家蚕微孢子虫假定层粘连蛋白基因NbHLAMB4的克隆和序列分析及互作蛋白质筛选

层粘连蛋白是重要的细胞外基质成分之一,在基膜的构建及细胞的黏附等方面都有重要作用。通过检索微孢子虫数据库发现家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)存在假定层粘连蛋白基因Nb HLAMB4,根据该基因序列设计引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆了Nb HLAMB4基因。该基因的开放阅读框(ORF)全长为1 104 bp,预测编码的蛋白质含有367个氨基酸,分子质量为43.74 k D,等电点为5.72。Nb HLAMB4蛋白序列含有一个N-糖基化位点和Pfam:SAS-6_N结构域,无信号肽,也无跨膜结构域。应用酵母双杂交技术,以Nb HLAMB4作为诱饵蛋白,通过筛选家蚕中肠c DNA文库,初步得到3个与Nb HLAMB4互作的候选蛋白质,分别是家蚕热休克蛋白(Hsp40)、锌指蛋白420类似物(similar to zinc finger protein 420)、氨肽酶N(aminopeptidase N)。研究结果为阐明家蚕微孢子虫的侵染机制提供了新的线索。     

间接ELISA法检测人血清抗HBcIgA及其应用

目的：改良抗ＨＢｃＩｇＡ的检测方法，并探讨抗ＨＢｃＩｇＡ与肝脏损伤程度的关系，方法：通过预测处理患者血清，以羊抗人ＩｇＡ－ＨＲＰ（ＳＡＨ－ＩｇＡ－ＨＲＰ）为指示系统，建立间接ＥＬＩＳＡ法，并对２８０例临床血清进行检测。结果：经与抗体捕获酶联夹心法相比较，两种方法所检测出的抗ＨＢｓＩｇＡ阳性率之间及Ｓ／Ｎ值之间的差异均我显著性，在２８０例临床血清标本中，重症乙型肝炎，慢性活动性肝炎（简称慢活肝）合并     

湛江地区2286名健康人HCMV感染的调查分析

目的 :了解湛江地区健康人群的人巨细胞病毒 (HCMV)感染情况及影响因素。方法 :酶联免疫吸附测定(EL ISA法 )。结果 :本地区 2 2 86名健康人群的 HCMV- Ig G阳性率为 5 9.1% ,S/N值 (标本 45 0 nm吸光度 /阴性对照 45 0nm平均吸光度 )为 (2 .40± 0 .47) ;工厂组的 HCMV- Ig G阳性率及 S/N值均明显高于广东医学院组 (P<0 .0 1) ,HCMV感染有随年龄增加而增高的趋势 ,不同性别、工种及婚否的阳性率之间、S/N值之间的差异有显著性。结论 :湛江地区的HCMV感染处于较低水平 ;年龄、性别、环境及性接触可能是 HCMV感染的影响因素     

虫草素预防肥胖及通过ADORA_1介导GH3细胞中泌乳素分泌研究

为了研究虫草素是否具有预防肥胖的作用及其可能机制,试验利用高脂饮食诱导肥胖型高脂血症大鼠动物模型,并给予高、中、低不同剂量(50、25、12.5mg/(kg·d))的虫草素,连续灌胃35d后观察大鼠体重、脂肪系数、血脂水平的变化;体外培养大鼠脑垂体瘤细胞(GH3),通过CCK8、Western blotting、ELISA等方法检测虫草素对GH3细胞的增殖毒性,以及腺苷受体A1(ADORA_1)的表达和对泌乳素分泌量的影响。体内试验结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠体重、脂肪系数和血脂水平(高密度脂蛋白(HDL)除外)均极显著升高(P0.01);虫草素高、中、低各剂量组均能极显著或显著降低大鼠体重、脂肪系数及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平(P0.01;P0.05),但HDL水平仅在虫草素高剂量组中显著升高(P0.05),而虫草素中、低剂量组均无显著变化(P0.05);体外试验结果显示,虫草素浓度低于25μg/mL时对GH3细胞增殖无影响;虫草素能够诱导GH3细胞ADORA_1表达升高;虫草素和ADORA_1激动剂(R-PIA)单独作用能显著或极显著降低泌乳素的分泌量(P0.05;P0.01),虫草素与ADORA_1抑制剂(DPCPX)联合作用时能够在一定程度上阻断虫草素对泌乳素的抑制作用。结果表明,虫草素具有预防肥胖和降血脂的作用,其可能的作用机制是通过诱导ADORA_1表达抑制泌乳素的分泌,该研究结果将为虫草素作为一种潜在的减肥降脂药物的开发提供一定依据。     

