鸡心包积水综合征疫苗研究进展

心包积水综合征是由I亚群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的一种新型鸡传染病。本病发病急,传播速度快,造成雏鸡的高死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。该病于1987年在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉首先被报道,我国最早于2013年有发病报道,2014年后在河南、山东、江苏等地流行。针对本病目前无特效疗法,疫苗免疫是防控本病的较好方法。在巴基斯坦等心包积水综合征早先流行比较严重的国家和地区,研制的自家疫苗对预防本病有一定效果,但是也存在保护效果不稳定、继发感染等风险;全病毒灭活疫苗安全性高,稳定性好,但成本较高。此外,活疫苗也展现出较好的防控效果,但存在毒力返强等问题,重组亚单位疫苗则因其安全、高效在未来具有良好的开发和应用前景。论文就鸡心包积水综合征疫苗的研究进展加以总结,以期为更好的防控本病提供参考。     

11型鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及致病性研究

从江苏某免疫鸭场的病死鸭中分离出l株细菌,经形态特性、生化试验、PCR扩增和血清型鉴定.证明该菌为血清11型的鸭疫里默氏杆菌(RA).人工感染试验显示,106CFU/mL RA经肌肉注射后可导致鸭发病死亡,病死鸭的多个脏器组织均可分离到细菌,而滴鼻接种引起症状所需的细菌剂量为108CFU/ML;对106CFU/mL细菌肌肉注射致死鸭的脏器进行细菌计数,以法氏囊的含菌量最高;病理学变化涉及心、肝、脾、肺、胰、脑、肠粘膜和法氏囊.结果表明,江苏地区存在新的RA血清型,法氏囊是该细菌感染的一个重要靶器官.     

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立

选择一种新型载体阳离子化牛血清白蛋白（CBSA）与半抗原盐酸克伦特罗（CL）进行偶联．鉴定后作为免疫原免疫Balb／C小鼠，同时以卵清白蛋白（OVA）与CL偶联制备筛选抗原。应用杂交瘤细胞融合技术筛选后获得了1株稳定分泌抗CL单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2H5。抗体的亚类为IgM，腹水及细胞上清间接ELISA效价分别为1：20480和1：320，通过竞争阻断实验证明其具有良好的特异性及敏感性，将半抗原经酶标后应用竞争ELISA方法初步建立了CL的检测方法，检测限可达1ng／mL，为进一步制备CL残留检测试剂盒打下了基础。     

动物源性沙门菌的血清型、生物被膜形成能力和耐药性分析

本研究旨在探讨动物源性沙门菌的血清型分布、生物被膜形成能力及其耐药性.从不同动物病料中分离细菌,以PCR方法鉴定沙门菌,结合玻片凝集法和16S rRNA序列测定确定沙门菌的血清型和分布,结晶紫染色定量法检测分离株的生物被膜形成能力,药敏试验检测分离菌对常用药物的敏感性.结果共分离鉴定出58株沙门菌,包括鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌和阿哥那沙门菌等7种血清型,其中鸡群以鸡白痢沙门菌感染为主,肠炎沙门菌次之;水禽以鼠伤寒沙门菌感染为主.生物被膜测定结果显示51.72％的沙门菌分离株可形成生物被膜,其中83.33％的鼠伤寒沙门菌可形成生物被膜.20种抗生素(氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、林可酰胺类、氯霉素类、青霉素类、四环素类和头孢菌素类)敏感性试验表明所有菌株对林可霉素耐药,51.72％对4种及其以上抗生素耐药,并出现了1株对所有受试抗生素均耐药的鼠伤寒沙门菌.结果表明鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是为目前在家禽中分离的优势血清型;同时具有生物被膜形成能力和多重耐药性的沙门菌将对家禽疾病控制和公共卫生带来更大的威胁.     

