几种方法纯化小鼠腹水IgG2b类单抗的比较

分别采用硫酸铵-蛋白A亲和层析法、改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法、辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化小鼠腹水IgG2b类抗体。经SDS-PAGE和间接ELISA分析纯化产物的纯度及其活性。结果表明:3种方法纯化后的单抗的免疫活性均未降低;纯化后单抗的亚类为IgG2b;经改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化制备的IgG2b类抗体纯度可达到87.1%;经辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化制备的IgG2b类单克隆抗体纯度可达到100%,是一种制备高纯度小鼠腹水IgG2b类单克隆抗体简便而有效的方法。     

病案教学法在兽医内科学教学中的运用

兽医内科学是兽医学科的主干课程之一,掌握兽医内科学理论和运用所学知识解决临床问题对学生理论知识和实践能力有很高的要求。在有限的课堂教学内容中使学生掌握兽医内科学的学习方法和临床诊疗能力是当前我国兽医内科学教学工作者的探索重点,传统的教师主导型教学模式已不能满足兽医内科学理论增长及技术革新的要求。病案教学法旨在提高学生学习兴趣,培养其独立思考、分析问题、解决问题的能力,是兽医教学改革的方向之一。根据对该课程教学的体会,阐述病案教学法在兽医内科学理论及实践教学中的运用,旨在为提高兽医内科学教学质量提供参考。     

奶牛亚临床酮病血液生化指标分析及糖皮质激素影响肝细胞糖异生作用分子机制的研究

为探究围产期奶牛亚临床酮病血清中生化指标的变化特征,本研究选取2～4胎次荷斯坦围产期奶牛45头,分别在分娩前7 d、分娩当天晨饲前经尾根静脉采血,以血酮检测值<1.2 mmol/L为健康组,≥1.2 mmol/L为酮病组。采用ELISA试剂盒测定分娩前7 d、分娩当天、分娩后7 d、14 d健康组和酮病组奶牛血液中的生化指标。结果显示,酮病组奶牛分娩前7 d和分娩当天血清中皮质醇含量显著高于健康组(P<0.05);并且酮病组奶牛分娩前7 d血清中β-羟丁酸(BHBA)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量显著高于健康组(P<0.05);酮病组奶牛分娩前后血清中葡萄糖(Glu)、甘油三脂(TG)、极低密度脂蛋白(VLDL-C)、游离脂肪酸(FFA)含量较健康组虽无显著差异,但均高于健康组。分别以0、1×10^-7mmol/L、1×10^-8mmol/L、1×10^-9mmol/L浓度的糖皮质激素(GC)刺激原代分离培养的犊牛肝细胞,作用0、1 h、3 h、6 h、24 h后采用荧光定量PCR检测肝细胞中糖异生相关受体...     

乙酸和β-羟丁酸对体外培养牛肝细胞脂代谢部分关键酶表达的影响

以体外原代培养的奶牛肝细胞为模型,添加不同浓度的乙酸（Aceticacid,AcOH）和β-羟丁酸（β-hydroxybu—tyrate,BHBA）共培养24h后,提取细胞总RNA。应用实时荧光定量PCR方法检测脂代谢关键酶长链脂酰辅酶A合成酶1（Long-chain acyl-CoA synthetase-1,ACSL1）、柠檬酸合成酶（Citrate synthase,CS）和乙酰辅酶A羧化酶α（Acetyl coenzyme A carboxylase α,ACCα）mRNA丰度的变化。结果显示,适当浓度的AcOH能够促进肝细胞脂肪酸活化及氧化途径关键酶ACSL1和CS的转录,而高浓度AcOH能够抑制脂肪酸从头合成途径关键酶ACCa的转录;高浓度BHBA能够抑制肝细胞ACSL1、CS和AcCα的转录。结果表明,血液中适当浓度的AcOH能够促进肝脏脂肪酸氧化并抑制脂肪酸从头合成,高浓度BHBA能够抑制肝脏脂氧化和合成,影响乳脂前体物的供应,进而影响乳脂合成。     

烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞炎症因子及前列腺素分泌的影响

试验旨在探索α7烟碱乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR）的高亲和力激动剂烟碱对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的兔子宫内膜上皮炎症的作用机制。分离发情后期兔的子宫内膜上皮细胞,用100 ng/mL LPS对细胞进行炎性刺激12 h。用CCK8法检测不同浓度烟碱（5、10和20 μg/mL）对细胞存活率的影响,筛选合适浓度的烟碱进行后续试验。将细胞分为对照组（CON）、LPS、LPS+烟碱、LPS+烟碱+甲基牛扁碱（MLA）（α7nAChR的特异性颉颃剂）组,通过ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β（interleukin 1β,IL-1β）、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、前列腺素E₂（prostaglandin E₂,PGE₂）和前列腺素F_2α（PGF_2α）的含量。试验成功分离兔子宫内膜上皮细胞,且传至第5代仍保持良好的生长状态。CCK8检测结果显示,20 μg/mL烟碱组细胞存活率显著降低（P<0.05）,10 μg/mL烟碱对细胞存活率无显著影响（P>0.05）,所以选择10 μg/mL烟碱进行后续试验。ELISA结果显示,与对照组相比,LPS组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE₂和PGF_2α的含量显著增加（P<0.05）;与LPS组相比,LPS+烟碱组显著降低IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE₂和PGF_2α的含量（P<0.05）,LPS+烟碱+MLA组炎性因子和前列腺素的含量差异不显著（P<0.05）。以上结果表明,烟碱对LPS诱导的兔子宫内膜上皮细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、PGE₂和PGF_2α具有下调作用,推测烟碱通过α7nAChR介导炎性因子和前列腺素分泌下调而发挥抗炎作用,该结果可为研究α7nAChR作为子宫内膜炎治疗靶点的药物选择提供参考。     

苹果不同矮化砧穗组合的成活率及生长调查

以15个矮化砧穗组合苹果苗为研究对象,以‘美乐富士/八棱海棠’和‘烟富3/高山海棠’为乔化对照,对其成活率、茎秆、枝条和叶片的生长指标进行了调查,并通过相关分析和主成分分析,以期了解不同矮化砧穗组合苹果苗在阿拉尔的矮化效果及生长适应性。结果表明:不同矮化砧穗组合苹果苗的成活率和生长指标差异显著,以T337和海棠为基砧的苹果苗成活率高、生长指标较优,而以SH和甜茶做基砧的苹果苗成活率低,并且生长缓慢;结合相关分析和主成分分析,初步推断‘华瑞/SH/海棠’‘礼泉富士/M26/海棠’‘华硕/M26/海棠’‘华星/M26/海棠’‘锦绣红/M26/海棠’‘华瑞/T337’和‘华硕/T337’7个矮化砧穗组合适宜在阿拉尔引种栽培;此外,成活率、株高、接穗直径、砧木直径、结合部直径、发育枝比例、短枝比例、叶绿素含量和叶柄长9个指标可用于评价砧穗组合的矮化及生长适应性。     

酵母发酵饲料对瘤胃菌群数量及多样性的影响

本试验研究日粮中添加酵母发酵饲料对蒙古绵羊瘤胃菌群数量及多样性的影响.选用10只安装永久性瘤胃瘘管且体重约40 kg的14月龄蒙古羯羊,分为对照组和试验组,每组各5只.对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础日粮+酵母发酵饲料(13.37％).预试期15 d,正试期5 d.于正试期晨饲后0、3、6、9、12 h依次采集瘤胃液...     

肉牛亚急性瘤胃酸中毒血液学及生化指标变化分析

为了解肉牛发生亚急性瘤胃酸中毒时血液学和相应生化指标的变化,对瘤胃液pH在5.2～5.5、5.6～5.8和5.9～6.8之间的24头肉牛进行了血液学及相应生化指标的分析.结果表明:随着pH值的降低,血液中红细胞(RBC)数量、血红蛋白(Hb)浓度、红细胞压积(PCV)均显著增加;白细胞(WBC)总数上升,白细胞分类(WBC-DC)也有相应的变化,嗜酸性粒细胞和淋巴细胞呈下降趋势,中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞呈上升趋势,单核细胞略微升高;血气指标pO2显著增加,pCO2、HCO3-浓度显著减少;生化指标Ca2+、Cl-显著减少,Na+和尿素氮显著增加,K+差异不显著.肉牛发生轻度和中度亚急性瘤胃酸中毒时,pCO2以及HCO3-含量显著降低,表明机体碱储备不足,缓冲能力下降,存在代偿性酸中毒;同时根据水合状态和血象指标,表明亚急性瘤胃酸中毒病牛存在轻度脱水和炎性反应.     

脂联素对犊牛肝细胞脂氧化关键酶表达的影响

体外原代培养犊牛肝细胞,添加0、16、64和128μg/L脂联素（adiponectin,ADPN）,分别培养4、8h后,提取细胞总RNA。应用实时荧光定量PCR方法,检测脂氧化关键酶脂酰辅酶A氧化酶（ACO）、肝脏脂肪酸结合蛋白（L-FABP）、肉碱脂酰转移酶-Ⅰ（CPTⅠ）、肉碱脂酰转移酶-Ⅱ（CPTⅡ）mRNA表达变化。结果显示,在ADPN作用4h后,ACO、L-FABP、CPTⅠ、CPTⅡ基因mRNA水平均随ADPN浓度的增加而增加,且均显著高于对照组,呈剂量依赖关系;作用8h时,ACO表达也增加,但差异不显著,L-FABP在中高剂量组显著高于对照组,CPTⅠ和CPTⅡ在各ADPN处理组均显著高于对照组。结果表明,ADPN可显著促进脂氧化关键酶的表达,增强肝脏脂氧化作用,减少肝脂储存。