—ORF—ME。测序分析表明，克隆的ORF2-ME与GenBank上公布的PCV2毒株核苷酸序列同源性为99％～100％，推导的氨基酸序列同源性介于91％～100％之间。原核表达载体导入BL21（DE3）后用IPTG进行诱导表达，收集菌液进行SDS—PAGE和Western Blotting分析，结果表明ORF2-ME在BL21（DE3）中成功表达，所表达融合蛋白的相对分子质量约为40000，并能被PCV2阳性血清所识别，这就为PCV2感染诊断和抗体检测提供了依据。     

四个不同厂家高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)免疫效果比较试验

对广东省2011年政府招标的4个厂家生产的高致病性猪蓝耳病活疫苗(J XA1-R株)进行免疫效果比较试验。随机选取115头32天龄,猪蓝耳病病毒核酸阴性的健康仔猪,随机分成4组,于免疫前0 d,免疫后28 d、48 d、66 d、86 d、106 d和126 d分别进行采血,采用法国LSI公司猪蓝耳病抗体ELISA试剂盒进行抗体检测,比较4个厂家生产疫苗的免疫效果。检测结果表明,4个厂家生产的高致病性猪蓝耳病活疫苗(J XA1-R株)免疫效果都比较好,无明显不良反应,免疫持续期长,一次免疫后126d抗体阳性率仍在75%以上。     

口蹄疫病毒R株基因组序列分析研究

根据GenBank上发表的口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）全基因序列数据，设计了多对引物，采用RT-PCR的方法，分别对R株编码区和非编码区基因进行扩增，将各片段克隆至pMD18-T载体，进行核苷酸序列测定．按顺序拼接各基因的序列，将结果序列与GenBank上各FMDV毒株的序列进行比较和同源性分析．序列的比较和分析表明，R株编码区全长为6966个核苷酸，共编码2322个氨基酸；非编码区5’端内部核糖体结合位点（intemal ribosome entry site，IRES）长约450个核苷酸，3’非翻译区（untranslatable region，UTR）从TAA始至Poly（A）前长度为94个核苷酸，所测出Poly（A）尾长度为18个核苷酸．与GenBank世界流行毒株的序列比较，编码区核苷酸序列同源性为88％～90％，推导氨基酸序列同源性为88％～95％．     

产量比系数对农用地分等的影响

产量比系数是农用地分等中关键的参数,其测算的是否科学决定了农用地利用等别评价精度,由于中国耕作制度的复杂性和利用方式的多样性,农用地分等规程上要求采用基准作物和指定作物最高产量比法求取产量比系数,如何进行产量比系数改进,提高农用地分等精度是必须要解决的科学问题。该文以上海市崇明区作为研究案例,针对一年两熟区域农用地分等,采用最高产量比法、生产潜力比法、热量比法、市场价格比法、热量—现实生产力综合比法、热量—生产潜力综合比法等6种方法确定产量比系数,并检验不同方法确定产量比系数对农用地自然质量等别和利用等别的影响。研究结果表明,与规程确定的产量比系数方法评价出的农用地自然质量等别和利用等别比较,其他5种方法评价得出的农用地自然质量、利用等别呈现整体上升或整体下降趋势。但是,依据不同方法确定的产量比系数进行农用地评价,对农用地自然质量等别和利用等别的空间质量差异没有影响。     

禽呼肠孤病毒的分离和鉴定

从患关节炎肉鸡的飞节分离到一株病毒。该病毒能致死鸡胚;能在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肾细胞和鸡胚肝细胞培养物中生长并形成合胞体。经三次空斑纯化后,能抵抗脂溶剂、pH5.0和 pH9.1、胰蛋白酶和5-氟脱氧尿核苷、50℃2小叫和60℃1小时处理:1M MgCl_2能增强该病毒对热的稳定性:感染病毒的 CEF 经吖啶橙染色可见胞浆有黄绿色荧光;对鸡、鹅、鸭、兔、豚鼠、小鼠、绵羊、家鼠的红细胞均无凝集性。病毒粒子点径为65～68nm,没有囊膜,具订双层衣壳和空心壳粒。在被感染的 CEK 和绒毛尿囊膜的中胚层细胞浆里部可见呈晶格状排列的病毒粒子。琼脂扩散试验证明,该病毒与禽呼肠孤病毒 U.conn S1133株的抗原相关。该病毒的各种特性证明为禽呼肠孤病毒.