转录调控因子AtWRKY71的克隆及其序列分析

采用RT-PCR方法,从模式植物拟南芥叶片克隆出转录因子WRKY 71,经过测序及blast同源性分析,结果表明,该序列与GenBank登陆的AtWRKY71序列基本一致,只在起始密码子下游57bp位置由G突变为C,但并不改变氨基酸的编码,说明已经成功克隆转录调控因子AtWRKY71,为后续功能鉴定奠定了基础。     

充分释放减税红利 推动实体经济高质量发展

正2018年3月5日,李克强总理在十三届全国人大一次会议上作政府工作报告时指出,进一步减轻企业税负:全年再为企业和个人减税8000多亿元,全年要为市场主体减轻非税负担3000多亿元;提高个人所得税起征点。正在积极落实国家减税政策、大力推进实体经济转型升级的湖南,如何进一步释放减税红利、激发市场活力和社会创造力、推动实体经济高质量发展?     

核发排污许可证与第二次全国污染源普查工作衔接探析——基于四川省畜禽养殖行业排污许可证和第二次全国污染源普查农业源工作

文章概述了核发排污许可证和第二次全国污染源普查工作意义和共同点,重点从工作程序、工作范围、填报要点、核算要点、系数核算、提交资料等方面,比较分析四川省畜禽养殖行业核发排污许可证和第二次全国污染源普查农业源工作差异性,提出衔接核发排污许可证工作时的审核要点。     

高职学生创业实践的生成性动力机制

随着政府推动公共创业和创新政策,许多大学生加入了创业军队。目前,高职学生的学习动机不够强。本文以高职学生的学习动机为基础,在调查高职学生创业实践现状的基础上,进行分析影响此类学生在创业动力方面的因素,而且应用相关的办法构建出高职学生创业的动力机制,在此基础上,我们将进一步提升这类学生的创业动机。     

重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉免疫效果的研究

为评估重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉的免疫保护效果,选取30日龄的雉,按照免疫程序首免后21 d,加强免疫1次,分别于接种前和接种后定期采血,分离血清,检测H5、H7亚型HI抗体滴度。结果显示,免疫前,雉血清中H5、H7亚型HI抗体滴度均为0;免疫后14 d,H5和H7亚型抗体平均滴度分别达到7.0log2和7.07log2,49 d后平均滴度达到峰值,分别为8.04log2和9.20log2;H5亚型免疫有效期可达105 d以上,H7亚型可达189 d以上。结果表明,重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对雉具有良好的免疫保护效果且安全性良好,但疫苗免疫49 d后,H5、H7抗体效价逐渐下降,133 d后明显下降,群体免疫合格率低于70%,因此生产中推荐,30日龄首免后,51日龄和5月龄各加强免疫1次。本研究为珍稀禽的禽流感免疫疫苗选择和程序制定提供了参考。     

广西巴马小型猪MyoD1基因克隆及其真核表达载体的构建

本研究旨在对广西巴马小型猪成肌细胞决定基因1(myoblast-determining 1,MyoD1)进行克隆分析,并构建MyoD1基因真核表达载体pEGFP-N1-MyoD1,为进一步研究该基因在广西巴马小型猪骨骼肌发育中的调控作用奠定基础。以广西巴马小型猪的肝脏组织为材料,应用RT-PCR技术克隆得到广西巴马小型猪MyoD1基因编码序列,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建该基因的真核表达载体,经过PCR和双酶切验证,通过脂质体转染,将重组质粒转染C2C12细胞,在细胞水平验证了该载体的正确性。结果显示,广西巴马小型猪MyoD1基因编码区序列长960 bp,编码319个氨基酸,核苷酸序列与猪、牛、水牛、绵羊、马、人、小家鼠、褐家鼠、家犬的同源性依次为99.7%、92.8%、92.9%、92.6%、91.5%、82.9%、82.9%、82.0%和90.9%;系统进化树分析表明,广西巴马小型猪MyoD1基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性;蛋白质结构分析表明,MyoD1蛋白为膜外蛋白,在第4-116位氨基酸处存在1个MyoD家族标志性的MyoD结构域,对广西巴马小型猪、猪和人的MyoD1蛋白高级结构比较发现其具有极高的相似性。本研究构建的广西巴马小型猪MyoD1基因表达载体pEGFP-N1-MyoD1,转染C2C12细胞后产生绿色荧光信号,表明MyoD1基因在C2C12细胞中成功表达。     

