禽I型副粘病毒天鹅源分离株对鸡的致病性研究

为研究禽I型副粘病毒(APMV-1)天鹅分离株sw/CH/LHLJ/120608对鸡的致病性,本研究将该病毒以105EID50/m L的剂量,采用点眼和滴鼻的方式感染SPF鸡,检测其致病性,同时,采用荧光定量RT-PCR的方法检测病毒在各组织中的分布。结果显示,sw/CH/LHLJ/120608分离株感染鸡能够引起30%的发病率和6%的死亡率,并且病毒在感染鸡的呼吸系统、消化系统、免疫系统以及泌尿系统中均有广泛的分布。根据对APMV-1实验动物致病性的判定标准,该病毒株对鸡具有中等毒力的致病力特征。     

鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的研究进展

鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性疾病，主 要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统，可引起不同日龄的鸡发病，表现出广泛的 组织嗜性和高度的遗传变异性。 S1蛋白作为鸡传染性支气管炎病毒的重要免疫原，能刺激机体产生血凝抑制抗体和病毒 中和抗体，引起了许多学者的极大关注。随着现代生物技术的发展，有关S1蛋白的研究不 断地深入，并已取得了一定的进展。 1 IBV S1蛋白的分子生物学研究 1.1 IBV S1蛋白的结构特征 S蛋白包括两种糖多肽S1和S2，分子量约为180～200 KD，Cavanagn 的研究表明，它是由2～3个相同的单体以非共价键连接构成的聚合物，每个单体有两个等 摩尔分子的亚单位S1、S2构成，S1约为90 KD，由520～538个氨基酸组成，S2约 84 KD，由625个氨基酸组成，Cavanagn证实，S蛋白翻译后经过裂解产生S1的 N端和S2的C端，两者之间由二硫键连接，S1在外形成一个泡状结构，S2通过一个小的疏水跨 膜 片段嵌入病毒膜中，形成S1的柄，将S1蛋白锚定在膜上，裂解处的氨基酸序列模式为：- Arg-Arg-X-Arg-Arg-（C）(其中，X为任一氨基酸)。     

鸡传染性支气管炎病毒中国分离株LH2/01/10纤突蛋白基因的遗传变异

 对传染性支气管炎病毒LH2/01/10的S1和S2基因分别进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定。结果表明,其S基因由3 495个核苷酸组成,编码的多肽由1 164个氨基酸残基组成。S蛋白的切割识别位点氨基酸组成为组氨酸-精氨酸-精氨酸-精氨酸-精氨酸(HRRRR)。推测其裂解后形成的S1和S2亚单位中,S1由539个氨基酸残基组成,S2由625个氨基酸残基组成。序列分析发现:LH2/01/10与Beau、M41、CU-T2、D1466、DE072、Holte、Gray、Ark99、Conn、H52、KB85     

在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型 cDNA

 对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96（H5N1）、A/African starling/983/79（H7N1）和 A/Turkey/Wisconsin/1/66（H9N2）。通过RT-PCR获得大约500 bp的禽流感病毒基因cDNAs片段，克隆，从重组质粒扩增DNA片段，并点到玻璃载体上，制成芯片。在病毒RNA反转录过程中，用Cy5标记样品 cDNAs。样品 cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型，依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点，杂交信号与预期设想基本一致。结果显示，DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。     

犬蝠源呼肠病毒的分离与鉴定

 【目的】从野生蝙蝠体内分离病毒，为开展蝙蝠的病原监测奠定基础。【方法】从广东省韶关采集了30份野生犬蝠样品，研磨后接种Vero E6细胞，从中分离到2株病毒，对其中一株病毒进行研究，使用生物学与分子生物学方法确定其分类学地位。【结果】该毒株在Vero E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变，表现为细胞内颗粒增多，细胞收缩、变圆，最后细胞从瓶壁脱落。反复冻融3次后，收集细胞及培养液，电镜观察发现，病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，呈正二十面体对称，将病毒命名为Bat/China/2003（B/03）。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞，不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力、能耐受pH3.0的酸性环境、50℃水浴1 h病毒丧失感染能力、1 mol•L-1 MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。病毒基因组经琼脂糖凝胶电泳分大、中、小3个区段。用哺乳动物呼肠病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST分析表明，与呼肠病毒科正呼肠病毒属的Ndelle virus核苷酸同源性最高为91.2%。用DNAMAN Multiple Alignment进行序列同源性分析，与哺乳动物呼肠病毒血清1、2、3型的代表株T1L，T2J，T3D的核苷酸同源性分别为89.9%、76.9%、89.9%。【结论】由以上结果推断该病毒为呼肠病毒科的成员。     

