导入额外拷贝nifA基因对费氏中华根瘤菌HN0 1NL根圈定殖与竞争结瘤的影响

本文研究了导入额外拷贝的肺炎克氏杆菌 (Klebsiellapneumoniae)nifA基因对受体费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobiumfredii)HN0 1在大豆根圈的定殖和竞争结瘤的影响。将HN0 1分别与带有标记基因luxAB的参照菌株HN0 1L和带有nifA基因和标记基因luxAB的重组菌株HN0 1NL按照 1∶1等量比例接种于大豆黑龙 3 3种子表面 ,在灭菌土和非灭菌土中研究其定殖动态。每一供试菌株在根圈中的比例依次于播种后第 3天、第 7天、第 1 0天、第 1 2天、第 1 4天、第 1 6天、第 2 1天和第 3 6天进行测定 ,占瘤率在播种后第 4 0天进行比较测定。盆栽实验结果表明 :导入了额外拷贝nifA基因的重组菌HN0 1NL与受体菌HN0 1和参照菌HN0 1L相比较 ,在灭菌土和非灭菌土中均表现出显著增强的大豆根圈适应性和竞争能力     

导入额外拷贝nifA基因对费氏中华根瘤菌HN01NL根圈定植与 …

本文研究了导入额外考贝的肺炎克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ｎｉｆＡ基因对受体费氏中会根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｓｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ）ＮＨ０１在碱啼根圈揎殖和竞争结瘤的影响。将ＮＨ０１分别与带有标记基因ｌｕｘＡＢ的参照菌株ＮＨ０１Ｌ和带有ｎｉｆＡ基因和标记基因ｌａｘＡＢ的重组菌株ＮＨ０１ＮＬ按照１：１等量比例接种于大豆黑龙３３种表面,在灭菌上和大量和上中研究其定殖动态。每一     

费氏中华根瘤菌内源质粒和大豆品种对菌株竞争结瘤能力及固氮效率的影响

 采用发光酶基因 (luxAB)标记技术 ,在无菌砂培条件下测定了费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobiumfredii)内源质粒和大豆品种对供试菌株竞争结瘤和固氮效率的影响。结果表明 ,供试菌株的固氮效率主要由共生质粒所决定 ;而竞争结瘤能力主要取决于其染色体所携带的基因 ,内源质粒 (包括共生质粒和非共生质粒 )对供试菌株竞争结瘤能力没有明显的影响。菌株的竞争结瘤能力对供试的大豆品种依赖性较小 ,品种对不同组合中的菌株竞争结瘤能力影响效果不同     

花生根瘤菌遗传多样性的RFLP分析

利用16S rRNA PCR-RFLP和16S-23S rRNA IGS PCR-RFLP技术对分离自我国不同地区的55株花生慢生根瘤菌和6株参比菌株进行了遗传多样性研究.16S rRNA PCR-RFLP分析结果表明,在63%的相似性水平上,91%的供试花生幔生根瘤菌与B.japonicum和B.elkanii聚在一起;16S-23S rRNA IGS PCR-RFLP分析结果表明,供试花生慢生根瘤菌具有较丰富的遗传多样性,在65.8%的相似性水平上可分为3大类群.     

PCR技术在快生型大豆根瘤菌菌株鉴别上的应用

以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠杆菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的总ＤＮＡ，得出了具有菌株特异性的扩增产物电泳图谱，称ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱，将所得图谱进行性状编码后，用计算机数值分类系统进行平均连锁聚类分析，得出这８个菌株的聚类树状图。这一聚类结果与用其它方法聚类结果基本一致，说明ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ是一种鉴别快生型大豆根瘤菌菌株的经济、快速而又可靠的新方法。     

