西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立

为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64 000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β_2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1～12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R~2=0.977 1,拟合曲线方程为y=-0.246 9x+0.662 3。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%～103.9%和67.0%～105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。     

齐帕特罗检测方法研究进展

齐帕特罗(zilpaterol, ZIL)是β2肾上腺素受体(β2-adrenergic receptors,β2AR)激动剂的一种,被动物食用后,可以明显增加动物的胴体瘦肉率,提高生长速率,减少饲料消耗。经美国、加拿大、巴西、哥伦比亚等15个国家批准用于牛的饲料添加剂,给全世界食品安全带来严重威胁。目前,食品安全检测技术较低是影响我国食品安全现状的重要原因。因此,建立有效、快速、简便、高灵敏度的食品污染物检测方法是当务之急。文章综述了当前针对ZIL残留检测方法研究进展的同时,结合ZIL生物学效应及其残留特性等,指出目前关于ZIL残留检测存在的问题及在检测方面的未来发展方向,旨在为进一步建立高灵敏度的快速检测方法提供科学依据,同时为进一步丰富我国食品安全检测技术体系,提高我国食品安全检测水平和检测速度提供理论基础。     

长链非编码RNA对免疫功能的调控作用研究进展

免疫系统中基因的精确表达和调控是生物体产生对病原体强大免疫能力及限制自身免疫的重要因素.越来越多的研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)与免疫功能密切相关,能够通过调控免疫细胞分化发育以及免疫细胞效应功能参与免疫反应的调节.论文结合lncRNA调控作用的分子机制,阐述相关lncRNA在免疫应答和免疫调节过程中发挥的...     

齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清...     

新城疫病毒xx08毒株血凝素-神经氨酸酶基因主要抗原区原核表达及鉴定

利用基因工程技术构建新城疫病毒HN基因抗原表位集中区HNI175-K367基因片段(523-1101位)的重组表达质粒pET32-HNI175-K367。将该质粒转化大肠杆菌BL21(ED3),经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定表明,HNI175-K367蛋白得到高效表达,其分子量约为38kD。Western-blot分析证实,HNI175-K367蛋白与鸡新城疫病毒高免血清发生特异性反应,表明利用原核表达系统获得的重组蛋白具有良好的反应原性。     

齐帕特罗残留检测酶联免疫吸附试验方法的建立及优化

为建立检测齐帕特罗(ZIL)残留物的间接竞争酶联免疫吸附试验(ic-ELISA),以获得的抗ZIL兔多抗血清为基础,以制备的完全抗原为包被源,通过优化反应条件,建立了检测ZIL残留物的ic-ELISA检测方法。结果表明,兔血清最佳稀释比例为1∶6 000,抗原最佳包被浓度为2μg/mL,半数抑制浓度(IC₅₀)为0.317 ng/mL,线性检测范围(IC₂₀～IC₈₀)为0.136～1.181 ng/mL,最低检测限(LOD,IC₁₀)为0.081 ng/mL。经优化后,检测体系最佳pH为7.4,盐浓度≤0.4 mol/L,甲醇、乙醇、丙酮和和DMSO的含量≤5%,乙腈含量≤10%,且检测基质中牛尿液浓度≤15%时能够获得较高的检测灵敏度,并且该检测方法具有良好的稳定性和特异性,批内和批间重复试验样品添加回收率分别为101%～112%和101%～120%,变异系数均低于10%,检测结果与HPLC-MS检测结果的相关系数为R²=0.990 6。该检测方法检测速度快、灵敏度强、准确...     

1株鸡传染性法氏囊病毒VP2基因的克隆及其分子流行病学分析

为了解河南地区鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的流行特征,研究了分离于河南新乡地区某发病鸡场的1株IBDV(XX511毒株)VP2基因的分子流行病学特征。根据Gen Bank公布的IBDV基因组序列信息,设计合成特异性引物,应用RT-PCR方法对分离于新乡某发病鸡场的IBDV野毒株XX511的VP2高变区进行克隆及分析,并将XX511毒株的VP2高变区中与毒力相关的2个亲水区及七肽区与国内外其他参考毒株进行序列比对,绘制进化树。结果显示,XX511毒株与超强毒株D49706、AJ878898的VP2基因高变区氨基酸序列的同源性均为96.8%,与广东地区JQ911703毒株具有100%的同源性。与参照的经典毒株相比,XX511毒株在第一亲水区发生了1个氨基酸位点的突变。通过与国内外(包括河南地区)其他流行毒株的比对及进化分析发现,XX511毒株与2012年广东流行JQ911703毒株处于同一分支。     

沙丁胺醇人工抗原的制备及ic-ELISA方法的建立

以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础.为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA...     

农场动物福利的评估

畜牧业中的动物福利问题越来越为人们所关注,评估动物福利是提高畜禽福利的基础。行为是评价动物福利最容易理解和最通常使用的指标,特别是异常行为的出现。应激相关生理表征也说明动物处于不适环境。但福利评估是一个复杂而棘手的问题,其他很多指标也可用于福利评估,特别是情感状态。论文较为全面地介绍了动物福利常用的评估指标和新的评估手段。     

低剂量链脲佐菌素诱导迟发性Ⅰ型糖尿病小鼠模型

研究旨在通过改良传统链脲佐菌素(STZ)诱导I型糖尿病动物模型的注射剂量和诱导方式,探究一种能够诱导小鼠产生迟发性糖耐量异常的动物模型。小鼠随机分三组,A组通过腹腔注射方式按体重比120 mg.kg-1注射STZ;B组每间隔一日分别按体重比20、15和10 mg.kg-1腹腔注射STZ;对照组只注射柠檬酸-柠檬酸钠(pH4.4)缓冲液。观察两种方法造模成功率、造模组血糖、糖基化血红蛋白(GHbA1c)、体重变化,糖耐量变化。两种不同方法造模组,血糖、糖基化血红蛋白均明显高于对照组,并出现三多一少的糖尿病典型病征。A组STZ注射一周后空腹血糖(26.5±1.46 mmol.L-1)一直维持较高水平,B组在SZT注射后小鼠血糖升高缓慢,至第4周后升至(19.2±1.07 mmol.L-1)。成模后的血清胰岛素水平和GHbA1c水平结果表明,B组方法获得的动物模型胰腺β细胞破坏程度较低,血糖上升更为缓慢。通过小剂量腹腔多次注射,可减少胰腺β细胞的破坏程度,诱导小鼠模型缓慢产生糖耐量异常,较传统方法能更好模拟糖尿病患者的真实空腹血糖,较准确地反映糖尿病的发病过程。