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒的构建

为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原S1蛋白的重组腺病毒,本研究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,以IBVCK/CH/LHLJ/04V株S1基因为外源插入靶基因,通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVS1蛋白(90ku)的重组腺病毒,命名为rAdV-S1。通过PCR鉴定、间接免疫荧光及western blot检测证实S1蛋白在重组腺病毒中获得表达。对构建的重组腺病毒和亲本腺病毒的生长动力学分析表明,该重组病毒的毒价为108.25TCID50/mL,并且两者在生长动力学方面无显著差异。本研究为动物试验和该重组腺病毒免疫特性的研究奠定基础。     

新发现的几种禽细胞因子及其研究进展

随着研究的不断深入，发现几乎机体所有的免疫反应都有细胞因子直接的参与，因此细胞因子一直的免疫学研究中的热点。近年来禽类细胞因子的研究进展迅速，许多对应于哺乳动物的禽细胞因子被发现。本文从基因的核苷酸和氨基酸序列特点、重组蛋白的生物学活性和功能等分子水平上综述了近3年来新发现的鸡白细胞介素-15、-18、火鸡白细胞介素-2、γ-干扰素及鸭γ-干扰素等在机体免疫反应中具有重要调节作用，具有疫苗增强剂潜在应用价值的禽类细胞因子的研究进展，同时与哺乳动物进行了比较。     

牛分枝杆菌esat-6和mpb70-mpb83基因DNA疫苗的免疫效果

用PCR技术和重叠延伸剪接技术获得牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83融合基因，连接真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建了重组质粒pCE6和pC70-83-E6。分4组免疫小鼠：pCE6组、pC70—83-E6组、pcDNA3．1（＋）和PBS对照组，采用间接EI。ISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体水平，MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN—y分泌情况。结果表明，2重组质粒免疫组小鼠的血清抗体水平持续上升，而2对照组始终维持在较低水平，且pC70-83-E6组小鼠的抗体水平高于pCE6组。经PPD刺激后，pCE6组和pC70—83-E6组小鼠的SI值与2对照组均差异显著（P〈0．05），2重组质粒免疫组间差异不显著（P〉0．05）；2重组质粒免疫小鼠脾细胞产生的IFN—y均显著高于2对照组（P〈0．05），且pC70-83-E6组明显高于其他3组（P〈0．05）。证实本试验构建的2种牛分枝杆菌DNA疫苗可有效诱导实验动物产生体液免疫和细胞免疫应答。     

鸡传染性支气管炎的免疫机制研究概况

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染的病毒性疾病.主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统.雏鸡感染后由于呼吸道或肾脏病变而引起死亡.鸡感染后,通常使饲料报酬降低,死淘率增加,给世界范围内的养鸡业造成了很大的经济损失.自发现以来,其免疫机制一直是研究的热点,目前,在IB的免疫机制研究方面已取得了可喜的进展,现综述如下.     

马传贫免疫中细胞免疫作用的研究 Ⅱ致敏淋巴细胞对马传贫病毒感染细胞破坏反应的观察

为了探讨马传贫弱毒疫苗免疫中的细胞免疫作用,前报对免疫马匹的外周血中淋巴细胞E玫瑰花(ER)和活性玫瑰花(ATR)及其活性率(ATR/ER)进行了检测。本报根据Spell等报告,含有生长着的病毒和表面有病毒抗原的靶细胞,能在试管中被致敏的淋巴细胞识别和破坏。