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61.
2008年从临床鸽病例中分离到2株新城疫病毒毒株,经测定,鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为48h和46h,8周龄SPF鸡静脉接种指数(IVPI)分别为2.88和2.91,一日龄雏鸡脑内接种指数(IPCI)分别为1.88和1.89,按照OIE推荐的标准均为强毒株。RT-PCR扩增出融合蛋白(F)基因片段,测序,推导的氨基酸序列中蛋白酶裂解位点附近的氨基酸序列均符合强毒特征序列。根据F蛋白的部分基因序列绘制的系统进化发生树和F基因片段中3种限制性内切酶(RE)位点分布判定这2个毒株均为基因Ⅶc型。 相似文献
62.
在T4 RNA连接酶的作用下,将人工合成的锚引物直接与新城疫病毒(NDV)鹅源毒株ZJ1株的基因组5′末端的反转录产物及NDV基因组3′末端直接相连,然后用聚合酶链反应(PCR)和RT-PCR分别快速扩增基因组5′末端和3′末端,测序结果表明:3′末端的Leader序列为55nt,5′末端的trailer序列为114nt。将该序列与GenBank报道的NDV鸡源毒株的相应序列相比,XJ1株与6个鸡源NDV毒株的Leader和trailer序列的同源性分别为83.6%-92.7%和60.5%-63.2%。序列比较结果表明:该鹅源毒株与鸡源毒株在基因组3′端调控区有较高的同源性,而在基因组5′端的调控区同源性则较低。 相似文献
63.
SPF试验鸡在8、25日龄时接受了2次新城疫(ND)基础免疫,60日龄时分别以标准新城疫病毒(NDV)强毒株、中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ELISA试剂盒,对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了30d的连续检测。结果表明:从攻毒后第3d起强毒株试验组检测出多例阳性,检出高峰分别在攻毒后第4~6d和11~15d,与鸡群症状表现的时间相一致;中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ELISA试剂盒可以检测免疫鸡群中NDV强毒感染,为ND的监测提供了新手段。 相似文献
64.
为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中.8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1:256.rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性.本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础. 相似文献
65.
为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。 相似文献
66.
以H4亚型AIV分离株A/鸭/扬州/185/2003免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经血凝抑制(HI)试验筛选并克隆后,获得能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株:2C11、6E7、4C8和5C5。4株单抗腹水的HI效价在2~(12)~2~(15),单抗亚类均为IgG2a。4株单抗均能与感染了H4亚型AIV的MDCK细胞发生间接免疫荧光(IFA)反应。并且,均不与其他亚型AIV、NDV、IBV和EDS-76病毒发生HI反应。另外,4株单抗均能使病毒失去感染细胞的能力,显示出良好的中和特性。单抗HI反应谱表明,2C11、4C8、6E7和5C5分别可以抑制10株H4亚型AIV中9、8、7和7株病毒的血凝反应,且均不能抑制A/鸭/苏州/1/2002毒株的血凝作用。 相似文献
67.
68.
新城疫病毒F48E8株血凝素-神经氨酸酶基因的序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了新城疫病毒(NDV)中国标准强毒F48E8株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的核苷酸序列及据此推导的氨基醉序列。该基因长1860bp,编码区长1713bp,编码571个氨基酸。氨基酸序列中,有一由23个氨基酸组成的疏水性跨膜结构、13个半胱氨酸残基和5个可糖基化位点。F48E8株与Italien株、TexasGB株的氨基酸同源性分别为93.3%和91.1%。 相似文献
69.
AIV F株HA和NA全基因的扩增及序列比较 总被引:1,自引:2,他引:1
根据禽流感病毒(AIV)各基因片段两端保守区序列设计锚引物,应用cDNA末端快速扩增法获得了AIV分离株A/Chichen/Shanghai/F/98(N9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)全长基因。15个毒株的HA和NA序列比较结果表明:F株与Chicken/Beijing/1/94、Duck/HongKong/Y280/97同源率较高,为94.4%~97.4%,但与香港人流感病毒HongKong/1073/99、HongKong/1074/99及Quail/HongKong/G1/97同源率较低,为90.3%~91.9%。F株与Duck/HongKong/Y280/97的NA基因不但同源率高达97.4%,而且均在205位核苷酸之后缺失9个核苷酸。另外,30个毒株的HA基因cDNA比较结果显示,最后46个氨基酸的编码序列高度保守。 相似文献
70.
新城疫病毒F48E8株cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以新城疫病毒(NDV)中国标准强毒株为材料,分别用基因组RNA及poly(A)+mRNA为模板反转录合成cDNA。将cDNA通过同聚物加尾poly(dC)后克隆于末端加有poly(dG)的线性化质粒pGEM-3Zf(-)上,转化大肠杆菌TG1,经IPTG和X-gal筛选及电泳检查,其中有56个克隆含有大小在0.2~2.7kb范围的外源片段。斑点杂交鉴定有52个是NDVcDNA克隆,平均长度为1.31kb,从而构建了NDVcDNA文库。文库的统计学质量检验表明,拥有52个克隆的F48E8株cDNA文库可能覆盖NDV整个基因组 相似文献