重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达

目的体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncatedprotamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白。方法设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5’和3’端设计EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的基因片段亚克隆至pMD 18-Tsi mple载体中,经过酶切鉴定和测序验证。进一步将目的基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证。结果各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。结论成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础。     

布氏杆菌病的诊断与防控措施

布鲁氏菌病(俗称布病)是由布鲁氏杆菌引起的一种人畜共患传染病,家畜感染布鲁氏杆菌后可以降低生产性能,引起母畜流产,导致种畜出现繁殖障碍,畜产品质量安全受到影响,给养殖业带来很大的经济损失。据统计,世界上已经有170多个国家和地区发生过该病,流行范围很广,而且每年因为布病造成的损失高达数十亿美元。到目前为止,还没有有效的措施来控制和消灭布病,因此做好布病的早期诊断和预防措施非常重要。笔者根据多年的工作经验,详细分析了该病的诊断方法,并提出了有效的防控措施,以供养殖户参考。     

农药对家蚕的毒性研究进展

农药在农业生产上的广泛应用,导致农药污染对蚕业生产构成严重威胁.为了给蚕业生产上有效预防家蚕农药中毒提供较为系统、全面的技术参考,介绍了常用农药的种类(如有机磷类、有机氮类、菊酯类等)及其作用机制,各类农药对家蚕的毒性和残毒期以及导致家蚕中毒的典型症状等的研究进展,并对蚕业生产上如何加强家蚕农药中毒的预防工作提出了一些...     

家蚕抗浓核病毒分子标记筛选及分析

在抗DNV的品种秋丰、高感品种华八35及其近等基因系BC6中,通过495个RAPD随机引物在各个品种的DNA混合物中进行PCR扩增,获得了一个与家蚕抗DNV基因相关的分子标记S366,对这个标记进行了克隆、测序,并且根据序列设计特异引物转换成SCAR标记,在多个敏感性和抗性品种中进行了验证,证明此分子标记真实可靠.通过生物信息学对测序片段进行分析,发现该片段序列与黄嘌呤脱氢酶基因有91%的同源性.     

利用N-端融合(His)_6标签观察家蚕核型多角体病毒泛素蛋白的亚细胞定位

为了给家蚕核型多角体病毒(BmNPV)泛素蛋白(UB)的功能研究提供亚细胞定位信息,利用Red重组系统和BmN-PV的bacmid系统,进行2次同源重组,成功地将(His)6标签编码序列引入到BmNPV泛素基因(ub)起始密码子ATG和第2个密码子CAA之间,使得表达的BmNPV UB的N-端融合(His)6标签。通过对(His)6的免疫荧光分析观察到BmNPV UB在BmN细胞中呈现3种方式的亚细胞定位:均匀地分布于整个细胞;主要分布于细胞核;分布于细胞核,同时在细胞质中出现零星的点分布。BmNPV UB具有多种不同的亚细胞定位方式,提示其功能的多样性。     

“一带一路”背景下蚕桑学科硕士留学生的实践教学探讨

2023年是“一带一路”倡议提出十周年,也是共建“一带一路”的关键节点。随着“一带一路”倡议不断深化,我国高等教育对外开放水平不断得到提升,来华留学生的规模日益扩大。加强对“一带一路”倡议下高校来华留学生的教学研究,尤其是蚕桑丝绸行业专业硕士留学生的实践教学探讨,不仅有助于促进高校来华留学生的教育与培养,也有助于推动“政教融合”“科教融合”“产教融合”三融合的进一步发展,是高等教育应对国际化挑战、加强国际人才培养的重要举措。通过分析和研究蚕桑学科硕士留学生人才培养现状提出针对性对策,探讨了进一步丰富蚕桑学科硕士人才培养体系,在培养模式、课程设置、教学方式等方面提出了可行性建议,为国际留学硕士研究生的人才培养提供有益参考。