根瘤菌质粒的研究进展

快生型根瘤菌中普遍存在1到多个数量不等的内源质粒(indigenous plasmid)。其中,含有根瘤菌结瘤和共生固氮所必需的基因的质粒被称之为共生质粒(pSym);其它的质粒被称为非共生质粒(non-pSym)。根瘤菌的内源质粒一般都非常稳定,能够在不同种属的根瘤菌之间和土壤杆菌中进行转移。根瘤菌质粒在转移、复制过程中可能发生重组等现象。本文综述了根瘤菌共生质粒和非共生质粒的功能,以及根瘤菌质粒的转移、复制等特性。     

用荧光酶基因(cfp)标记法研究菜豆根瘤菌的竞争性和有效性

试验采用三亲本杂交法将cfp基因导入一株有效性较高的菜豆根瘤菌SC18,获得了一株带cfp基因标记的菌株SC18-cfp。对SC18-cfp进行性状、标记基因的遗传稳定性检测,结果表明,cfp基因不仅能有效表达,而且性状稳定。随机挑取SC18-cfp的10个转移结合子在无氮砂培条件下进行标记菌株与亲本菌株在3个菜豆品种上的竞争结瘤试验。结果证实,10个转移结合子在供试植物根系上的占瘤率均接近50%,其有效性和竞争结瘤能力与亲本菌株间的差异不显著,品种间的差异性不显著;在控制田间试验中SC18-cfp比土著根瘤菌的竞争结瘤能力强,在品种A、B、C上的占瘤率分别达到了57.8%、60.0%、55.6%。接种SC18的植株干重、全氮量、叶绿素含量和豆荚产量均显著高于对照。     

华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)研究进展

综述了华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)遗传多样性、质粒多样性、质粒的功能、结瘤因子、结瘤基因、胞外多糖等方面的研究进展。这类菌只能在紫云英上结瘤,1997年并入Mesorhizobium。选取大量菌株进行REP-PCR、16S和23S rDNAPCR-RFLP等分析,揭示其分为16种16S rDNA基因型。选用不同16S rDNA基因型的部分代表菌株进行部分16S rDNA测序。能够在紫云英上结瘤的根瘤菌可以分为2个类群。表明这类菌具有遗传多样性,存在不同的种。它们多数含共生质粒,共生质粒定位于最大或次大质粒上,质粒数1~5个不等,其分子量范围在53~906 kb之间。质粒缺失菌株表现为不结瘤(Nod-)和结瘤而不固氮(Nod ,Nif-)。某些质粒缺失还影响LPS合成、抗酸性、竞争结瘤能力。其结瘤因子能诱导紫云英根毛变形,它们的结瘤因子结构类似于苜蓿根瘤菌的结瘤因子。它们的结瘤基因具独特性,nodA与nodBC分隔一定距离,且具有保守性。它们产生的胞外多糖在侵染结瘤过程中发挥重要作用。     

快生型根瘤菌营养生理的研究

本文研究了紫云英、苕子、三叶草和苜蓿根瘤菌共53个菌株对碳源、氮源和维生素的需要。研究表明: 1、甘露醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、山梨醇等是供试菌株合适的碳源,它们对山梨糖、葡萄糖酸钠、苹果酸钠、丙酮酸钠和琥珀酸钠的利用十分有限,而完全不能利用淀粉和糊精。2、硝酸钾、尿素、大多数氨基酸和蛋白胨是良好的氮源,而对铵盐和芳香族氨基酸则利用有限。3、根瘤菌对维生素的需要随根瘤菌的种、甚至菌株不同而异。就必需维生素而言,在9株紫云英根瘤菌中,103不需要任何维生素就能生长良好;7653只需要硫胺素;而其余7个菌株则同时需要硫胺素和烟酰胺。在14株苕子和12株三叶草根瘤菌中,只有7130需要硫胺素和泛酸钙,其余各菌株只需要泛酸钙。在18株苜蓿根瘤菌中,只有M_2需要泛酸钙,其余17个菌株不仅不需要任何维生素,而且生物素还明显地抑制其生长。除上述的必需维生素外,有些维生素对不同菌株有刺激作用或抑制作用。4、针对菌株营养需要,采用合成培养基进行大量培养,在成本和工效上都比目前采用的天然培养基优越。