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克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。 相似文献
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引进异地种牛多以冻精颗粒的形式供应,精液冷冻保存是将精液进行特殊低温冷冻处理,以达到长期保存精液的目的,通常采用液氮(-196℃)和干冻(-79℃)保存.其最大优点是保存期长,使用不受时间、地域以及种用雄性动物寿命的限制,可充分提高公牛的利用率.如何将精液冷冻保存和怎样进行解冻应用呢?现将其技术要点介绍如下. 相似文献
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