莱克多巴胺单克隆抗体间接竞争ELISA检测方法的建立

用混合酸酐法将莱克多巴胺(Rac)与匙孔蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测得偶联物Rac-KLH浓度为3.6 mg/mL,Rac-BSA浓度为6.2 mg/mL。以偶联物Rac-KLH作为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。以Rac-BSA作为包被抗原,经间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D9、1F3、2C11、5C3、3A10、4A8、6B7、6D5、7C11、7D3。其中单克隆抗体5C3和3A10间接ELISA效价1∶500 000,对莱克多巴胺的半数阻断浓度(IC50)均为3.98 ng/mL,对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的IC50均大于2 000 ng/mL;对盐酸克伦特罗和沙丁醇胺的交叉反应率均小于0.2%。间接竞争ELISA检测莱克多巴胺在0.5～100 ng/mL范围内为线性分布,确定的最低检测限为0.5 ng/mL。     

不同NA亚型H5禽流感疫苗在鸭群的免疫效力及母源抗体对免疫效力的影响

研究以H5N2和H5N1两种油乳灭活疫苗免疫鸭群对高致病性禽流感H5N1 AIV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明，在同等免疫剂量下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律三项指标综合评价来看，H5N1疫苗免疫组对高致病性禽流感H5N1流行株攻毒的保护效率较H5N2免疫组理想，故针对高致病性禽流感H5N1流行的情况，宜采用H5N1禽流感疫苗。水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

猪德尔塔冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

通过DNAStar Protean软件对猪德尔塔冠状病毒(porcine Deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白氨基酸序列进行分析,选取抗原性较强的区段(265～342 aa),根据大肠杆菌密码子使用的偏嗜性进行优化设计并人工合成了对应的基因片段N-Opti.利用融合表达载体pET-32a进行原核表达,获...     

免疫鸡群新城疫病毒强毒株感染的实验研究

ＳＰＦ试验鸡在８、２５日龄时接受了２次新城疫基础免疫，６０日龄时分别以标准新城疫病毒强毒株，中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒，对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了３０ｄ的连续检测。结果表明：从攻毒后第３ｄ起强毒株试验组检测出多例阳性，检出高峰分别在攻毒后第４￣６ｄ和１１￣１５ｄ，与鸡群症状表现的时间相一致；中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒     

非抗性RNAi载体及沙门氏菌递送系统的构建

为了获得一种新型、高效、安全的s iRNA片段的递送系统,应用PCR方法扩增的RNA i-R eady pS IREN-R etroQZsG reen载体中包含了U 6启动子的3.6 kb的产物,特产物与限制性内切酶B g lⅡ酶切平衡致死系统质粒PYA 3334所得的1.8 kb携带链球菌asd基因的DNA片段相连接,转化X 6212感受态细胞,通过平衡致死系统和抗性筛选得到非抗性的目的克隆。结果成功构建了非抗性RNA i载体,命名为pS IREN-A SD ZsG reen,并将此转化X 4550,最终获得稳定性的递送系统。该载体及减毒鼠伤寒沙门氏菌递送系统为今后RNA i干扰技术应用于动物病毒性疾病预防和控制的研究及转基因生物工程产品的研制打下了基础。     

鸭沙门菌耐药性及耐药基因的检测与分析

为检测徐州地区鸭沙门菌耐药表型与耐药基因的分布情况,通过对不同来源分离的56株鸭沙门菌,用Kirby-Bauer(K-B)法测定对20种抗菌药物的耐药性,并设计19对引物,对6大类耐药基因进行检测。抗生素耐药性试验结果表明,分离的沙门菌对20种抗生素具有不同的耐药率和多重耐药现象,单一抗生素以链霉素耐药率(98.2%)最高,其次是氨苄青霉素(94.6%),耐药表型主要为AStAC、ANStOCSx和AAKDOCSx。检测的19种耐药基因中,blaTEM-1、aad A1、aad A2、aph(3′)-Ⅱa、tetA、gyrA、Sul2、drfⅫ基因的检出率超过50%以上,没有检测到tetC基因,其中aadA1基因检出率(91.1%)最高,其次是blaTEM-1基因(83.9%),抗生素耐药基因检测与耐药表型基本相符。