家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白提取方法的优化研究

分别用SDS法、煮沸法、碱溶法和Brosson法,提取家蚕微孢子虫孢壁蛋白,并对孢壁蛋白及处理后的孢子形态进行比较研究。结果表明,不同方法处理后的孢子形态均保持完整,SDS处理后孢子为短杆状且明显变得粗壮,煮沸处理后孢子变小呈梭形,其他方法处理的孢子均有膨胀现象。SDS-PAGE检测显示,SDS法提取的孢壁蛋白出现3条明显的主带,煮沸法提取的孢壁蛋白出现5条明显的主带,0.1 mol/L KOH提取的孢壁蛋白出现2条主带;而Brosson法提取的孢壁蛋白呈现出20~30条带,体现了家蚕微孢子虫孢壁蛋白组成的复杂性,并适合于孢壁蛋白质组学的研究。     

家蚕微孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

用家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)总蛋白为抗原,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为13.3%,第2次融合率为55.4%。建立间接酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体。初检阳性率分别为4.68%和5.26%。经3次亚克隆筛选获得了2株能稳定分泌抗家蚕微孢子虫的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2G10和2B10。间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence test,IFAT)和Western-bloting分析证实所获得的单克隆抗体是特异针对家蚕微孢子虫蛋白的,将在孢子孢壁蛋白的研究中发挥重要作用。     

丝素的多功能开发与应用

丝素又名丝心蛋白,占整个茧丝纤维的2/3,蚕儿吐的茧丝在脱去包裹在外层的丝胶后,即得丝素.丝素纤维在缫丝厂根据生产纤度的要求,数根合并为一根生丝.尽管丝胶和丝素的氨基酸组成类别基本相同,但丝胶是水溶性的,丝素是非水溶性的,因此用作纤维素材的是丝素,丝胶在制丝加工过程中被脱出,是丝绸厂废水的主要成分.丝素主要由侧链较小的甘、丙、丝氨酸组成,此外还含有一些大侧链酪、缬、脯等氨基酸.经检测,组成丝素的18种氨基酸中,包含了8种人体必需的氨基酸,其二级结构呈β-折叠片层,多肽链呈锯齿状,反平行式β-折叠片层平行堆积成多层结构,截面积呈角圆的三角形.     

家蚕表皮基因BmGCP2的克隆及表达谱分析

从家蚕(Bombyxmori)表皮中克隆了一个高丰度表达的基因,根据其编码的氨基酸序列特征,发现是一个富含甘氨酸的表皮蛋白,将该基因命名为BmGCP2(GenBank登录号:EU980611)。进一步对BmGCP2基因进行了组织表达谱和发育时期表达谱分析,发现该基因在家蚕表皮中特异高表达,并且这种高表达一直从家蚕的胚胎发育后期持续到蛾期,表明BmGCP2基因编码的表皮蛋白是家蚕外骨骼的重要组成成分之一。     

家蚕微孢子虫抗体免疫荧光检测方法的建立及应用

通过制备家蚕微孢子虫总蛋白多克隆抗体,建立了多克隆抗体免疫荧光检测方法(IFA),并利用此方法特异性地检测出了体外培养细胞系(家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1)中处于不同发育阶段的家蚕微孢子虫.结果在细胞爬片中可观察到呈较强的黄绿色荧光微孢子虫以及在BmE-SWU1细胞中的寄生分布情况,还可看到孢子极丝的弹出等现象.IFA检测方法鉴别诊断家蚕微粒子虫具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便等特点,可以广泛应用于微孢子虫形态学、流行病学以及蛋白质的定位等研究领域.     

农科研究生培养方法的调查与探讨

本文在对国内学术界具有培养研究生经验的知名专家、学者进行书面咨询的基础上,探讨了农科研究生的培养方法。培养方式要采取课程学习、科学研究和社会实践有机结合,要充分发挥研究生的主体性,体现个性教育;课程教学要以自学、专题讨论和适当的讲授相结合为主;考试宜采用开（闭）卷笔试＋专题（综述）报告的方式;提倡集体指导,充分发挥院（系）、研究所（室）的群体作用;研究生管理必须规范化,管理部门应具有服务意识。     

家蚕微孢子虫N.bombycis分离纯化方法的优化

对家蚕微孢子虫的分离纯化条件进行了探索。微孢子虫的分离，采用差速离心法或自然沉降法的效果均可。蔗糖平衡密度离心法的较优条件为50％－60％的蔗糖连续梯度、23000rpm离心30min,而Percoll法的最佳条件为25％、50％、75％和100％的Percoll不连续梯度、17500rpm离心20min；两种纯化方法相比较，Percoll法的效果为好。     

《40个基因组完全重测序揭示蚕的驯化事件及其相关基因》在线支撑材料

1材料与方法 1．1样品收集 为了囊括全世界实验室所保存的主要的蚕系统,我们收集了各种的地理区域的品系,如中国、日本、欧洲和热带地区（主要是东南亚：印度,柬埔寨和老挝）,和突变系统。列于表S1的29个家蚕品系来自中国西南大学蚕学与系统生物学研究所。     

昆虫sHSP基因的系统进化研究

低分子量热激蛋白 (sHSP)广泛存在于生物界 ,不同组织的sHSP是紧密相关的 ,主要的HSP具有高度保守的氨基酸序列 ,HSP基因的保守性可以为生物进化研究提供一定的科学依据。对昆虫纲的 2个目 4个种的sHSP进行了系统进化分析 ,它们在系统演化上形成两大分支 ,基本代表了其在经典分类上的地位 ;但Bmhsp 2 1.4与其它家蚕及昆虫sHSP在演化上存在极大的分歧 ,在进化上可将Bmhsp 2 1.4与其它 5种家蚕sHSP划分为两大类群 ,推测其在家蚕的演化分析中具有重要地位。另外 ,果蝇致死因子Dml(2 )efl与家蚕的 5种sHSP有更近的关系