一例猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与链球菌混合感染的实验室诊断

某规模化自繁自养猪场产房母猪出现流产,保育猪关节肿胀、倒地不起、大量死亡,为研究发病原因,采集流产胎儿、死亡仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和关节液,进行分子生物学检测,病毒和细菌分离鉴定,并检测不同胎龄母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体,结果显示猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性,使用PAM分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经序列鉴定为高致病性毒株;抗体结果表明四胎及以上母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率异常升高;病料分离的细菌经鉴定为猪链球菌,经实验室诊断确定猪场发病的原因为猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与猪链球菌混合感染。     

基于网络药理学方法研究两面针抗肿瘤的作用机制

【目的】基于网络药理学构建两面针抗肿瘤的“活性成分-抗肿瘤靶点-抗肿瘤通路”等网络关系,预测其抗肿瘤的作用靶点并对其作用机制进行研究分析。【方法】以口服利用度（OB）及类药性（DL）为限制条件在中药系统药理学分析平台（TCMSP）数据库筛选出两面针主要活性化学成分,在Pharmmapper服务器上筛选和建立两面针靶点数据库。通过OMIM及其他数据库进行抗肿瘤相关基因及蛋白靶点筛选。使用R4.2.1软件做出两面针活性成分、靶点基因和肿瘤。靶点基因相交情况筛选两面针作用靶点。通过Cytoscape 3.6.1软件Merge及Union功能,建立了两面针“有效成分-肿瘤靶点”的可视化交互网络。利用STRING数据库构建抗肿瘤靶点之间的交互网络、PPI网络,利用DAVID数据库对靶蛋白进行KEGG通路注释分析,富集出生物通路,构建出“活性成分-抗肿瘤靶点-抗肿瘤通路”网络。选择其中一个关联度较高的活性化合物作为配体、KEGG富集结果中较为显著的信号通路所涉及靶点作为受体,对活性成分与核心靶蛋白进行分子对接验证。【结果】经筛选和分析获得两面针活性成分21个,抗肿瘤靶点14个,包括EGFR、ESR...     

6个铁线莲品种花粉保存方法

为了探究铁线莲花粉保存的最佳条件,研究比较了花粉采集时间(开花第1、2、3天)、干燥时间(12、24、48h)和保存温度(4、-20、-196℃)对花粉萌发率的影响。结果表明,花粉粒的平均直径均随着开花时间的延长而上升,且差异显著,其中‘蓝龙’花粉粒直径上升幅度最大为4.53μm,‘如梦’的上升幅度最小,为1.13μm。开花第2天采集的‘爱莎’、‘第一夫人’、‘冰美人’、‘亨利’和‘如梦’花粉萌发率最高,而开花第3天采集的‘蓝龙’花粉萌发率最高;‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’分别经过12~48h干燥后4℃保存的花粉相对存活率最高,分别为新鲜花粉的87.86%、71.27%和67.24%;‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’花粉干燥24h后-196℃保存的相对存活率最高,分别为新鲜花粉的59.65%、78.74%和69.33%。-20℃保存的铁线莲花粉相对存活率仅为0~56.85%。利用4和-196℃保存的花粉进行杂交验证试验,平均坐果率为70.7%~100%,初步明确了‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’花粉适合4℃保存,而‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’则适合液氮超低温保存,这为解决铁线莲品种间杂交的花期不遇问题奠定了基础。